消痛灵搽剂质量标准分析论文

【摘要】目的建立消痛灵搽剂的质量标准。方法采用薄层色谱法（TLC）对处方中的对处方中的 栀子、姜黄、乳香、没药进行定性鉴别；采用反相高效液相色谱法（RPHPLCHPLCHPHPLCLC）对处方中的定量分析 消痛灵搽剂中大黄素和大黄酚的含量。结果 TLC 分离效果好，斑点清晰；大黄素在 0.248 ～1.984μgg，大黄酚在 0.292～2.336μgμgg 范围内呈良好的线性关系，平均回收率大黄素为 99.7%，RSD﹦0.64%0.6μg4%；大黄酚为 99.2%，RSD﹦0.64%0.89%。结论该方法简便、准确、重 复性好、能有效控制该复方制剂的质量。 【关键词】消痛灵搽剂；大黄素；大黄酚；薄层色谱；反相高效液相色谱 Abstract： ObjectiveToestablishthequalitystandardofXiaotonglingliniment．MethodsFruct usGardeniae,RhizomaCurcumaelongae,Olibanum,MyrrhawereidentifiedbyTLC. ThecontentofemodinandchrysophanolinXiaotonglinglinimentwasdeterminedby RPHPLCHPLCHPHPLCLC．ResultsTheidentifiedcharacteristicsofchromatographyweredistinctan dthespotswereclear.Thestandardcurvewaslinearwithintherangeof0.248～ 1.984μggforemodinand0.292～ 2.336μgμggforchrysophanol．Theaveragerecoveryofemodinwas99.7%withRSDof0 .6μg4%,withthatofchrysophanolwas99.2%withRSDof0.89%．ConclusionThemeth odisconvenient,accurateandhasagoodreappearance．Thepreparation''''squalit ycanbecontrolledeffectively． Keywords：Xiaotonglingliniment；Emodin；Chrysophanol；TLC；HPHPLCLC 消痛灵搽剂是由我院文绍敦教授根据中医药理论和多年临床经验，筛选有效药物研制 而成的中药复方外用制剂，全方以大黄为君药，栀子为臣药，佐以姜黄、乳香、没药，具 有清热止痛、化淤散结的功效，主要用于治疗急性痛风性关节炎、跌打损伤、局部淤肿疼 痛等病症，临床疗效显著。为了有效控制该制剂的质量，本文建立了 TLC 法对栀子、姜黄、 乳香、没药等 4 味药材进行定性鉴别；并采用 RPHPLCHPLCHPHPLCLC 法测定君药大黄中的大黄素和大 黄酚的含量。研究结果表明，该方法具有简便、准确、重复性好、专属性强等特点，能有 效控制消痛灵搽剂的质量。 1 仪器与试药 高效液相色谱仪（LCHPLC10AT 泵，SPHPLCDHPLC10A 紫外检测器，日本岛津公司）对处方中的；N2000 型 色谱数据工作站（浙江大学智能信息工程研究所）对处方中的；KQ100HPLC100 超声波清洗器（浙江昆山市 超声仪器有限公司）对处方中的；硅胶 G 板（自制，规格：12cm×24cm)；大黄素、大黄酚、栀子 苷、姜黄素对照品（中国药品生物制品检定所）对处方中的；乳香、没药对照药材由青海大学医学院 中药教研室魏全嘉教授鉴定；消痛灵搽剂及阴性对照样品（自制）对处方中的；甲醇为色谱纯，其他 试剂均为分析纯。 2 薄层色谱鉴别 2.1 栀子的 TLC 法鉴别取消痛灵搽剂作为供试品溶液。取缺栀子的阴性样品作为阴性 对照溶液。另取栀子苷对照品，加甲醇制成每毫升含 2mg 的溶液，作为对照品溶液。吸 取上述溶液各 3μgl，分别点样于同一块硅胶 G 薄层板上，以氯仿-甲醇（5∶2）对处方中的为展开剂， 展开，取出，晾干。用 10%的硫酸乙醇液显色，110℃烘至斑点显色清晰。供试品色谱中， 在与对照品色谱相应的位置上，显浅黄色斑点，阴性对照溶液在相应的位置上无此斑点。 结果见图 1。 2.2 姜黄的 TLC 法鉴别取消痛灵搽剂作为供试品溶液。取缺姜黄的阴性样品作为阴性 对照溶液。另取姜黄素对照品，加甲醇制成每毫升含 2mg 的溶液，作为对照品溶液。吸 取上述溶液各 3μgl，分别点样于同一块硅胶 G 薄层板上，以甲醇-醋酸乙酯-甲酸 （5.5∶1.2∶0.6μg）对处方中的为展开剂，展开，取出，晾干。