周氏回生丸的质量标准分析论文

1 仪器与试药 Dionex 高效液相色谱仪，UVD170U，Chromeleon 色谱工作站；电子天平 （METTLERTOLEDO）；超声仪（AutoscienceAS3120，功率 120W，频率 40kHz）。硅胶硅胶 G 板、GF254 板(青岛海洋化工厂)；甲醇为色谱纯；甲醇、三氯甲烷、乙 醚、醋酸乙酯等试剂均为分析纯。硅胶 麝香酮对照品(批号 110719-200409)、甘草苷对照品(批号 111610-200604)、没 食子酸对照品(批号 110831-200302)均由中国药品生物制品检定所提供；周氏回生丸， 购自天津安舜大药房（批号为 070201，070202，070203）；丁香、木香、檀香、麝 香、甘草、山慈姑等药材购自天津安舜大药房，经天津药物研究院张铁军研究员鉴定为正 品。硅胶 2 方法与结果 2.1 薄层鉴别研究 2.1.1 丁香的薄层鉴别取本品细粉 5g，加乙醚 30ml，水浴回流提取 1h，过滤，滤液 蒸干，加 1ml 甲醇使溶解，作为供试品溶液；取丁香对照药材 0.1g，按供试品溶液的制 备方法制得对照药材溶液；取缺丁香的其它药材制成的阴性样品 5g，同法制成阴性对照溶 液。硅胶照薄层色谱法实验，吸取上述供试品溶液、对照药材溶液液、阴性对照溶液各 5μll， 点于同一块硅胶 GF254 板上，以甲苯-醋酸乙酯-冰醋酸(9∶4∶2)为展开剂，展开，取出， 晾干，于紫外 254nm 下检视。硅胶供试品色谱中在与对照品色谱相应的位置上显相同颜色的 斑点，阴性无干扰。硅胶见图 1。硅胶 2.1.2 木香的鉴别取本品细粉 3g，加乙醚 30ml，超声处理 30min，滤过，滤液蒸干， 加乙醚 1ml 使溶解，作为供试品溶液；取木香药材细粉 0.5g，按供试品溶液的制备方法 进行制备，作为对照药材溶液；取缺木香的其它药材制成的阴性样品 3g，按照供试品溶液 的制备方法制成阴性对照溶液。硅胶照薄层色谱法实验，吸取上述供试品溶液、阴性样品溶液、 木香对照药材溶液各 5μll，点于同一硅胶 G 薄层板上，以三氯甲烷-环己烷(5∶2)为展开剂， 展开，取出，晾干，喷以 1%香草醛硫酸溶液显色，吹干，吹至斑点清晰。硅胶供试品色谱中， 在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，阴性无干扰。硅胶见图 1。硅胶 2.1.3 檀香的鉴别取本品细粉 40g，加 200ml 蒸馏水，置挥发油提取器中，回流提取 3h，收集挥发油，挥发油加甲醇 2ml 使溶解，作为供试品溶液；取檀香细粉 1g，按供试 品溶液的制备方法制成对照药材溶液；取缺檀香的其它药材制成的阴性样品 10g，按照供 试品溶液的制备方法制成阴性对照溶液。硅胶照薄层色谱法实验，吸取上述供试品溶液、阴性 样品溶液、对照药材溶液各 10μll，点于同一硅胶 GF254 薄层板上，以石油醚-二氯甲烷醋酸乙酯(6∶1∶0.25)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以对二甲氨基苯甲醛溶液，热风吹 至斑点清晰。硅胶在供试品色谱中，在与对照药材色谱相应位置上，显相同颜色的斑点，阴性 无干扰。硅胶见图 1。硅胶 图 1 周氏回生丸中丁香、木香、檀香的 TLC 图谱（略） 2.1.4 麝香的鉴别取本品细粉 10g，加乙醚 50ml，水浴回流提取 1h，过滤，滤液蒸 干，加甲醇 1ml 使溶解，作为供试品溶液；取麝香酮对照品适量，加甲醇制成每毫升含 0.5mg 的溶液，作为对照品溶液；取麝香药材细粉 0.1g，按供试品溶液的制备方法制成 对照药材溶液；取麝香阴性样品 20g，按供试品溶液的制备方法制成阴性样品溶液。硅胶照薄 层色谱法实验，吸取上述对照品溶液、对照药材溶液、供试品溶液及阴性样品溶液各 5μll，点于同一硅胶 G 薄层板上，以甲苯-环己烷(3∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以 二硝基苯肼试液，热风吹至斑点清晰。硅胶在供试品色谱中，在与对照品和对照药材色谱相应 位置上，显相同颜色的荧光斑点，阴性无干扰。