中医肿瘤成长和转移实验

达 450 万之众。临床治疗肿瘤一般均根据中医辩证论治的观点,依据病人不 同的“证”,施以相应的方剂。阴虚的养阴,气虚的补气,血癖的化癖,但这种方法尚 缺乏相应基础实验的理论依据。同时在肿瘤的基础研究中,大多采用养阴、补气、 活血化癖等方药研究其对实验动物肿瘤生长及转移的影响。这些实验一般不考 虑动物的“证”,而且实验动物难以辩证,因此,此种实验方法不符合中医辩证论治的 基本理论,与临床差距较大。实验动物在荷瘤之前,并未赋予不同的“证”,因此相应 治疗方剂的疗效评价,亦有待进一步的探讨。因此,肿瘤研究过程中,应先使试验 动物均具有某一“证”,再选用相应的方药观察对肿瘤生长或转移的影响,只有这样 才符合祖国医学辩证论治的基本理论。另外,各种中医证型对于肿瘤的生长及转 移究竟有何影响,目前未见报道。因此,我们对不同中医证型与肿瘤生长及转移的 关系进行了研究,报道如一下。 1 实验材料 1.1 实验动物:雄性昆明种小鼠,105 只,体重 20 土 19,由山东医科大学实验动 物中心提供,普通级,动物合格证号:鲁动质字 200001002 号。 1.2 试验仪器:分析天平 光学仪器公司;研究显微镜,上海天平仪器厂;石蜡切片机,美国解剖显微镜,美 国光学仪器公司;激光多普勒微循环分析仪,天津津科公司生产。 1.3 试验药物: 甲状腺素,山东省充州生化制药厂,批号 9911 利血平注射液,上海医科大学红 旗制药厂,批号 990901;醋酸氢化考的松,中国上海信谊药厂,批号 990302;高分子 右旋糖昔,天津生化制品厂;胎盘兰,上海化学试剂站分装厂,批号:951205;苦味酸, 广东台山化工厂,批号:980502;戊巴比妥钠,上海化学试剂采购供应站分装厂,批号: 860122。 2 试验方法 2.1 中医证候模型的复制 2.1.1 阴虚动物模型的复制方法工: 采用甲状腺素合利血平模型:甲状腺素 1.smg,灌胃;利血平 0.01mg,臀部肌肉 注射,每日一次,连续七天。小白鼠经每天灌胃及注射后,出现体重减轻,身体瘦长, 躁动不安,出现阴虚证型的表现。 2.1.2 阳虚动物模型的复制方法 采用醋酸氢考模型:每只 0.75mg/日,臀部肌肉注射。每日一次,连续七天。小 白鼠经注射后,出现体重减轻,逐渐出现萎靡不振的现象,竖毛,毛不光洁,拱背少动, 反映迟钝。 2.1.3 血虚动物模型的复制方法义: 采用小鼠的球后静脉丛放血法:每日一次,每次 0.25ml,连续七天。使血红蛋 白含量降至 609/l 以下。小鼠经连续放血之后,出现精神萎靡行动迟缓,皮毛少光 泽,扎堆,眼裂变窄(闭目),眼睛色淡红,口唇苍白,耳尾苍白而凉,嗜睡,饮水增加,体重 减轻。通过直接的放血方法,降低动物的各种血细胞,使其表现血虚的有关证候。 2.1.4 血癖动物模型的复制方法: 采用高分子右旋糖昔模型:10%的高分子右旋糖昔,0.lml/109,尾静脉注射,每 日一次,连续三天。高分子右旋糖昔进入血流后导致血液粘滞性增加、机体容易 发生高粘滞血症,经激光多普勒微循环血流分析仪测定出现明显的周围微循环血 流量减少,微循环发生明显障碍。 2.1.5 脾虚动物模型的复制方法二 采用苦寒泻下法模型:喂饲大黄水浸煎液,每日喂药 1 次,每次 lml(每耐含生药 相当 19),连续七天。动物出现体重下降,便塘,脱肛,四肢不收、毛枯稿。 2.2 不同中医证候对肿瘤生长及转移的影响 2.2.1 对腹水瘤小鼠存活期的影响: 将试验动物随机分为六组,即空白对照组、阴虚组、阳虚组、血虚组、血疲 组、脾虚组,各组小鼠分别编号、称重。然后分别按上述方法进行造模处理,模型 稳定后,腹腔接种。选用小鼠肝癌踢,首先腹部皮肤消毒,剪开并拨去腹部皮肤,抽 吸腹水,放入无菌容器内,Hanks 液洗涤两次,镜检计数肿瘤细胞,调细胞浓度为 106/L。取肿瘤细胞悬液,胎盘兰染色,计数存活肿瘤细胞,存活肿瘤细胞数应大于 95%。腹水为乳白色之浓稠液体,若为黄色或红色表示存在继发感或腹腔出血则 应弃去不用。每只动物,腹部皮肤消毒,腹腔内接种制备好的腹水悬液 0.2ml。 2.2.2 小鼠实体型肝癌移植肿瘤生长的影响: H22 肿瘤细胞悬液的制备方法同上。造模动物腋下皮肤消毒,将制备的腹水 瘤悬液,腋下接种,每只 0.2ml。第 14 天处死动物,先称体重,后解剖皮下瘤块,称重。 分别取出肝、心、脾、肺、肾称重,并浸于 Bouin 氏液内染色,观察自发转移灶的 数目。将瘤块浸于 10%福尔马林进行固定,常规石蜡切片,进行组织形态学观察 DNA 定量分析、免疫组化。DNA 定量分析:参照国际细胞学会的 DNA 含量测定 与倍体分析推荐的标准。