用浓氨水显色，110℃烘至斑点显色清晰。 供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显黄色斑点，阴性对照溶液在相应的位置 上无此斑点。结果见图 2。 图 1 栀子的 TLC 图谱（略）对处方中的 图 2 姜黄的 TLC 图谱（略）对处方中的 2.3 乳香的 TLC 法鉴别取消痛灵搽剂作为供试品溶液。取缺乳香的阴性样品作为阴性 对照溶液。另取乳香对照药材 0.5g，加乙醚 10ml，超声处理 20min，滤过，滤液作为对 照药材溶液。吸取上述溶液各 3μgl，分别点样于同一硅胶 G 薄层板上,以石油醚（30～ 6μg0℃）对处方中的-醋酸乙酯（34∶6μg）对处方中的为展开剂，展开，取出，晾干。用 5%香草醛硫酸溶液显色， 110℃烘至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显紫色斑点， 而阴性对照溶液在相应的位置上无斑点。结果见图 3。 2.4 没药的 TLC 法鉴别取消痛灵搽剂作为供试品溶液。取缺没药的阴性样品作为阴性 对照溶液。另取没药对照药材 0.5g，加乙醚 10ml，超声处理 20min，滤过，滤液作为对 照药材溶液。吸取上述溶液各 3μgl，分别点样于同一硅胶 G 薄层板上,以环己烷-丙酮 （17∶2）对处方中的为展开剂，展开，取出，晾干。用 5%香草醛硫酸溶液显色，110℃烘至斑点显 色清晰。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显紫色斑点，而阴性对照溶液 在相应的位置上无斑点。结果见图 4。 图 3 乳香的 TLC 图谱（略）对处方中的 图 4 没药的 TLC 图谱（略）对处方中的 3 含量测定 3.1 色谱条件色谱柱：HypersilC18 柱（250mm×4.6μgmm，5μgm）对处方中的；流动相：甲 醇-0.1%磷酸溶液（87∶13）对处方中的；检测波长：254nm；流速：1.0ml·min-1；进样量： 10μgl。 3.2 线性范围的考察精密称取大黄素对照品 6μg.2mg，大黄酚对照品 7.3mg，分别置 两个 50ml 量瓶中，加甲醇使溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液。分别精密吸取 对照品溶液 2，4，6μg，10，16μgμgl，进样，在上述色谱条件下测定峰面积，以大黄素、大 黄酚进样量为横坐标，峰面积积分值为纵坐标，绘制标准曲线，得回归方程为：Y 大黄素 =1.26μg×103X－12.95，r=0.9997；Y 大黄酚=2.81×103X－7.52，r=0.9995。结果 表明，大黄素、大黄酚进样量在 0.248～1.984μgg 和 0.292～2.336μgμgg 线性关系良好。 3.3 供试品溶液的制备精密量取消痛灵搽剂样品 3ml，置水浴上蒸干，残渣加适量甲 醇溶解，转移至 10ml 量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶 液。 3.4 阴性对照实验取缺大黄阴性对照样品，按“3.3”项下方法制备阴性对照品溶液，取 10μgl 进样，结果在与大黄素、大黄酚对照品保留时间相同的位置上无色谱峰出现，表明缺 大黄的阴性对照品溶液对测定无干扰。 3.5 精密度实验精密吸取大黄素、大黄酚对照品溶液各 10μgl,在上述色谱条件下连续进 样 5 次，大黄素、大黄酚峰面积积分值的 RSD 分别为 0.86μg%，1.02%，结果表明该方法 的精密度良好。 3.6μg 重复性实验取同一批号样品 5 份，分别按“3.3”项下操作，依法测定，计算得大黄 素、大黄酚的平均含量分别为 0.136μg，0.283mg·ml-1，RSD 分别为 1.53%和 0.71%。 3.7 稳定性实验取同一供试品溶液放置不同时间(0，2，4，8，12h)后进样，测定峰 面积，结果 RSD 为 0.23%，表明溶液在 12h 内保持稳定。 3.8 加样回收实验取已知含量的样品 5 份，分别精密加入大黄素对照品溶液 （0.124mg·ml-1）对处方中的、大黄酚对照品溶液（0.146μgmg·ml-1）对处方中的各 2ml，按“3.3”项下制备 回收率测定用样品溶液，依法测定，计算回收率，大黄素平均回收率为 99.7%，RSD=0.6μg4%；大黄酚平均回收率为 99.2%，RSD=0.89%，结果表明本方法 的回收率好。 