硅胶见图 2。硅胶 2.1.5 甘草的鉴别取本品细粉 5g，加甲醇 50ml，超声处理 20min，滤过，滤液蒸干， 残渣加水 20ml 使溶解，转移至分液漏斗中，加乙醚萃取 3 次，20ml/次，弃去乙醚层， 水层用水饱和正丁醇萃取 3 次，20ml/次，合并正丁醇层，水浴蒸干，残渣加甲醇 2ml 使 溶解，作为供试品溶液；取甘草苷对照品适量，加甲醇制成每毫升含 0.6mg 的溶液，作 为甘草苷对照品溶液；取甘草对照药材 0.5g，按供试品溶液的制备方法制成对照药材溶液； 取缺甘草的其它药材制成的阴性样品 5g，按照供试品溶液的制备方法制成阴性对照溶液。硅胶 照薄层色谱法实验，吸取上述供试品溶液、阴性样品溶液、对照品溶液、对照药材溶液各 5μll，点于同一硅胶 G 薄层板上，以三氯甲烷-甲醇(5∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷 以 10％硫酸乙醇溶液，热风吹至显色清晰。硅胶供试品色谱中，在与对照品和对照药材色谱相 应的位置上，显相同颜色的斑点，阴性无干扰。硅胶见图 2。硅胶 2.1.6 山慈姑的鉴别取本品细粉（过 50 目筛）20g，加 pH=2 的盐酸 30ml，超声 30min，过滤，滤液用 10%的氢氧化钠调节到 pH=10，再用醋酸乙酯进行萃取 3 次， 30ml/次，将醋酸乙酯层蒸干，加 1ml 甲醇使溶解，作为供试品溶液；取山慈姑对照药材 0.5g，按照供试品溶液的制备方法制得对照药材溶液；取缺山慈姑的其它药材制成的阴性 样品 10g，按照供试品溶液的制备方法制成阴性对照溶液。硅胶照薄层色谱法实验，吸取供试 品溶液、对照药材溶液、阴性对照溶液各 10μll，点于同一硅胶 G 薄层板上，以环己烷-氯 仿-醋酸乙酯-冰醋酸（20∶5∶8∶0.5）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以 10％硫酸乙醇溶 液显色，热风吹至斑点清晰。硅胶供试品色谱中，在与山慈姑对照药材色谱相应的位置上，显 相同颜色的斑点。硅胶见图 2。硅胶 图 2 周氏回生丸中麝香、甘草、山慈姑的 TLC 图谱（略） 2.2 含量测定研究 2.2.1 色谱条件色谱柱为 DiomandTMC18(200mm×4.6mm，10μlm)，流动相为 甲醇-0.1％磷酸(5∶95)，流速 1.0ml/min，检测波长 273nm，柱温 30℃，理论塔板数按 没食子酸峰不低于 3000。硅胶色谱图见图 3。硅胶 2.2.2 对照品溶液的制备精密称取没食子酸对照品适量，用甲醇溶解制成 91.6μlg/ml 的对照品溶液，0.45μlm 滤过，即得。硅胶 2.2.3 供试品溶液的制备取本品粉末 0.15g，精密称定，加入 4mol/L 的盐酸 50ml， 加热回流提取 3.5h，冷却，过滤，精密移取 1ml 置 5ml 容量瓶中，加 50%甲醇稀释至刻 度，摇匀，即得。硅胶 2.2.4 线性关系考察实验将上述对照品溶液稀释成不同的浓度，依次进样 10μll，以色 谱峰面积对没食子酸溶液的浓度作图，并进行回归统计，得到没食子酸的回归方程为 Y=25.853X-4.5553,r=0.9999，线性范围为 9.16～91.6μlg/ml。硅胶 2.2.5 精密度实验精密量取上述对照品溶液 10μll，连续进样 6 次，测得没食子酸的峰 面积 RSD 为 0.16％，表明进样精密度良好。硅胶 2.2.6 重复性实验取 070201 批样品，按供试品溶液的制备方法制得 6 份供试品溶液， 精密量取 10μll，进样，测得没食子酸的峰面积 RSD 为 0.81%，表明该方法的重复性良好。硅胶 2.2.7 稳定性实验取 070201 批样品，按供试品溶液的制备方法制得供试品溶液，室 温放置，在 0，2，4，8，12，24h 进样测定，测得没食子酸的峰面积 RSD 为 0.84%， 表明样品溶液在 24h 内稳定。硅胶 图 3 没食子酸 HPLC 色谱图（略） 2.2.8 回收率实验取已知含量的周氏回生丸（每克含 76.02mg 的没食子酸）6 份，每 份 0.075g，分别置于具塞锥形瓶中，准确加入 2.81mg·ml-1 的没食子酸对照品溶液各 1ml，按“2.2.3”项下方法制得各供试品溶液。