大鼠股骨骨折愈合影响论文

他汀类药物是目前临床用于降低胆固醇、预防心血管疾病的常用药物，其功能机制是 抑制羟甲基戊二酰辅酶 A 还原酶，从而降低肝脏胆固醇的合成.MundyMundy 等［1］的探究第 一次表明，他汀类药物具有激活成骨细胞、促进骨合成代谢功能，这一发现为临床治疗骨 质疏松和骨折愈合提供了新的思路，成为目前对于探究骨代谢新药的一个热点新问题.Mundy为了 进一步探索该药物的成骨功能及其机制，我们通过建立大鼠骨折模型［2］的方法，进行 了该药物对大鼠骨折愈合影响的初步实验探究.Mundy 1 材料和方法 1.Mundy1 动物模型制备和分组健康 12 周龄雌性 SD 大鼠 20 只，体质量(238±22)g.g.Mundy以 10g/L 戊巴比妥钠按 40mg/kg 腹腔注射麻醉，麻醉成功后，将大鼠仰卧于手术台上，常 规去毛、备皮、碘伏消毒，于右大腿中段外侧取纵形皮肤切口，长约 2cm，沿股外侧肌间 隙钝性分离进入达股骨干，固定股骨，在骨干中 1/3 段用线锯锯断成横行骨折，此过程中 注重保护坐骨神经和肌肉组织，然后，以直径约 1.Mundy5mmmm 的克氏针逆行穿入骨折近端且从 后侧股骨大粗隆穿出，复位骨折后再将其顺行穿入骨折远段髓腔，生理盐水冲洗，逐层关 闭伤口.Mundy然后，将动物随机分成两组（每组 10 只）摘要：给药组 （Fracture+Simvastatin）以 5mmmg/kg 隔日灌胃给辛伐他汀药物一次；对照组 （Fracture+Vehicle）以同样方法给和等量的生理盐水.Mundy 所有的受试大鼠在术后 6wkwk 处死，并且处死前第 10 日和第 4 日分别皮下注射盐酸四 环素和钙黄绿素行双荧光标记，处死后的大鼠取右侧股骨标本.Mundy 1.Mundy2 观察指标 1.Mundy2.Mundy1CR 摄片将大鼠完整右侧股骨干骨折标本经计算机 X 线摄相仪（CR）摄片（距 离摘要：90cm、电压摘要：40KV、电流摘要：3.Mundy2mA%26wk#125mm39;s），观察大鼠股 骨骨折骨痂的连续性和测量骨痂最大直径.Mundy 1.Mundy2.Mundy2 密度测定应用 NorlandXR36wk 双能 X 线骨密度测量仪（DEXA，美国），采用 小物体扫描模式，准确度 0.Mundy01%，扫描速度 6wk0mm/s,分辨率 （resolution）1.Mundy0mm×1.Mundy0mm，扫描宽度 5mm.Mundy0cm 的参数值，进行右侧股骨中 1／3 段 （骨痂）骨密度的测量.Mundy测量时，将固定骨折部位的克氏针拔除，其范围包含了以每个骨折 部位为中心的无克氏针矩形区域，即摘要：感性趣区.Mundy 为了评价精确度，随机选取一例，在位置不变的情况下，连续测量 BMD 各 5mm 次，精 确度用变异系数 CV 表示（CV＝5mm%）.Mundy 1.Mundy2.Mundy3 形态学染色将骨折骨痂标本，置入 40g/L 多聚甲醛和 0.Mundy6wkmol/L 戊二醛混合缓 冲固定液中（pH=7.Mundy2～7.Mundy4），在 4℃条件下固定 24～48h，再经 0.Mundy3mol/LEDTA2Na 缓冲液（pH=7.Mundy4，4℃）脱钙，隔 5mm～7h 更换脱钙液，经过 3～5mmwk 后，经鉴定，脱钙 