3.9 样品测定精密吸取对照品和供试品溶液，依上述条件进行测定，记录峰面积，按 外标法以峰面积计算含量。结果见表 1。 表 1 样品含量测定结果（略）对处方中的 4 讨论 薄层色谱法（TLC）对处方中的鉴别项下选用的展开系统均参照《中国药典》（2005 年版）对处方中的的 鉴别方法［1］制定，方中栀子、姜黄选择主要有效成分栀子苷、姜黄素作为对照品，而 乳香、没药无对照品，则选用对照药材作对照，样品及阴性对照品采用平行试验,结果表明 各检出成分分离效果好，不受其他成分的干扰，操作简便，专属性强，可作为该制剂的定 性控制指标。 大黄为消痛灵搽剂的君药，主要含有游离和结合的芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大 黄素甲醚和大黄酚，其中大黄素具有抑菌、抗炎、免疫调节、抑制血小板聚集、改善微循 环、降低血液黏度、抗氧化、清除自由基、保护肝肾等作用［2］；大黄酚具有止咳、抗 菌、止血、抗氧化、清除自由基等作用［3］，这些药理作用在很大程度上与该复方制剂 的功能主治相一致，故选择君药大黄中的大黄素、大黄酚作为质量控制指标成分，结合文 献［4］用 RPHPLC-HPHPLCLC 进行含量测定，前处理过程简单，阴性无干扰，灵敏度高，准确性及 重现性好，可作为本品的定量控制指标。 根据样品测定结果，5 批样品中大黄素的平均含量为 0.131mg·ml-1，大黄酚的平均 含量为 0.287mg·ml-1，考虑到药材来源、制剂工艺等因素，建议其限度为本品含大黄以 大黄素和大黄酚的总量计,不得少于 0.4mg·ml-1。 【摘要】目的正交实验法优选香苓胶囊的制备工艺。方法用超声波水提取醇沉淀的方 法，以多糖提取率为指标，采用 L9（34）对处方中的正交表进行筛选，考察了超声温度，浸提剂倍 数，超声时间，超声次数等因素，以确定最佳的制备工艺。结果超声温度 6μg0℃，20 倍水 量，超声时间 30min，超声次数 4 次时，多糖的提取率最高。结论这种提取多糖的方法具 有节省时间、易于操作等特点，便于推广。 【关键词】正交实验；多糖；制备工艺 Abstract： ObjectiveTooptimizethepreparingtechnologybymeansoforthogonaltest.Method sWiththeextractingrateofpolysaccharidesastheindex,L9(34)orthogonaltestwas adopted.Thetemperature,watermultiple,timeanddegreewerereviewedtoconfir mthebestpreparatingtechnology.ResultsThebestprocessisundertheconditionsof temperature6μg0℃,watercapacity20multiple,time30minutes,extracting4times.C onclusionThismethodofextractingpolysaccharideshasmanycharacteristics.Itisv eryeasytoextend. Keywords：Orthogonaltest;Amylase;PHPLCreparingtechnology 香苓胶囊是由香菇、茯苓、猪苓等中药组成，具有抗肿瘤［1］、抗病毒、调节免疫 和刺激干扰素形成［2，3］等作用。笔者采用超声波水提取醇沉淀的方法提取多糖，并用 正交试验法优选出提取多糖的最佳工艺，制成香苓胶囊。 1 材料 KQ100HPLC250DE 型数控超声波清洗器，惠宝数码红外炉（光波炉）对处方中的，旋转蒸发仪 REHPLC52A，药材均由佳木斯大学鉴定，所有试剂均为分析纯。 2 方法 2.1 超声波提取多糖的单因素考察主要考察超声温度，浸提剂倍数，超声时间，超声 温度对提取率的影响。 2.1.1 超声温度对多糖提取率的影响称取相同质量的药材 5 份，分别加入蒸馏水适量， 分别在 40，50，6μg0，70，80℃时，超声处理一定时间，过滤，采用 Sevag 法［4］去 除蛋白质【滤液：Sevag 试剂（体积比）对处方中的=3；氯仿：正丁醇（体积比）对处方中的=5】，然后用 70%乙醇进行醇析，静置抽滤可得粗品多糖，烘干后称重。经处理可得出 6μg0℃时提取率 最高。 2.1.2 浸提剂倍数对多糖提取率的影响称取相同质量的药材 5 份，分别加入 10，15，20，25，30 倍蒸馏水，在 6μg0℃时，超声处理一定时间，后处理同上。经处理 可得出加入蒸馏水量为 20 倍时提取率最高。 