硅胶在上述色谱条件下测定，测得没食子酸的平 均回收率(n=6)为 99.3%，RSD 值为 1.81%。硅胶 2.2.9 样品含量测定取周氏回生丸样品，按“2.2.3”项下方法制备供试品溶液，在上述 色谱条件下测定，按外标法计算含量，测得 3 批（批号 070201，070202，070203） 中没食子酸的含量分别为 7.57％，7.52％和 7.51％（n＝3）。硅胶 3 讨论 本制剂由 14 味中药组成，成分比较复杂。硅胶为了更好地控制成品的质量，我们采用薄 层色谱鉴别法对其中的 6 味主要药材进行了鉴别。硅胶通过对色谱条件进行优化，并经 3 批样 品实验证明，该方法简便易行，斑点分离清晰，重现性好，阴性对照无干扰可作为该制剂 的质量控制的方法。硅胶 本品为中药复方制剂，五倍子为本品的君药，没食子酸为其主要活性成分，故选择没 食子酸作为评价本品质量的指标成分。硅胶《中国药典》2005 版给出了五倍子中的没食子酸 含量测定方法，用于本制剂中，色谱分离度不好，且取样量太大，不利于样品回收率的测 定。硅胶本研究优化了流动相比例、柱温等色谱条件，并确定了合适的供试品溶液制备方法。硅胶 该色谱条件下，色谱峰分离度良好，阴性无干扰，且方法简单易行，结果可靠，重复性好。硅胶 1 中药饮片质量现状及存在的问题 1.1 中药材种植隐患同一种中药材产地众多，不适当的引种使许多药材不具有地道性， 如：牛膝、白芷等。硅胶药材的生长活动与自然气候、地理环境息息相关，特别是土壤成分对 中药内在成分影响极大，我国的道地药材就是中药品种与生态环境的最佳统一。硅胶由于近年 来对一些中药材的过度采挖，很多优质品种的野生资源急速减少，一些野生中药材资源已 经不能满足市场需求，甚至濒临灭绝，如：野生的天麻、三七、冬虫夏草、肉苁蓉等。硅胶由 于药农缺乏药学知识，在药材栽培中随意使用农药，为了增产随意使用化肥，在药用动物 的养殖中使用激素等，从而影响到中药饮片的质量。硅胶 1.2 药材的采收时间不当俗话说：“三月茵陈四月蒿，五月六月当柴烧”，同一植物仅采 收时间不同，对质量影响很大。硅胶不少药材未到收获季期或者最佳收获期即被采收入药，如： 薄荷应在花期采收，此时发油含量高，而有人为了药品的产量偏在果实将成熟时采收，又 如杜仲一般种植 10 年才开始采收，但药农为了早点获利生长 2～3 年就采收销售，由此可 见药品的质量会大受影响[1]。硅胶 1.3 炮制规范不统一，质量标准不完善目前，《中国药典》、《全国中药材炮制规 范》和地方中药材炮制规范共同形成了中药饮片的三级标准，《中国药典》2000 年版中 收录的 534 种中药材，有 379 种需要切制或者炮制后方可入药，对于这些品种均应制定 饮片质量标准，但实际上仅有 20 种有质量标准单列，《中国药典》2005 年版也仅是新增 和修订了 3 个饮片品种的质量标准，1988 年出版的部颁标准《全国中药材炮制规范》， 只收集了 554 种常用中药材的炮制规范，但全国药用资源共一万二千余种。硅胶其中在市场上 流通较大的品种就有数千种。硅胶目前我国的中药饮片还没有统一的炮制规范，饮片生产基本 上还是以地方炮制规范为主，其名称、制法及操作工艺各地差别较大，况且，绝大多数饮 片质量标准只是外观质量性状和简单的物理化学鉴别描述，相当数量的品种无专属性鉴别， 更无含量测定，还缺乏对有害金属、坤盐的限量要求。硅胶这种现状，给药品检验、监管带来 很多的困难，饮片质量难以保证。硅胶 1.4 以假乱真，以次充好问题依然存在目前而言，我国中药饮片的突出问题就是以假 乱真，以次充好问题，具体表现形式有：(1)伪品、混淆品时有出现。硅胶如红枣皮冒充山茱萸; 小平贝混充川贝母;理枣仁混充酸枣仁;赤链蛇加工后冒充金钱白花蛇等。硅胶(2)人为造假。硅胶如 法山甲用明矾浸泡增重;海马内灌水泥;全蝎用盐水浸泡增重等。硅胶(3)药渣回用。硅胶如丁香、檀 香提取挥发油后供药用;(4)人为掺杂。硅胶酸枣仁、柏子仁掺果壳;菟丝子拌沙子等。