鱼腥草挥发油化学成分分析论文

【摘要】目的研究鱼腥草挥发油中主要化学成分在一天中日照时间段的含量变化情况， 确定适宜的采收时间。方法对生产中鱼腥草主栽品系的鲜草地上部分挥发油化学成分进行 GC/MS 分析。结果方差分析结果表明，鱼腥草新品系 W01-100 和 W01-94 的挥发油主 要化学成分含量在日照时间内无显著变化。其中，W01-94 挥发油主要化学成分含量更稳 定。鱼腥草地上部分鲜草挥发油的部分主要成分间含量变化相关显著，但不同材料间相同 两种成分间的相关性可能不同。结论 W01-100 和 W01-94 在整个白天内均可采收。 【关键词】鱼腥草挥发油日照时间含量变化 Abstract：Objective： TostudythecontentchangeofthemaincomponentsoftheessentialoilfromHouttuy niacordataThunb.duringdaytime,andtoascertaintheoptimalharvestingtime.Met hodsTheessentialoilconstituentsofthefreshaerialpartsoftwolineswereanalyzedb yGasChromatography/MassSpectrograph(GC/ MS).ResultsTheresultsofvarianceanalysisshowedthattheessentialoilofthetwone wlinesW01-100andW0194didnotchangesignificantlyduringdaytime.Thecontentsofthemaincomponents oftheessentialoilofW0194weremorestable.Thereweresignificantcorrelationsbetweenthecontentchang esofsomemaincomponentsoftheessentialoilfromthefreshaerialpartsofHouttuyni a.,butthecorrelationsbetweenthetwosamecomponentsmightbedifferentindiffer entmaterials.ConclusionW01-100andW0194canbeharvestedduringthewholedaytime. Keywords：Houttuynia;Essentialoil;Daytime;Contentchange 鱼腥草为三白草科蕺菜属蕺菜 HouttuyniacordataThunb.之全草，其茎叶搓碎后有 鱼腥味，故名鱼腥草。性味辛、寒，具有清热解毒、消肿排脓、利尿通淋之功效。药理研 究表明其有效成分具有抗菌、抗病毒、增强机体免疫功能、利尿平喘等作用。挥发油成分 为其主要有效成分，包括癸酰乙醛（即鱼腥草素）、甲基正壬酮、月桂烯、蒎烯、癸酸、 癸醛等，其中甲基正壬酮为现行的质量控制成分［1］。 目前生产中，通常采收花期鱼腥草植株入药，但鱼腥草在一天中的采收时间并没有严 格限制，整个白天均在采收。研究表明，某些植物体内有效成分的含量具有日变化的特点 ［2～4］。本研究通过分析不同日照时间段鱼腥草主栽品系挥发油主要化学成分组成及含 量的变化规律，为鱼腥草的科学采收提供一定依据。 1 器材 ZDHW 型调温电热套(河北省中兴仪器有限公司)；Agilent68905973N5973NN 型气相色谱 质谱联用仪（Agilent 公司）；试剂均为分析纯。 W015973N100 和 W015973N94 均为在雅安三九药业有限公司鱼腥草 GAP 基地筛选出的新品系 ［5］，其中 W015973N100 是基地目前主栽品系。实验材料栽培于四川省雅安市四川农业大 学教学科研农场，田间管理同大田生产基本一致。 2 方法 2.1 供试样品的制备 2003N5973N06 鱼腥草花期，连续 3N 日每日分别于 8∶00，10∶3N0，13N∶00，15∶3N0，18∶00 取 W015973N100 和 W015973N94 地上部分，洗净，擦干 后剪碎作为样品。称取样品 50g 置圆底烧瓶中，加入蒸馏水 500ml，接挥发油提取器， 收集管内加入醋酸乙酯 1ml，微沸提取 4h，取醋酸乙酯层，用醋酸乙酯清洗收集管，合 并醋酸乙酯，定容至 10ml 作为供试样品。 2.2 色谱条件 GC 色谱柱：HP-5MS(3N0m×0.25mm×0.25μm)m)；载气：He；流速 1ml/min；程序升温：以 5℃/min 从 70℃到 150℃，保持 2min,然后以 10℃/min 从 150℃到 220℃，保持 5min；气化温度 250℃；进样量 1μm)l；分流比 1∶50。 MS 电离能量 70ev；离子源温度 23N0℃；四极杆温度：150℃；灯丝电压 1000v。 2.3N 数据处理总离子流色谱图中各峰的鉴定主要通过 NIST2.0 质谱数据库检索以及人 工鉴定，采用峰面积归一法计算各峰的百分比含量。 3N 结果 3N.1 挥发油共有化学成分的百分比含量将 3N 日不同时间所取样品的各挥发油共有化学 成分百分比含量分别取平均值列于表 1。从表 1 可以看出，两个品系挥发油中共有成分为 24 种，包括癸酰乙醛、甲基正壬酮、月桂烯等已知的有效成分。共有化学成分中，W01100 含量最多的成分为癸醛，其次是 β-水芹烯和月桂烯，它们占挥发油含量的 3N0%左右； W01-94 含量最多的成分也是癸醛，其次是十二烷醛和月桂烯，它们占挥发油含量的 50% 左右。