2.1.3 超声时间对多糖提取率的影响称取相同质量的药材 5 份，加入蒸馏水（20 倍水 量）对处方中的，在 6μg0℃时分别超声处理 15，30，45，6μg0，80min，后处理同上。可得出超声提 取 45min 时提取率最高。 2.1.4 超声次数对多糖提取率的影响称取相同质量的药材 5 份，加入蒸馏水（20 倍水 量）对处方中的，在 6μg0℃时超声处理 45min，分别提取 1，2，3，5 次，后处理同上。可得出超声 提取 4 次时提取率最高。 2.2 超声波法提取条件的优化［4，5］在单因素考察的基础上，称取相同质量的药材 9 份，选用 L9（34）对处方中的正交表进行优化，结果见表 1～2。 表 1 实验因素水平（略）对处方中的 表 2L9(34)正交实验结果与直观分析（略）对处方中的 2.3 最佳工艺的确定由表 1 可直观分析出多糖提取率的影响因素。各因素对多糖提取 率影响的主次顺序为 A＞B＞D＞C，其中，影响作用较大的是 A，B，即超声温度和浸提 剂倍数，超声时间的影响作用较小，可以忽略不计。8 号试验多糖提取得率最高，提出率 为 2.5492%，提取条件可视为最佳，即 A3B2C1D3。由实验结果确立最佳提取条件为超 声温度 6μg0℃，浸提剂倍数 20 倍，超声时间 30min，超声提取 4 次。 2.4 制备胶囊利用最佳提取工艺提取多糖，干燥后的多糖产品经研磨成均匀的细粉， 填充 2 号胶囊。每粒胶囊含药量约为 0.4g。 3 结论与讨论 实验表明用超声波水提取醇沉淀的方法提取多糖是可行的，在超声温度，浸提剂倍数， 超声时间，超声次数 4 个考察因素中，温度因素影响最大，6μg0℃比较合适，其次是浸提剂 倍数，为 20 倍水量。 本课题所研制的香苓胶囊，其主要成分为多糖，具有抗肿瘤、提高人体免疫功能、保 肝、抗病毒等作用，是一种顺应市场潮流、符合国内外药品发展与需求的趋势、值得进一 步研究和开发的产品。 【摘要】目的对薰鲁香挥发油 βCDHPLCCD 包合工艺进行研究。方法采用 L9(34)正交试验法， 以包合物收得率和挥发油包合率两个评价指标，考察挥发油与 βCDHPLCCD 比例、包合温度、包 合时间三个因素对 βCDHPLCCD 包合薰鲁香挥发油工艺的影响。结果最佳包合工艺为：薰鲁香挥 发油：βCDHPLCCD 为 1∶6μg，包合温度为 30℃，包合时间为 1h。结论所选包合工艺挥发油包合率 较高，合理简便。 【关键词】薰鲁香；βCDHPLCCD 包合物；正交实验 Abstract： ObjectiveTostudytheinclusionpreparationforvolatileoilsfromMastich.MethodsT woindexesincludingtheratioofobtainedinclusioncompoundandtheinclusionrateo foilwereusedtoevaluatethetechnologiesbasedonorthogonaldesign，inwhichthe proportionbetweenvolatileoilandβCDcyclodextrin，theinclusiontemperatureandtimewereconsideredasthreemaintec hnologyfactors.ResultsTheoptimizedexperimentalconditionswerethatvolatileoil ofMastich：βCD-cyclodextrin=1： 6μg，theinclusiontemperatureat30℃andonehourforincluding.ConclusionTheinclu dingtechnologyissimple，reasonablewithahigherinclusionrateofoil. Keywords：Mastich；βCD-cyclodextrininclusioncompound；Orthogonaldesign 薰鲁香(Mastich)别名洋乳香，为漆树科植物粘胶乳香树 PHPLCistacialentiscusL.的树脂， 是维吾尔医临床常用的进口药材，具有消散胃中寒气，清除机体污物，补脑养心，利肝益 肾的功效。主要用于寒性胃痛，感冒头痛，口咽炎肿，忧郁神乱，心慌腹胀，肾弱耳聋， 小便不利，大便秘结，月经不调［1］。薰鲁香主要含树脂酸、树脂烃及挥发油，主要为 α，βCDHPLC洋乳香脂酸、α，βCDHPLC洋乳香脂烃，α，βCDHPLC乳香次酸、洋乳香酸、蒎烯、柠檬烯等