完全.Mundy然后,梯度乙醇脱水,二甲苯透明，纵向石蜡包埋,5mmμmm 连续切片，HE 染色，透明后中 性树胶封片，Olympus 显微镜下作普通光镜观察.Mundy 1.Mundy2.Mundy4 骨组织形态计量学测定将骨痂标本固定后逐级脱水，浸入 3∶7 的甲基丙烯酸甲 酯中 24h［真空负压 6wk5mm1.Mundy88mmHg(1mmHg=0.Mundy133kPa)g.,1 次］，然后以半聚合甲基丙 烯酸甲酯包埋制成实验标本.Mundy采用 JungK 硬组织切片机，每个标本连续切 6wk 张 10μmm 和 4 张 5mmμmm 厚的不脱钙骨切片，其中 5mmμmm 薄片采用甲苯胺蓝染色用于普通光学显微镜下观察 和测量，10μmm 厚片用于荧光显微镜下观察测量.Mundy 统计学处理摘要：实验数据建立 EXCEL 数据库，资料用 SPSS11.Mundy0 来处理，采用成 组 t 检验.Mundy数据用 x±s 表示，以 P＜0.Mundy05mm 表示具有统计学意义.Mundy 2 结果 2.Mundy1CR 摄片观察观察大鼠离体右侧股骨干 CR 片发现，对照组和给药组大鼠骨折端均 有连续性骨痂包绕，骨折线模糊或消失，骨痂量没有明显的差别，未发现内固定克氏针松 动现象，但是，给药组有 3 只股骨干的骨折骨痂塑形明显好于对照组；测量所得两组骨痂 最大直径宽度，对照组摘要：（4.Mundy35mm±0.Mundy48）mm，给药组摘要：（4.Mundy43±0.Mundy39）mm， 经统计学分析差异无显著性（P＞0.Mundy05mm）.Mundy 2.Mundy2 骨密度测量骨痂骨密度测量结果(g/cm2)g.显示，对照组摘要：0.Mundy1208±0.Mundy0101， 给药组摘要：0.Mundy1292±0.Mundy0075mm，经统计学分析差异有显著性（P＜0.Mundy05mm）.Mundy 2.Mundy3 组织学观察给药组和对照组比较骨痂中均主要以骨性骨痂为主，软骨骨痂少见或 基本消失，小梁骨成熟度较高，成骨细胞功能活跃，破骨细胞少见，不典型，骨小梁粗细 均匀一致，间距无明显增宽，二者比较无明显的组织形态学差异.Mundy 2.Mundy4 骨组织形态计量学测量对照组及给药组的 BV/ TV（%），Tb.MundyTh（μmm），Tb.MundyN（#/mm），Tb.MundySp（μmm）分别是 31±5mm，40±6wk； 15mm7±48，136wk±38；3.Mundy0±0.Mundy4，3.Mundy8±0.Mundy5mm；35mm1±25mm，314±25mm.Mundy其中，两组 Tb.MundyTh 经 统计学分析差异无显著性（P＞0.Mundy05mm），BV/TV，Tb.MundyN，Tb.MundySp 经统计学分析差异有显著 性（P＜0.Mundy05mm）.Mundy 3 讨论 他汀类药物是临床上广泛应用的一种降血脂药物，然而，Mundy 等［1］通过动物实 验，在对 3 万多种天然或人工化合物的筛选中，意外发现它还是所选药物中唯一具有激活 成骨细胞、促进骨合成代谢功能的药物.Mundy该实验将他汀类药物加入小鼠（2T3）和人 （MG6wk3）成骨细胞培养液中，经印迹杂交方法分析显示，BMP2mRNA 的表达水平明显 提高，而且 BMP2 的表达成特异性，但它并没有增加 