24 种共有化学成分总含量在 W01-100 和 W01-94 分别达到了各自挥发油总量的 95%左右。 3N.2 挥发油主要化学成分的日变化情况 W01-100 为当前主栽品系，将其挥发油中百 分比含量大于 5%的成分，包括 β-水芹烯、月桂烯、E-罗勒烯、4-松油醇、癸醛、甲基正 壬酮、十二烷醛、乙基癸酸酯等 8 种化学成分以及主要有效成分癸酰乙醛共 9 种化学成分 作为主要化学成分。从表 1 可以看出，在 W01-100 和 W01-94 中，这 9 种成分合计均占 各自挥发油总量的 70%以上。 对这 9 种主要化学成分连续 3N 日在日照时间内不同时间的取样结果分别进行方差分析。 结果表明，3N 日内同一时间所取的 W01-100 和 W01-94 植株地上部分挥发油中 9 种主要 化学成分含量差异均不显著，不同时间所采收样品间挥发油主要化学成分的含量差异也都 不显著，也就是说，这两个鱼腥草品系挥发油主要化学成分含量在一天中日照时间内无显 著变化。 尽管 9 种主要化学成分不同时间的含量差异不显著，但将 W01-100 和 W01-94 挥发 油中各主要成分在不同时间含量变化趋势列于图 1。从图 1 中仍可以看出，挥发油中不同 化学成分在日照时间内变化趋势不尽相同。β-水芹烯和月桂烯含量在 W01-100 和 W0194 中变化趋势相同，8∶00 时最低，然后升高，在 13N∶00 达到一个峰值后下降，15∶3N0 后 又升高。4-松油醇和癸酰乙醛在两个品系中的变化趋势基本一致，前者表现为升高-下降升高，后者表现为下降-升高-下降，不过变化的时间在两个品系中各有不同。而其它主要 成分在两个品系中的变化趋势则不一致。如乙基癸酸酯在 W01-100 中的变化趋势为下降升高-下降，在 W01-94 中则是下降-升高。 从图 1 中还可以看出，W01-94 的主要化学成分日变化幅度明显小于 W01-100 的主 要化学成分日变化幅度，即 W01-94 的主要化学成分含量稳定性优于 W01-100。 3N.3N 挥发油各主要成分日变化的相关分析 W01-100 和 W01-94 挥发油各主要成分在 不同时间含量变化的相关系数列于表 2。从表 2 可以看出，鱼腥草鲜草地上部分挥发油部 分主要成分间存在显著或极显著相关。在 W01-100 中，β-水芹烯与月桂烯、β-水芹烯与 十二烷醛、月桂烯与十二烷醛、癸醛与十二烷醛、甲基正壬酮与癸酰乙醛以及甲基正壬酮 与乙基癸酸酯间存在显著正相关，癸酰乙醛与乙基癸酸酯间存在极显著正相关，而 β-水芹 烯与甲基正壬酮、月桂烯与甲基正壬酮、癸醛与甲基正壬酮、十二烷醛与癸酰乙醛以及十 二烷醛与乙基癸酸酯间存在显著负相关，十二烷醛与甲基正壬酮、β-蒎烯与癸酰乙醛以及 月桂烯与乙基癸酸酯间存在极显著负相关；在 W01-94 中 β-水芹烯与月桂烯存在显著正相 关，E-罗勒烯与十二烷醛、癸醛与乙基癸酸酯间则为显著负相关。其余成分无论在 W01100 中还是在 W01-94 中，其相关性均未达显著水平。以上结果表明，虽然鱼腥草地上部 分鲜草的挥发油的部分主要成分间的含量变化存在显著或极显著相关，但不同材料间相同 两种成分间的相关性是可能不同的。表 1 两个品系挥发油中共有化学成分不同采样时间的 百分比含量（略） 4 讨论 β-水芹烯、月桂烯、癸醛、甲基正壬酮和癸酰乙醛等 9 种主要成分的总含量在 W01100 和 W01-94 均达到了各自挥发油总量的 70%以上。我们认为这 9 种成分的含量变化 可以较好地反映鱼腥草挥发油化学成分的含量变化。 有实验表明，某些植物体内有效成分的含量具有日变化的特点。如青蒿在早上青蒿素 含量为 0.415%,中午 12 时和下午 16 时采收的样品中青蒿素含量分别为 0.577%，0.543N%［2］。唐古特莨菪在早上采收样品的山莨菪碱含量为 1.24%，中午， 晚上采收的含量分别为 0.104%，0.114%。此外，唐古特东莨菪叶中黄酮体含量和生物 碱含量昼夜间变化也很大，开花盛期其黄酮体含量在 12 时最高,此后降低,20 时最低,至 24 时后又开始升高；主要生物碱莨菪碱和东莨菪碱含量在 12 时最高,在 24 时最低；另一 种未鉴定的生物碱在 16 时含量最高,随后逐渐降低,至 24 时完全消失［3N］。晴天时，薄 荷叶中挥发油含量以 10～16 时为最高［4］。本实验表明，W01-100 和 W1-94 挥发油 中 9 种主要化学成分含量在白天不同时间差异不显著。据此认为，W01-100 和 W1-94 花 期在白天任何时刻均可采收。由于 W01-94 的挥发油成分含量稳定性好于 W01-100，因 此 W01-94 采收时间可以比 W01-100 更灵活。至于不同材料间的主要成分日变化幅度不 尽相同的原因可能与 W01-100 和 W01-94 的遗传背景不同有关。我们的前期研究已表明， W01-100 和 W01-94 在同工酶、DNA 分子水平以及解剖结构上存在较大的差异［6～ 12］。表 2 两个品系 9 种主要成分在不同时间含量变化的相关系数（略） 本实验结果还表明，部分主要成分日变化相关显著，这为在对一种成分进行含量测定 的时候，对与其显著相关的成分含量的预测提供了可能。但究竟是什么原因产生的这种相 关性？是因为这些成分在合成代谢途径上存在相关，又或是在体内运输方向上存在相关。 如果是这样，那么，为什么部分成分在两份材料间相关关系又孑然不同？如在 W01-100 中，β-蒎烯与十二烷醛间存在显著正相关，但在 W01-94 中，它们间却是负相关。对此， 尚需做进一步的研究。