盐酸小檗碱含量判断方式

盐酸小檗碱为抗菌药，主要用于志贺菌属、霍乱弧菌等敏感病原菌所致的胃肠炎、细 菌性痢疾等肠道感染。盐酸小檗碱为《中国药典》收载品种，含量测定《中国药典》2005 年版二部对其原料药采用容量法，制剂采用高效液相色谱法，有效地控制了该药的质量。 盐酸小檗碱常制成各种复方制剂和多种剂型广泛应用于临床。对盐酸小檗碱及其复方制剂 中盐酸小檗碱含量测定方法研究的文献较多，现就近年来研究的含量分析方法作一概述。 1 紫外-可见分光光度法（UV） UV 法由于具有灵敏度和精密度较高，操作简便、快速等特点，广泛用于各种药物制 剂的分析中。贺子华[1]分别采用容量法、UV 法和高效液相色谱法（HPLC）对盐酸小檗 碱片进行含量测定，经三种方法对样品进行分析比较，认为容量法测定含量结果均符合规 定；HPLC 法分析盐酸小檗碱片中含有其他生物碱的量较多，盐酸小檗碱的量较少；但采 用 UV 法测定盐酸小檗碱片的含量方法较为简便，专属性强。 2 二阶导数光谱法（SDS） SDS 是解决干扰物质与被测物光谱重叠，消除胶体等散射影响和背景吸收，提高光谱 分辨率的一种数据处理技术，常用于药物分析中。崔颖等[2]探讨 SDS 测定芪黄颗粒中小 檗碱的含量，采用 SDS，利用小檗碱在 351.0nm 和 363.6nm（谷-峰）处振幅 D 值与浓 度 C 值的关系（C=131.27D＋0.0905，r=0.9999）计算其含量。结果对照品溶液和供 试品溶液在 351.0nm 和 363.6nm 处均出现谷－峰振幅，而阴性对照液在此处振幅约为 零，不影响小檗碱的测定，扫描速度 240nm/min，狭缝宽度 2nm，△λ＝3nm，平均加 样回收率为 100.3%，RSD 为 0.73%，导数测定过程中改变△λ，振幅 D 值则发生改变， 该法采用对照品对照法，对照品及样品的振幅 D 值同时改变，但其比值不变，故对实验结 果无影响。徐英瑜等[3]建立 SDS 测定葛根芩连微丸中盐酸小檗碱的含量，采用 SDS，以 无水乙醇为溶剂，测定波长分别为 365nm 和 274nm，扫描速度 40nm/min。结果在 365nm 处，盐酸小檗碱有一最大振幅，其他样品及基质在此处的二阶导数光谱与零线几 乎重合，不影响盐酸小檗碱含量的测定，盐酸小檗碱在 4～12μg/mlg/ml 浓度范围内线性关系 良好（r＝0.9996），平均回收率为 100.5%，RSD 为 1.65％。 3 原子吸收分光光度法（AAS） AAS 通常借比较对照品溶液和供试品溶液的吸光度，求得供试品中待测元素的含量。 迟文俊等[4]采用间接 AAS 测定片剂中盐酸小檗碱的含量，运用离子对分析技术、萃取技 术和光谱技术相结合的方法，收集有机相在原子吸收分光光度计上，用 Co 空心阴极灯在 240.7nm 处测得的各有机相的吸收度，选择最佳测定条件。样品经萃取，测定吸收度， 用回归方程 A＝0.0359C＋0.0060，求出 Co 的含量，按小檗碱离子∶硫氢酸钴离子为 2∶1 的关系，换算得出小檗碱的含量。本方重复性好，准确度高，平均回收率为 99.8％，RSD 为 1.21％。研究结果表明，在该法中利用 Co 标准曲线，能够有效控制片剂中小檗碱的含 量，灵敏度高，操作简单，使 AAS 的应用领域由原来的单纯测定无机金属元素，拓宽为可 间接测定生物碱类有机药物的含量。 4 薄层扫描法（TLC） TLC 是使用薄层扫描仪对薄层色谱的斑点进行扫描的一种分光光度法，具有检测光谱 范围宽，扫描速度快，数据处理和操作简便，结果重现性好等特点。杨辉[5]采用 TLC 法 建立复方黄连颗粒中盐酸小檗碱含量测定方法，采用高效硅胶 G 薄层板，以正丁醇－冰乙 酸－水（5∶1∶1）为展开剂，检测波长为 345nm。结果盐酸小檗碱在 0.0912～ 0.2736μg/mlg 范围内呈良好的线性关系，相关系数 r＝0.9986，平均回收率为 100.80％，RSD＝3.53％（n＝5），可作为复方黄连颗粒中盐酸小檗碱的含量控制方法。 