列精海鞘化学成分研究论文

【摘要】目的研究列精海鞘 Amarouciumsp.的化学成分。方法采用多种分离技术对 列精海鞘乙醇提取物的正丁醇部位分离纯化，根据其理化数据和光谱数据进行结构鉴定。 结果分离得到 5 个化合物，结构鉴定为尿嘧啶、胸腺嘧啶、尿嘧啶核苷、尿嘧啶脱氧核苷 和胸腺嘧啶脱氧核苷。结论以上 5 个化合物均为首次从该海洋动物中分离得到。 【关键词】海鞘列精海鞘化学成分结构鉴定 海鞘(Ascidian)Ascidian))属于原索动物海鞘纲。近年的研究表明，海鞘中含有许多结构奇特的 生理活性物质，是人类可以利用的重要生物资源。目前，已从海鞘中分离得到多种结构复 杂多变的活性成分，如大环内酯［1］和生物碱［2］等，这些化合物大多数都具有强烈的 生理活性。因此，海鞘中生理活性成分的研究越来越受到众多研究者的重视。我国海鞘资 源丰富，种类繁多，目前已经对多种海鞘进行了化学成分研究［3～7］。本文首次报道采 自青岛海域的列精海鞘 Amarouciumsp.的化学成分，从中分离得到 5 个核苷类化合物， 应用 IR，MS，1HNMR，13CNMR 等现代波谱学方法确定了它们的化学结构，分别为尿 嘧啶①，胸腺嘧啶②，尿嘧啶核苷③，尿嘧啶脱氧核苷④和胸腺嘧啶脱氧核苷⑤。 1 器材 XT-4 显微熔点测定仪，Nicoletimpact400 型傅立叶变换红外光谱仪，In)ova300 型 核磁共振仪，Autospec-UltimaETOF 型质谱仪，BüCHIB-687 型中压柱色谱仪，薄层色 谱硅胶 GF254 和柱色谱硅胶(Ascidian)160-200 目)均为青岛海洋化工有限公司产品，凝胶 SephadexLH-20 为 Pharmacia 公司产品，所用其他试剂为分析纯。 2 方法 列精海鞘(Ascidian)湿重 3kg))于 2002-01 采自青岛附近海域，由中国科学院海洋所黄修明研究 员鉴定。新鲜样品切碎后用 95%的乙醇室温浸泡提取 3 次，48h/次，提取液合并，减压 浓缩得褐色浸膏 201g)。将浸膏悬浮于 2000ml 蒸馏水中，依次用醋酸乙酯 （2000ml×3）和正丁醇萃取和正丁醇萃取(Ascidian)2000ml×3)，浓缩得醋酸乙酯萃取物 14.3g)，正丁醇萃取 物 45.3g)。正丁醇部分进行中压反相硅胶柱色谱分离，以 H2O-CH3OH 梯度洗脱。H2OCH3OH(Ascidian)2∶1)洗脱部分经过凝胶 SephadexLH-20 和正相硅胶柱层析分离纯化得到化合物 1～5。 3 结果与讨论 化合物 1：白色结晶,mp335mp335～337℃;IRKBrνmax(cm-max(Ascidian)cm1):3100,mp3352930,mp3352852,mp3351985,mp3351708,mp3351500,mp3351448,mp3351411,mp3351386,mp3351232,mp335991,mp335823,mp335760;FABMS:111［M-1］－;1HNMR(Ascidian)DMSOd6)δ:11.0(Ascidian)s,mp3351H),mp33510.8(Ascidian)s,mp3351H),mp3357.37(Ascidian)d,mp335J=7.8Hz,mp3351H),mp3355.43(Ascidian)d,mp335J=7.8Hz,mp3351H);13CNMR(Ascidian)D MSO-d6)δ:152.1(Ascidian)s),mp335165.0(Ascidian)s),mp335142.8(Ascidian)d),mp335100.9(Ascidian)d)。以上波谱数据与文献［8］中尿嘧 啶的数据一致。 化合物 2：白色结晶,mp335mp315～317℃;IRKBrνmax(cm-max(Ascidian)cm1):3207,mp3353062,mp3352929,mp3351732,mp3351676,mp3351483,mp3351446,mp335814,mp335762;FAB-MS:125［M-1］ －;1HNMR(Ascidian)DMSO-d6)δ:10.99,mp335 (Ascidian)s,mp3351H),mp33510.57(Ascidian)s,mp3351H),mp3357.24(Ascidian)s,mp3351H),mp3351.71(Ascidian)s ，3H);13CNMR(Ascidian)DMSOd6)δ:164.8(Ascidian)s),mp335151.3(Ascidian)s),mp335137.5(Ascidian)d),mp335107.7(Ascidian)s),mp33511.7(Ascidian)q))。