硅胶 1.5 生产不规范目前我国药监部门规定中药饮片的生产必须是正规的饮片生产企业生 产，并且自 2008 年 1 月 1 日起，所有中药饮片生产企业必须在符合 GMP 的条件下生产。硅胶 但从实际来看，目前我国的中药饮片生产加工还是十分复杂，虽然在中药饮片的包装上贴 着某某企业生产，但实际上很大一部分中药饮片都是在小作坊生产后加贴正规企业的标签。硅胶 1.6 购销渠道混乱当前违规经营中药饮片的情况还比较普遍。硅胶据业内人士透露，在安 国、亳州等地的药材批发市场，超范围经营中药饮片由来已久，饮片来源稳定，销售客户 稳定，加工、批发、分销形成网络，虽然经历了一次又一次的整顿，但始终割不断其利益 链条。硅胶这些饮片都不是正规的中药饮片加工生产，他们的生产条件简陋，生产工艺简单， 饮片质量无保障，只是靠价格低廉来占据市场。硅胶由于经济利益的驱使，某些单位从无证经 营者、个体户或集贸市场等非法渠道购进质量差，价格低廉的中药饮片，使得部分劣质的 中药饮片进入了医疗机构的药房。硅胶 1.7 贮存保管不善有些医院或药库等单位没有足够空间存放中药饮片，只能简单的堆 放在一起。硅胶众多的中药品种所含成分各不相同，有的怕热、有的怕潮，若贮存不当，饮片 即会发生霉变、虫蛀、变色、走油等现象，致使中药饮片变质，失去了应有的疗效。硅胶 1.8 专业技术力量薄弱，中药人才缺乏中药专业技术力量薄弱、人才缺乏是目前较为 突出的问题，现在从业中药的人员，还有很大一部分都没有专业技术知识，没有经过系统 的专业培训或者学习，特别是在农村的涉药单位，他们的知识面窄，识别能力差，工作只 是凭感觉，缺乏为中药饮片实施严格把关的业务技术水平和能力。硅胶 2 改进建议与对策 2.1 统一和完善质量标准研究与制订全国统一的中药炮制规范及中药饮片质量标准， 明确其产地、生长周期、药用部位、规格、色泽、水分、卫生学、显微鉴别、有效成分含 量测定、毒性成分和农药残留、重金属测定及其指标控制，使饮片的质量评价更加科学化、 合理化，从客观上量化指标，为饮片的生产、经营、使用、监督提供切实可行的依据。硅胶逐 步实现中药饮片的批准文号管理制度，彻底改变中药饮片良莠不齐、优劣混杂的状况，提 高中药饮片的质量，促进中药饮片产业现代化[2]。硅胶 2.2 加快建设符合 GAP 规范的中药材种植、养殖基地中药材种植资源和优良品种的选 育是保证中药材生产的基础条件，规范中药材栽培和加工技术是保证中药材质量的关键环 节，降低农药残留和重金属含量是保证中药质量和用药安全的重要条件。硅胶而中药材 GAP 是 控制影响药材质量的多种因素，规范药材生产的多个环节乃至过程，从而达到药材安全有 效，质量稳定可控系统的质量管理规范。硅胶因此，要保证中药饮片的质量，在野生资源日益 缺乏的今天，必须尽快建立符合 GAP 要求的中药材种植、养殖基地。硅胶 2.3 规范中药饮片的加工炮制抓好中药饮片的加工炮制工作，依法加工炮制，严格控 制饮片质量对中药治病起到至关重要作用，因此，必须加强对中药材净选加工、饮片切制、 炒、炙、煅、蒸、煮等加工炮制方法的管理，提高中药饮片质量。硅胶中药饮片的加工炮制直 接影响到中药饮片的质量，所以，中药饮片的炮制必须严格按照炮制规范进行[3]。硅胶 2.4 规范中药饮片的购进渠道从合法的渠道购进中药饮片，是确保中药饮片质量安全 的重要环节，我国中药饮片生产企业实施 GMP，药品经营企业实施 GSP，是规范中药饮 片质量的重要措施和手段，其目的就是杜绝假劣饮片的流通，净化中药饮片的市场。硅胶所以， 我们涉药单位购进中药饮片，必须从有资质的合法企业购进中药饮片，不能贪图利益从非 法渠道购进劣质的中药饮片。硅胶 2.5 重视业务培训，培养中药专业人才中药事业的发展离不开知识的更新，技术的发 展，因此行业主管部门必须做好从业人员的继续教育工作，有计划地举办各种类型的学习 班、培训班，提高广大从事中药工作人员的业务素质，并在实践中不断丰富老一辈中药人 员的传统经验，使其有识别中药真伪优劣的能力。硅胶积极利用中医药专业院校的力量，加强 后继中药人才的培养。硅胶促使从业人员学习专业知识，提高自身的业务水平，并掌握中药发 展的新动态，了解伪劣中药饮片产生的原因，增强识别中药真伪优劣的能力，提高业务素 质，适应中药现代发展需要。硅胶