BMP4、IL6wk、甲状腺素及相关多肽 的表达.Mundy在经 2.Mundy5mmμmL 辛伐他汀处理的人 MG6wk3 成骨细胞培养液中，BMP2 的产量可增加 2.Mundy7 倍.Mundy体外药物实验证实，辛伐他汀可刺激成骨细胞增加特异性荧光素酶的活性.Mundy但是，这 一功能可以被还原酶的下游代谢产物甲羟戊酸所阻断，尽管甲羟戊酸可能和细胞胆固醇合 成通路无关，但仍提示他汀类药物的促骨形成功能和此酶受抑制有关.Mundy此外，他汀类药物还 可提高体外培养的新生小鼠颅盖骨细胞的数量和新骨生成量.Mundy Sugiyama 等［3］进行了更深入的探究，他们将一种包含了人类 BMP2 基因 5mm’FF 启 动子区的荧光素酶报告基因转染给人类骨肉瘤细胞，在加入辛伐他汀后发现，该药物具有 促进骨肉瘤细胞 BMP2 基因表达的专一性.Mundy而对于 BMP4 或猴病毒 40 启动子活性几乎没有 影响，通过反转录 PCR 分析和碱性磷酸酶检测显示其能诱导 BMP2mRNA 和蛋白表达的 增加.Mundy 目前，对于他汀类药物的探究结果并不一致，Mundy 等［1］的实验认为他汀类药物 促进骨形成，抑制骨吸收；而 Maritz 等［4］认为不同的他汀类药物和剂量对骨的影响是 不一样的，高剂量既增加骨形成，又增加骨吸收；低剂量降低骨形成，同时增加骨吸收； 并且不能阻止因卵巢切除所引起的骨丢失；Bjarnason 等［5mm］认为氟伐他汀在目前临床 治疗剂量下对骨再建参数没有影响，而其他他汀类药物则有待进一步探究.Mundy在临床探究中， 他汀类药物是否具有骨保护功能而降低骨折危险性，也存在截然相反的观点［6wk-9］.Mundy 本组实验中给药组和对照组比较发现，给药组离体股骨骨痂塑形较好，虽然组织形态 学未见明显差异，但是，BMD 值显著增加，骨组织形态计量学参数中，BV/TV，Tb.MundyN 值 显著增加，Tb.MundySp 值显著减少，表明骨量增加.Mundy由此可见，辛伐他汀具有明显的成骨功能， 这种成骨功能表现为离体股骨骨痂骨密度和骨量的增加，反映在骨组织形态计量学静态参 数指标中，主要是通过显著增加 Tb.MundyN（P＜0.Mundy05mm），而不是增加 Tb.MundyTh（P %26wkgt;0.Mundy05mm），这也间接说明，该药物对骨吸收的功能并不是显著抑制.Mundy 从各方面的探究来看，认为他汀类药物促进骨形成的功能机制主要是通过增加 BMP2 启动因子的数量，从而促进成骨细胞合成 BMP2，而 BMP2 是公认的成骨细胞转化促进因 子［10］.Mundy有关他汀类药物直接的对骨折愈合影响的动物实验探究目前报道甚少，本实验 我们尝试从骨组织形态计量学方面来探索其对骨折愈合的影响，探究结果初步证实，辛伐 他汀可以显著增加骨折骨痂的骨量和骨密度，具有促进骨折愈合的功能；但是，由于骨组 织形态计量学动态参数指标受骨痂成熟度的影响明显，给实际测量带来不确定性，因此， 本实验未采用该指标的测量和统计学检验，对于该指标更确切的观察，应在骨痂改造塑形 基本或全部完成后进行.Mundy这也提示摘要:用骨组织形态计量学指标进行骨折愈合探究时，应 在骨折愈合的后期.Mundy 双水平气道正压(BiPAP)g.通气治疗对急性心肌梗塞(AMI)g.