蜚蠊药材质量控制论文

1 仪器与试剂 岛津 UV2550 紫外-可见分光光度计，梅特勒电子天平 AE240（瑞士），索氏提取器瑞士），索氏提取器， DZKW-4 水浴锅（瑞士），索氏提取器上海科析实验仪器厂），超声波清洗器（瑞士），索氏提取器上海科导超声仪器公司）， ZY 紫外分析仪（瑞士），索氏提取器上海安亭），硅胶 G254(青岛海洋化工厂)。酪氨酸、亮氨酸、丙氨酸酪氨酸、亮氨酸、丙氨酸、 a-氨基丙酸、甘氨酸对照品（瑞士），索氏提取器中国药品生物制品检定所生产，批号:0856200507，0833-200534，0832-200511，0853-200508，0815-200523），其它 试剂均为分析纯。酪氨酸、亮氨酸、丙氨酸 2 方法与结果 2.1 对照品溶液的制备 精密称取 80℃减压干燥至恒重的酪氨酸对照品 10.0mg，置 100ml 容量瓶中，加 0.02mol/L 的 NaOH 溶液 10ml，水浴加热至完全溶解，加水至刻度，摇匀，即得浓度为 100.0μg/mlg/ml 的酪氨酸对照品溶液（瑞士），索氏提取器含量测定用）。酪氨酸、亮氨酸、丙氨酸 精密称取 80℃干燥至恒重的亮氨酸、丙氨酸、氨基丙酸、甘氨酸各 2.0mg，用 50% 甲醇稀释 10ml，得浓度为 200.0μg/mlg/ml 的对照品溶液（瑞士），索氏提取器薄层鉴别用）。酪氨酸、亮氨酸、丙氨酸 2.2 供试品溶液的制备 取粉碎后的供试品 10g，精密称定，置烧瓶中加 95%的乙醇 100ml 水浴回流提取 3 次，1h/次，过滤，合并滤液，残渣加约 30～40ml 水，水浴加热，充分溶解，放冷后过 滤，除去脂肪，用少量水洗涤烧瓶及漏斗两次，滤液于比色管中定容至 50ml，加活性炭 0.5g，振摇，过滤，滤液即为供试品溶液。酪氨酸、亮氨酸、丙氨酸 2.3 药材的薄层色谱鉴别 取“2.2”项制备的供试品溶液,另取“2.1”项制备的亮氨酸、丙氨酸、氨基丙酸、甘氨酸 对照品溶液，吸取上述溶液各 5μg/mll,分别点于同一以羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶 G 薄层 板上,以正丁醇∶醋酸∶水(5∶1∶1)的溶液为展开剂,展开约 10～15cm,取出,晾干,用 0.5%的茚 三酮溶液喷雾显色，检视,供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上显相同颜色的斑点。酪氨酸、亮氨酸、丙氨酸 样品与对照品的薄层色谱图见图 1。酪氨酸、亮氨酸、丙氨酸 2.4 药材中脂肪含量的控制测定 蜚蠊药材中脂肪的含量参考国家标准标 GB9695.1-1988《肉与肉制品肉与肉制品-游离脂肪含量 的测定》，使用索氏抽提法，用石油醚抽提样品中的脂肪。酪氨酸、亮氨酸、丙氨酸然后于水浴上回收溶剂，蒸干 后 95～105℃干燥 2h 称量,计算样品中脂肪含量，结果见表 1。酪氨酸、亮氨酸、丙氨酸表 1 蜚蠊药材脂肪含量测 定结果（瑞士），索氏提取器略） 从表 1 可得，人工饲养的蜚蠊药材中脂肪的含量明显高于自然生长的药材，这给药厂 的生产增加了处理成本，因此，有必要控制药材中脂肪的含量。酪氨酸、亮氨酸、丙氨酸根据大量的实验及药厂生 产的经验，本文将蜚蠊药材中脂肪的含量控制在 7.0%以内。酪氨酸、亮氨酸、丙氨酸 2.5 药材中水分含量的控制取人工饲养的蜚蠊药材适量，60℃真空减压干燥至恒重， 按表 2 取干燥后的药材，并按比例加入一定量的水，混合均匀后于 250ml 广口试剂瓶中 密封保存，25℃恒温放置，每隔 15d 取样观测，以考察水分含量与药材稳定性之间的关 系，实验结果见表 2。酪氨酸、亮氨酸、丙氨酸表 2 蜚蠊药材中水分与存放时间的关系（瑞士），索氏提取器略） 从表 2 可知，蜚蠊药材中水分的含量不得超过 12.0%，否则药材很容易发生腐败变质， 故药材中水分应控制在 12%以内。