化合物 2 的波谱数据与文献 ［8］中胸腺嘧啶的数据一致。 化合物 3：白色结晶,mp335mp192～193℃;IRKBrνmax(cm-max(Ascidian)cm1):3350,mp3352925,mp3352802,mp3351697,mp3351682,mp3351668,mp3351269,mp3351209,mp3351097,mp3351055,mp335982,mp335906,mp335831,mp335768;F AB-MS:243［M-1］－;1HNMR(Ascidian)DMSOd6)δ:11.3(Ascidian)s),mp3357.87(Ascidian)d,mp335J=8.1Hz,mp3351H),mp3355.63(Ascidian)d,mp335J=8.1Hz,mp3351H),mp3355.76(Ascidian)d,mp335J=5.7Hz,mp3351H),mp3355.09(Ascidian) m,mp3351H),mp3354.01(Ascidian)m,mp3351H),mp3353.95(Ascidian)m,mp3351H),mp3353.58(Ascidian)m,mp3352H);13CNMR(Ascidian)DMSOd6)δ:151.4(Ascidian)s),mp335163.8(Ascidian)s),mp335102.4(Ascidian)d),mp335141.4(Ascidian)d),mp33588.3(Ascidian)d),mp33570.5(Ascidian)d),mp33574.1(Ascidian)d),mp33585.5(Ascidian)d),mp33561.4(Ascidian) t)。由此推断化合物 3 为尿嘧啶核苷。化合物 3 的以上波谱数据与文献［9］中尿嘧啶核苷 的数据一致。 化合物 4：白色结晶,mp335mp:163～164℃;IRKBrνmax(cm-max(Ascidian)cm1):3269,mp3353001,mp3352933,mp3352804,mp3351701,mp3351674,mp3351468,mp3351392,mp3351263,mp3351057,mp335960,mp335860,mp335766;FABMS:227［M-1］－;1HNMR(Ascidian)DMSOd6)δ:11.27(Ascidian)s,mp3351H),mp3357.83(Ascidian)d,mp335J=8.1Hz,mp3351H),mp3355.62(Ascidian)d,mp335J=8.1Hz,mp3351H),mp3356.14(Ascidian)t,mp335J=6.9Hz,mp3351H),mp3354. 20(Ascidian)m,mp3351H),mp3353.75(Ascidian)m,mp3351H),mp3353.52(Ascidian)m,mp3352H),mp3352.06(Ascidian)m,mp3352H);13CNMR(Ascidian)DMSOd6)δ:151.0(Ascidian)s),mp335163.7(Ascidian)s),mp335102.4(Ascidian)d),mp335141.2(Ascidian)d),mp33588.0(Ascidian)d),mp33540.1(Ascidian)t),mp33571.0(Ascidian)d),mp33584.8(Ascidian)d),mp33561.8(Ascidian)t )。因此，推断化合物 4 为尿嘧啶脱氧核苷。化合物 4 的以上波谱数据与尿嘧啶脱氧核苷的 文献［10］数据一致。 