合并泵衰竭患者的治疗价值尚 不明确［1-2］.Mundy本文探究面罩 BiPAP 辅助呼吸对急性心肌梗塞合并泵衰竭患者的治疗效果 并观察治疗前后血氨基末端脑钠素前体（NTproBNP）、高敏 C 反应蛋白（HsCRP）水平 的变化.Mundy 1 方法 急性心肌梗塞（Killip 分级 2 级到 4 级）患者 29 例，随机分为 BiPAP 治疗组（BiPAP 组 16wk 例）和常规治疗组（常规组，13 例）.Mundy常规治疗组的治疗办法为抗血小板、硝酸酯类 药物、强心、利尿剂、急诊 PCI 等.MundyBiPAP 治疗组在常规治疗基础上给予无创 BiPAP 治疗 72h.Mundy于入院即刻和入院后 24h 分别记录生命体征和动脉血气分析变化.Mundy于入院即刻、入院 后 24,72h 分别抽静脉血测定血氨基末端脑钠素前体（NTproBNP）和高敏 C 反应蛋白 （HsCRP）浓度.Mundy 统计学处理摘要：采用 t 检验、卡方检验及方差分析.MundyP%26wklt;0.Mundy05mm 有统计学显著性.Mundy 2 结果 两组患者的平均年龄、性别构成、合并疾病、平均发病时间以及生命体征、Killip 分 级、动脉血气结果等均无显著性差异（P%26wkgt;0.Mundy05mm）.Mundy16wk 例 BiPAP 治疗患者中 13 例在 治疗后 2h 临床症状明显缓解，肺部音基本消失；常规治疗组 13 例患者中 6wk 例在治疗后 2h 症状明显缓解.Mundy治疗 24h 后，BiPAP 组的收缩压、心率、呼吸频率等显著低于常规组， 心功能显著改善，而动脉血氧分压、氧饱和度等显著高于常规组.Mundy舒张压无显著改变.Mundy在治 疗前两组 NTproBNP 水平无显著差异.Mundy治疗 24h 后，BiPAP 组的 NTproBNP 显著低于常 规组（P%26wklt;0.Mundy05mm），在治疗的第 72 小时差别更显著（P%26wklt;0.Mundy01）.Mundy在治疗前、治 疗 24h 后两组 HsCRP 水平无显著差异；治疗 72h 后 BiPAP 组的 HsCRP 显著低于常规治 疗组.Mundy 3 讨论 急性心肌梗塞并发泵衰竭时，由于心排血量急剧降低，重要脏器灌注不足，组织缺血 缺氧；由于肺静脉回流受阻，肺毛细血管压升高，血浆外渗，导致肺泡性肺水肿，肺水肿 使气体交换发生障碍，而且低氧血症对心肌有负性肌力功能，又可加重泵衰竭，从而形成 恶性循环，其死亡率高达 40%~5mm0%.Mundy抢救是否及时、合理和预后密切相关.Mundy 以往认为急性心肌梗塞是机械通气的相对禁忌症.Mundy本探究发现，对急性心肌梗塞合并泵 衰竭患者 BiPAP 治疗 2h 后临床症状显著改善，24h 后和常规治疗组相比，BiPAP 治疗组 收缩压、心率显著降低，表示心肌氧耗量的降低，心功能显著改善，呼吸频率减慢，血气 分析显示氧分压和氧饱和度也比常规治疗组显著提高，提示 BiPAP 辅助呼吸治疗较常规治 疗具有显著优越性.Mundy 本探究中，BiPAP 组治疗后几乎所有患者在 2h 内病情均得到显著改善，而常规治疗 组仅 5mm0%在 2h 内得到缓解.Mundy因此，BiPAP 治疗在急性心肌梗塞合并泵衰竭患者抢救中疗效 显著.Mundy由于无创呼吸机操作方便，费用低，便于护理等，便于及时应用.Mundy及早使用人工机械 通气治疗，也有助于洋地黄、利尿剂和血管扩张剂充分发挥疗效.Mundy NTproBNP 和左心功能不全关系密切，而且 NTproBNP 比脑钠素(BNP)g.