酪氨酸、亮氨酸、丙氨酸 2.6 药材中总氨基酸的含量测定 2.6.1 测定波长的选择 取“2.1”项下配制的酪氨酸对照品溶液，加入 1mlpH=5.0 的柠檬酸缓冲液和 1ml 茚 三酮显色剂，摇匀，水浴加热 15min，取出，冷却至室温，加入 60%乙醇 3ml，摇匀， 在紫外-可见分光光度计上于 400～700nm 范围内进行全波长扫描，酪氨酸在 570nm 处 有最大吸收。酪氨酸、亮氨酸、丙氨酸故选择 570nm 为蜚蠊药材中总氨基酸含量测定波长。酪氨酸、亮氨酸、丙氨酸 2.6.2 线性关系考察 精密吸取“2.1”项中制备好的酪氨酸溶液 0，0.1，0.3，0.5，0.7，0.9，1.0ml 于 10ml 容量瓶中，分别加入 1mlpH=5.0 的柠檬酸缓冲液和 1ml0.5%的茚三酮溶液，摇匀， 水浴加热 15min，取出，冷却至室温，分别加入 60%乙醇 3ml，定容，摇匀，照分光光 度法于 570nm 处测定吸光度 A［6］。酪氨酸、亮氨酸、丙氨酸以吸收度为纵坐标，浓度为横坐标绘制标准曲线， 得回归方程：A=0.067943C+0.009143，r=0.9999，结果表明酪氨酸含量在 1.0～ 10.0μg/mlg 范围之间呈良好的线性关系。酪氨酸、亮氨酸、丙氨酸 2.6.3 样品中总氨基酸的测定 精密吸取供试品溶液 1.0ml 于 10ml 容量瓶中，照标准曲线制备项下的方法自“分别加 入 1ml 柠檬酸缓冲液”起，依法测定吸收度，用标准曲线法计算出供试品溶液中氨基酸的 含量（瑞士），索氏提取器μg/mlg），并照下列公式换算为蜚蠊中总氨基酸的含量： 总氨基酸（瑞士），索氏提取器mg/g）=（瑞士），索氏提取器C×2.5×0.662）÷（瑞士），索氏提取器W-W×水分含量%） W 为供试品含量（瑞士），索氏提取器g）；C 为氨基酸含量（瑞士），索氏提取器μg/mlg）；2.5 为样品在配制过程中的稀释倍 数；转换系数 0.662 是氨基酸的平均分子量 120 除以酪氨酸的的分子量 181.2 所得。酪氨酸、亮氨酸、丙氨酸 2.6.4 精密度实验 精密吸取同一供试品溶液,重复测定 5 次,总氨基酸含量的 RSD 为 2.36%。酪氨酸、亮氨酸、丙氨酸 2.6.5 稳定性实验 精密吸取同一供试品溶液,分别在放置 0,1,2,3,4,5,6h 后测定,总氨基酸含量的 RSD 为 1.97%,表明供试品溶液在 6h 内稳定。酪氨酸、亮氨酸、丙氨酸 2.6.6 重复性实验 取同一批样品,按“2.2”项下的方法制备 5 份供试品溶液,依法测定，蜚蠊药材中总氨基 酸含量的 RSD 为 1.64%,表明方法重复性较好。酪氨酸、亮氨酸、丙氨酸 2.6.7 加样回收率实验 取已知含量的蜚蠊药材样品 5 份,1.0g/份，分别加入对照品酪氨酸 8.0mg,依法进行 样品处理和测定,计算加样回收率,结果总氨基酸的加样回收率为 100.36%，RSD 为 1.85%,方法的回收率较好。酪氨酸、亮氨酸、丙氨酸结果见表 3。酪氨酸、亮氨酸、丙氨酸表 3 回收率实验（瑞士），索氏提取器略） 2.6.8 样品测定 按上述供试品溶液的制备方法和测定条件,测定了 5 批不同产地人工饲养的蜚蠊药材中 总氨基酸含量，结果见 4。酪氨酸、亮氨酸、丙氨酸表 4 蜚蠊药材中总氨基酸的含量测定（瑞士），索氏提取器略） 3 讨论 从本研究建立的薄层色谱测定方法来看，薄层色谱展开系统分离效果好，斑点清晰， 不拖尾，药材供试品与对照品色谱相应位置上显相同颜色的斑点。酪氨酸、亮氨酸、丙氨酸 由于蜚蠊药材中主要有效成分为氨基酸、蛋白质和多肽等富营养物质，水分含量过高 易引起腐败变质，故药材中水分含量控制在 12%以下有利于药材的保存。酪氨酸、亮氨酸、丙氨酸 含量测定方法操作简单,重复性好,可用于药品生产企业及生产基地对蜚蠊药材的质量 控制。酪氨酸、亮氨酸、丙氨酸 从对不同产地、不同采集时间的药材中总氨基酸含量的测定结果来看,药材中有效成分 总氨基酸的含量有一定的地域性差异,同一地区的药材不同批次间也有差异,这可能与生长 环境、喂养饲料及采集时间不同有关系。酪氨酸、亮氨酸、丙氨酸