应用武汉同济医科大学研制的千屏影像 MPIAS 一 500 多媒体彩色病理图文分析仪进行 DNA 含量与倍体检测。将待测切片在高倍显微 镜下(x4 定位后),由电视摄像系统摄取细胞图像,作数字化处理后输入计算机系统, 蓝色产物采用 560run 滤过片,测定每张切片上任意 5 个视野内每个细胞的积分 光密度(IOD 值),以同切片内成熟淋巴细胞(50 个以上)的 IOD 值作正常 2 倍体对 照。所有切片均在统一的背底,倍体条件下完成。检测指标:DNA 倍体分析,根据 各种细胞的 DNA 含量,将 DNA 直方图分解为 2 倍体(ZC),3),3 一 4 倍体(3 一 4C),3),5 倍 体(SC),3)以及异倍体(AN),观察 DNA 含量的峰值、分布区域,分析各组间 DNA 倍体 分布的差异,并计算每组动物 DNA 异倍体的发生率(AN%)。 中药治疗对不同中医证型小鼠肿瘤生长及转移的影响 肿瘤是目前危害人类健康最严重疾病之一,尚缺乏有效的防治措施。目前,中 医中药在肿瘤的防治中,取得了较好的临床效果,越来越受到人们的重视。临床治 疗肿瘤一般均根据中医辩证论治的观点,依据病人不同的“证”,施以相应的方剂。 阴虚的养阴,气虚的补气,癖血的化疲,但这种方法尚缺乏相应基础实验的理论依 据。同时在肿瘤的基础研究中,大多采用养阴、补气、活血化癖等方药研究其对 实验动物肿瘤生长及转移的影响。这些实验一般不考虑动物的“证”,而且实验动 物难以辩证,因此,此种实验方法不符合中医辩证论治的基本理论,与临床差距较 大。因此,肿瘤研究过程中,应先使试验动物均具有某一“证”,再选用相应的方药观 察对肿瘤生长或转移的影响,只有这样才符合祖国医学辩证论治的基本理论。因 此,本实验县复制实验动物的模型。 1 实验材料 1.1 实验动物:雄性昆明种小鼠,体重 20 士 lg,有山东医科大学实验动物中心提 供,普通级,动物合格证号:鲁动质字 200001002 号。 1.2 试验仪器: 分析天平,上海天平仪器厂;石蜡切片机,美国光学仪器公司;研究显微镜,解剖 显微镜,美国光学仪器公司:激光多普勒微循环分析仪,天津津科公司生产。 1.3 试验药物: 甲状腺素,山东省充州生化制药厂,批号 9911 利血平注射液,上海医科大学红 旗制药厂,批号 990901;醋酸氢化考的松,中国上海信谊药厂,批号 990302;高分子 右旋糖昔,天津生化制品厂;胎盘兰,上海化学试剂站分装厂,批号:951205;苦味酸, 广东台山化工厂,批号:980502;戊巴比妥钠,上海化学试剂采购供应站分装厂,批号: 860122。归附地黄丸,济南宏济堂制药有限公司生产,批号:20000801;六味地黄 丸,济南宏济堂制药有限公司生产,批号:20000824:血府逐癖胶囊,吉林省辉南挥 发制药股份有限公司生产,批号:991101。 一、不同中医证型对肿瘤生长及转移相关性的影响……3 二、中药治疗对不同中医证型小鼠肿瘤生长及转移的影响…20 三、综述…………………………24 总结 总之,转移的形成取决于诸多因素。活血化癖药可以从许多方面抑制肿瘤细 胞的转移。随着对肿瘤转移机制的深入研究,可进一步揭示活血化疲中药抗肿瘤 转移机理。为临床提供疗效可靠、无明显毒副作用的抗转移药物。 参考文献 1.孙静,张栋.益气养阴方对白血病小鼠 P53 基因表达的影响.山东中医药大学 学报,2001:25(l):64 2.刘彤,王耐勤,董坚.扶正抗癌口服液抗肿瘤作用及对淋巴细胞功能的影响.中 成药,1996;18(1):36 书 7 3.薛雨芳,李振波,陈群.活血化疲方药对恶性肿瘤血行转移的影响.中国中医基 础医学杂志,1998,4(6):42 一 45 4.郑小伟.中医实验动物模型方法学,上海:上海中医药大学出版社,1999 年 7 月,第一版 5.张伯臾.中医内科学,上海:上海科学技术出版社,1985 年 10 月,第一版:187 6.张伯臾中医内科学,上海:上海科学技术出版社,1985 年 10 月,第一版:139 7.方药中;邓铁涛:李克光等.实用中医内科学,上海:上海科学技术出版社,1985 年 8 月,第一版:621 8.刘光元;丁沧清;吴家梁.中医扶正法配合介入化疗治疗肺癌 38 例.辽宁中医 杂志,1996;23(10):453 9.朱长瑞;何保军;王江涛.中医药辨证治疗原发性肝癌 38 例:附中医药治疗组 16 例.辽宁中医杂志,1996;23(4):168 10.刘鲁明;钱华;陈震.参麦注射液抗肿瘤作用的初步实验研究.中国实验方剂 学杂志,1996,2(4):11 一 14