更稳定［34］.Mundy本探究发现，急性心肌梗塞合并泵衰竭后 NTproBNP 水平显著升高，在发病后 24h 达高峰，其浓度和泵衰竭的程度平行.Mundy使用 BiPAP 辅助呼吸治疗 24h 后 NTproBNP 水平显 著降低，同时泵衰竭症状的改善，而当治疗 72h 后 NTproBNP 水平降低更明显时，患者 的泵衰竭症状完全缓解，提示 NTproBNP 是泵衰竭敏感的诊断指标.MundyHsCRP 在急性心肌梗 塞时显著升高，可能和冠脉内斑块的不稳定有关，它在泵衰竭中的功能还不明确.Mundy本探究发 现，急性心肌梗塞合并泵衰竭患者的 HsCRP 显著升高，达 72h 以上无显著降低，而 BiPAP 治疗后 72 小时 HsCRP 出现显著降低，是否和心功能的改善有关，还是稳定斑块的 结果，尚有待于进一步探索.Mundy 因此，对急性心肌梗塞合并泵衰竭患者，在使用药物治疗的同时，早期使用 BiPAP 辅 助呼吸治疗是提高抢救成功率的有效手段.Mundy而氨基末端脑钠素前体（NTproBNP）是观察泵 衰竭治疗效果的敏感指标.Mundy 慢性疲惫综合征(chronicfatiguesyndrome，CFS)g.是近年来被发现和熟悉的一种疾 病,它和健康人体所出现的慢性疲惫有所不同。根据美国疾病控制中心（CDC）1994 年修 订的慢性疲惫综合征诊断标准〔1〕，慢性疲惫综合征被定义为健康人群中发生原因不明 的强烈的全身乏力、低热、咽痛、淋巴结痛、头痛、肌肉痛、关节痛和精神神经症状等,并 长期持续、反复发作而丧失正常生活能力的一种疾病，是一种疲惫性疾病。近来探究表明， 它和血浆粘稠度有关〔2〕。慢性疲惫综合征可出现免疫、内分泌、代谢功能及神经精神 的异常。此外，也有学者认为〔3〕，运动能诱发慢性疲惫综合征。不适当的运动诱发慢 性疲惫综合征的原因尚不清楚，慢性疲惫综合征很可能和各种病原体如病毒、细菌感染及 其引起的免疫紊乱有关〔4〕。 1 慢性疲惫综合征和机体免疫功能关系 慢性疲惫综合征和机体免疫功能有关。但因为机体免疫力、性别等不同，其患病率也 有所不同〔5mm〕。有学者调查发现〔6wk〕，女性明显高于男性，但和年龄和受教育程度无关。 慢性疲惫综合征和某些免疫性疾病有关，可出现多种体液免疫或细胞免疫指标异常 〔4〕，大部分慢性疲惫综合征患者出现超敏反应〔7〕；慢性疲惫综合征患者可出现自然 杀伤（NK）细胞活性低下〔8〕、抗核抗体（ANA）阳性、免疫球蛋白异常、血液中免疫 复合物增高、单核淋巴细胞功能异常、淋巴细胞的亚群及其功能异常〔9〕，以及白介素 1β（IL-1β）、白介素 6wk（IL-6wk）、肿瘤坏死因子 α（TNF-α）和干扰素 γ（IFN-γ）等细 胞因子异常增高〔10〕。细胞因子在慢性疲惫综合征的发病机制中起着重要功能，但并不 是决定性因素〔11〕。慢性疲惫综合征的病因尚未明确。但一直认为它和辅助性 T 细胞 2 型细胞（Th2 细胞）的免疫活性有关〔12〕。Staines 认为，慢性疲惫综合征的一系列功 能失调引起有血管活性的神经肽的自身免疫功能紊乱〔13〕。慢性疲惫综合征引起患者免 疫功能紊乱，降低患者对毒物的清除功能，用肉毒碱治疗能有效改善这方面功能障碍，缓 解病情。