化合物 5：白色结晶,mp335mp;185～187℃;IRKBrνmax(cm-max(Ascidian)cm1):3311,mp3353024,mp3352837,mp3351709,mp3351699,mp3351660,mp3351477,mp3351435,mp3351273,mp3351120,mp3351066,mp3351011,mp335958,mp33585 2,mp335758;FAB-MS:241［M-1］－;1HNMR(Ascidian)DMSOd6)δ:11.3(Ascidian)s),mp3357.68(Ascidian)s,mp3351H),mp3356.15(Ascidian)t,mp335J=6.9Hz,mp3351H),mp3354.21(Ascidian)m,mp3351H),mp3353.74(Ascidian)m,mp3351H),mp3353.56(Ascidian)m,mp3352H) ,mp3352.07(Ascidian)m,mp3352H),mp3351.76(Ascidian)s,mp3353H);13CNMR(Ascidian)DMSOd6)δ:150.4(Ascidian)s),mp335163.7(Ascidian)s),mp335109.4(Ascidian)s),mp335136.2(Ascidian)d),mp33512.3(Ascidian)q)),mp33587.2(Ascidian)d),mp33539.7(Ascidian)t),mp33570.4(Ascidian)d),mp33583.7(Ascidian)d ),mp33561.3(Ascidian)t)。因此，确定化合物 5 为胸腺嘧啶脱氧核苷。以上波谱数据与文献［10］中胸腺 嘧啶脱氧核苷的数据一致。 【摘要】目的采用系统预试法对银合欢种子可能的化学成分进行预实验，初步探索银 合欢种子的化学成分。方法采用试管反应法，对银合欢种子的石油醚、水、95%乙醇提取 物进行研究，通过多种指示剂和显色剂的沉淀反应或颜色反应,mp335对银合欢种子可能含有的化 学成分进行初步研究。结果银合欢种子中可能含有氨基酸、糖、有机酸、皂苷、黄酮类、 酚类、强心苷、生物碱和挥发油等化学成分。结论初步确定银合欢种子含有多种有效成分， 为银合欢种子的进一步开发利用提供了实验基础。 【关键词】银合欢种子；预实验；化学成分 Abstract： ObjectiveToiden)tifythechemicalcompon)en)tsofLeucaen)aleucocephala(Ascidian)Lam.)de Witseedsusin)g)comprehen)siveprelimin)arytests.MethodsThemixturewasextract edfromLeucaen)aleucocephala(Ascidian)Lam.)deWitseedswithpetrolether,mp335purifiedwatera n)d95%ethan)olwasstudiedusin)g)testtubemethod.Thechemicalcompon)en)tsofLeu caen)aleucocephala(Ascidian)Lam.)deWitseedswereprelimin)arilydemon)stratedusin)g)prec ipitation)reaction)an)dcolorreaction)ofmultiplein)dicators.ResultsLeucaen)aleucoce phala(Ascidian)Lam.)deWitseedsmig)htcon)tain)amin)oacids,mp335sug)ar,mp335org)an)icacid,mp335sapaomin)s,mp335 flavon)oids,mp335phen)ol,mp335cardiacg)lycosides,mp335alkaloidsan)dvolatileoil.Con)clusion)Therese archprovidesfoun)dation)forfurtherstudyan)dapplication)ofLeucaen)aleucocephala (Ascidian)Lam.)deWitseeds. Keywords： SeedsofLeucaen)aleucocephala(Ascidian)Lam.)deWit;Prelimin)arytest;ChemicalCompon)e n)ts 银合欢 Leucaen)aleucocephalaLam.deWait 为多年生豆科木本植物，在我国南方 地区资源非常丰富，叶子富含蛋白质，可用于制备动物饲料［1］，种子作为广西壮族民 间习用药材，用于治疗糖尿病［2］。