莫可丰等[6]建立 TLC 法测定肤阴洁中盐酸小檗碱含量的方法，采用双波长反射法线性薄 层扫描法对处方中主要成分盐酸小檗碱进行含量测定，采用硅胶 GCMC-Na 薄层板，以正 丁醇－冰醋酸－水（7∶1∶2）为展开剂，检测波长为 λS＝430nm，λR＝600nm，结果平 均回收率为 100.8％，RSD 为 2.3％。康四和等[7]研究建立荧光薄层扫描法测定卫胃颗 粒中盐酸小檗碱的含量，样品经提取、薄层展开后，采用荧光扫描法对卫胃颗粒中盐酸小 檗碱进行含量测定，以苯-乙酸乙酯-甲醇-异丙醇-水（6∶3∶1.5∶1.5∶0.3）为展开剂，激发波 长 λ＝366nm。结果盐酸小檗碱在 0.03104～0.15520μg/mlg 范围内呈良好的线性关系，回 收率为 100.8％，RSD＝1.9％。 5 毛细管电泳法（HPCE） HPCE 法是近年来发展较快的一种新型、高效、快速的分离分析技术，是经典电泳技 术和现代微柱分离相结合的产物。目前，HPCE 法已被广泛应用于药物分析中，具有分辨 率和灵敏度高、快速、分析耗费低、样品预处理简单等特点。凌宁生等[8]利用毛细管区带 电泳对金芪降糖片进行分离分析，采用 HPCE 法快速地对金芪降糖片中 3 种生物碱进行分 析并测定其中盐酸小檗碱的含量。采用未涂层石英毛细管（50cm×100μg/mlm），以 40mmol/L 磷酸氢二钠－甲醇（65∶35）为缓冲液，254nm 为测定波长，进样压力 0.5Psi，5s，分离电压 14kV，柱温 25℃。结果在 12min 内测定盐酸小檗碱，盐酸小檗 碱平均含量为 1.52％（g/g），在 0.01～0.20mg/ml 范围内线性关系良好（r＝ 0.9999），平均回收率为 100.9％，RSD＝1.92％。张琦等[9]研究采用 HPCE 法的毛细 管区带电泳分离模式分离测定清经胶囊中小檗碱含量，采用熔融石英毛细管柱 （50cm×75μg/mlm），运行缓冲液为 0.2mol/L 乙酸钠溶液－甲醇（8∶2），265nm 为测定 波长，进样压力 20kPa·s，运行电压 15kV，毛细管柱温 25℃。结果盐酸小檗碱进样浓度 在 9.95～159.20mg/L 范围内线性关系良好（r＝0.9999），平均加样回收率为 100.4％，RSD＝1.9％(n=5)。 6 高效液相色谱法（HPLC） HPLC 法具有分离效率高，分析速度快，重现性好，专属性强等优点，广泛应用于药 物分析中，特别适合复方制剂中的多种成分的分离。HPLC 法测定盐酸小檗碱含量研究的 文献较多，许波等[10]建立了 HPLC 法测定增效黄连素胶囊中盐酸小檗碱的含量，采用 ODS 柱，以 0.1％十二烷基硫酸钠的甲醇-0.2mol/L 酒石酸（80∶20）为流动相，流速为 1.2ml/min，醋酸氢化可的松为内标物，用紫外检测器于 240nm 波长处检测，结果盐酸 小檗碱的线性范围为 0.01～0.09mg/ml，平均回收率为 99.2％，RSD 为 0.93％，且重 现性和准确性良好，分析速度快，完成一次分析只需 15min，大大节省了分析时间。张秀 桥等[11]建立三黄泻心汤中盐酸小檗碱含量的 HPLC 测定方法，卢日刚等[12]研究建立 HPLC 法测定妇康洗液中盐酸小檗碱含量的方法，对复方制剂中含有的小檗碱进行含量测 定研究，结果较为满意。黄连中结构相似的小檗碱型生物碱主要有小檗碱、黄连碱、巴马 亭和药根碱等，近年来亦多采用 HPLC 法测定其含量。刘传玲等[13]建立 HPLC 法测定黄 柏中盐酸小檗碱含量的方法，王振军等[14]研究建立 HPLC 法测定克痔栓中盐酸小檗碱含 量的方法，利用 HPLC 法较高的分离特点，分离出制剂中的盐酸小檗碱，较好地控制了制 剂的质量。盐酸小檗碱作为抗菌药，常制成复方制剂和各种剂型广泛应用于临床，对其含 量测定方法以 HPLC 法应用研究较为普遍，因 HPLC 法具有较高的分离效率和较快的分析 速度，最适宜复方制剂，特别适用于成分复杂的多组分制剂，而 UV 法测定盐酸小檗碱的 含量近年来已较少使用。随着盐酸小檗碱新的复方制剂和新剂型的问世，将会产生更多、 更新、更完善的含量测定方法，使盐酸小檗碱制剂质量得到有效的控制。