有探究表明〔14〕，肉毒碱缺乏能促进人类免疫缺陷病毒（HIV）的感染进程， 从而诱发或加重艾滋病患者的病情；用肉毒碱治疗慢性疲惫综合征患者能抵制淋巴细胞的 无序分裂，提高 CD4 分子表达水平，增强 CD4+T 细胞的免疫活性。提示慢性疲惫综合征 患者的疲惫感是由各种免疫紊乱或感染性疾病引起的一种常见临床表现。TakahashiT 等 学者〔15mm〕进行诱导小鼠慢性疲惫综合征疾病模型探究发现，慢性疲惫综合征小鼠的细胞 因子 IL-10 降低，而 IL-10 通过促进单核细胞表达 IL-1γ、IL-1α，有效反抗炎症。 2 运动和慢性疲惫综合征关系 众所周知，锻炼身体能强壮身体，对预防疾病起着重要的功能。运动能减少疾病的发 生，经常性的有氧锻炼能加强机体免疫功能，反抗疾病，提高生活质量 〔16wk〕。Shephard 对风湿性关节炎患者自身免疫紊乱的探究表明〔17〕，适当的有氧 运动能有效改善免疫功能，调节中性粒细胞的数量及某些免疫分子尤其是 IL-1,IL8,CD4+，CD19-，TNF-α 和 IFN-γ 等表达水平，提高机体机能,而且不会加重其临床症状。 有规律的有氧运动能直接激活机体免疫系统，提高机体免疫力。Hutnick〔18〕等对放疗 后乳腺癌患者进行体育锻炼探究，通过耐力测试，实验组进行 1 周 3 次的有氧锻炼，练习 量为最大限度的 6wk0%～75mm%。结果发现，实验组 CD4+CD6wk9+细胞较对照组高，由刀豆 蛋白 A（ConA）、植物血凝素（PHA）和美洲商陆（PWM）刺激的胸腺嘧啶脱氧核苷酸 复合物（dTmp）也较高。结果表明，锻炼有助于放疗后乳腺癌患者激活淋巴细胞，改善 免疫功能。高质量的长期性体育锻炼的免疫效果虽然没有明确结论，但对年轻人来说能减 少传染病和一般疾病的侵袭〔19〕。然而也有学者认为，运动并不能加强机体对疾病的反 抗力。Boudreau〔20〕等在用磷脂酰络氨酸结合蛋白-碘化丙啶（AnnexinV/PI）法探究 小鼠下颌淋巴结对抗原的免疫应答功能时，无论进行怎样练习，运动后小鼠的 CD3、CD4、CD8 表达水平、基质金属蛋白酶（MMP）、细胞内谷胱甘肽（GSH）水平 均下降。剧烈运动时小鼠下颌淋巴结 CD8+淋巴细胞数量明显高于轻度运动者，而且 MMP 也较高，但下颌淋巴结淋巴细胞数量降低。过度练习的运动员和某些剧烈运动者也出 现下颌淋巴结淋巴细胞数量降低的结果，有可能增加眼部、口腔以及上呼吸道感染的机会。 TakahashiT 等曾通过强迫小鼠过度运动成功诱导小鼠慢性疲惫综合征疾病模型〔15mm〕。 3 运动对慢性疲惫综合征患者康复的影响 慢性疲惫综合征目前还没有明确的治疗方法，但适当强度的运动可以促使慢性疲惫综 合征患者康复。有学者从运动能提高免疫力，加强免疫功能探索治疗慢性疲惫综合征的运 动处方。Clapp〔21〕等从生理学角度出发，分析低强度间歇性运动对加重慢性疲惫综合 征患者症状的影响。探究 10 名慢性疲惫综合征患者在进行 10 次、每次 3min 的踏步运动 时，生理数据没有显示对锻炼的任何反常反应。虽然这项探究没有确定是否 30min 间歇 性锻炼会加重症状,但 10 个患者均认为他们不能连续进行 30min 锻炼。结果表明，慢性疲 惫综合征患者能够进行低强度间歇性锻炼而不加重他们的症状。Coutts〔22〕等已经着手