目前国内外对银合欢种子化学成分的研究暂处于基 础研究阶段，未见有银合欢种子化学成分研究的文献报道，仅见广西中医学院李学坚等 ［3，4］从银合欢种子和叶子中分别提取总黄酮并进行降血糖和抑菌、利尿作用研究和总 生物碱保肝降酶作用的研究。此药在民间多有使用，但此前还没有相关化学成分的文献报 道，所以本实验首次对银合欢种子的化学成分进行了预实验，以明确其中可能的化学成分， 为以后的研究和开发利用提供依据。 1 材料与仪器 1.1 药材银合欢种子（采自广西南宁市三塘镇）和正丁醇萃取经广西中医学院刘寿养教授鉴别为 Leucaen)aleucocephala(Ascidian)Lam.)deWit 的成熟种子。 1.2 试剂 95%乙醇 A·R，上海市化学试剂有限公司产品，批号 0060829；石油醚 A·R，广东汕头西陇化工厂产品；去离子水（自制）和正丁醇萃取；其余试剂（茚三酮试剂，双缩脲试 剂，Fehlin)g) 试剂，α-萘酚，氯化钠明胶试剂，三氯化铁试液，碘化汞钾试液，碘化铋钾 试液，硅钨酸试液，苦味酸试剂，盐酸-镁粉试剂，三氯化铝试液，醋酸镁试液，3,mp3355-二硝 基苯甲酸，亚硝酰铁氰化钠试剂，硼酸试液，异羟肟酸铁试液等）和正丁醇萃取自配。 1.3 仪器电热恒温水浴锅，北京市意成科技开发公司产品；DHG-9241 型电热恒温干 燥箱，上海精宏实验设备有限公司产品；电子万用炉，天津市泰斯特仪器有限公司产品； HC-TP11-1 架盘药物天平，上海精科天平产品；ZF-2 型三用紫外仪，上海市安亭电子仪 器厂产品；UPK-Ⅰ 型优普超纯水机，成都超纯科技有限公司产品。 2 方法与结果 将银合欢种子经样品制备后采用试管预试法进行实验。根据供试液可能含有的化学成 分类型，选择各类成分特有的化学反应如颜色反应、沉淀反应等做一般定性预试。 2.1 样品制备取一定量的银合欢种子，自然晒干，粉碎成粗粉即为实验品粗粉。 2.1.1 水供试液制备称取实验品粗粉 30g)，置具塞锥形瓶中，加入蒸馏水 300ml，不 时振摇,mp335浸渍 24h，滤过，取滤液即得冷水供试液。剩余药渣在 60℃水浴上加热 30min)， 过滤，即得热水供试液。 2.1.2 石油醚供试液制备取实验品粗粉 30g)，置烧杯中，加入石油醚（60～ 90℃）和正丁醇萃取300ml，密闭，室温放置 2h 后滤过，滤液置于蒸发皿中浓缩后即得。 2.1.3 乙醇供试液、酸水供试液制备取实验品粗粉 50g)，置圆底烧瓶中，加入 95%乙 醇 500ml，于水浴上加热回流 1h，放冷，过滤，即得。取 1/2 为乙醇供试液。剩余 1/2 醇液，倾入蒸发皿中，置水浴上继续加热至无醇味，放冷加入 5%盐酸溶液，摇匀，滤过， 取滤液即得酸水供试液。 2.2 化学成分预实验 2.2.1 冷水供试液作氨基酸、多肽、蛋白质检查结果见表 1。 2.2.2 热水供试液作糖、多糖、皂苷、苷类，鞣质、有机酸等检查结果见表 1。 表 1 水提取液预实验结果（略）和正丁醇萃取 “+”示有此反应；“++”示此反应显著；“-”示无反应 2.2.3 乙醇供试液作黄酮、蒽醌、酚、苷、香豆素、内酯、萜类、强心苷甾体等检查 结果见表 2。 2.2.4 酸水供试液作生物碱的检查结果见表 2。 表 295%乙醇提取液预实验结果（略）和正丁醇萃取 “+”示有此反应；“++”示反应显著；“-”示无反应 2.2.5 石油醚供试液的挥发油、油脂检查结果见表 3。 表 3 石油醚提取液预实验结果（略）和正丁醇萃取 “+”表示有此反应；“++”表示反应显著；“-”表示无此反应 3 讨论 以上实验结果表明，银合欢种子中可能含有氨基酸、糖、有机酸、皂苷、黄酮类、酚 类、强心苷、生物碱和挥发油等化学成分。 本文首次对银合欢种子进行了化学成分预实验，初步确定了其可能的含有的化学成分， 为进一步进行该植物生物活性成分的确定、提取、分离、纯化研究提供了研究基础。