肝星状细胞活化功能论文

摘要：肝星状细胞活化增殖细胞外基质基质金属蛋白酶细胞因子细胞收缩 80 年代初，Knook 等[1 用胶原酶、链酶蛋白酶原位循环灌注法首先成功地分离了大 鼠肝星状细胞（旧称贮脂细胞），从此人们开始了肝星状细胞的体外探究。随着细胞学、 分子生物学等基础医学科学的发展和应用，人们对肝星状细胞的探究和熟悉不断深入。目 前认为，肝星状细胞是肝纤维化细胞外基质的主要来源细胞，肝星状细胞活化是肝纤维化 形成的关键[2,3，而肝星状细胞活化是一个形态、功能等改变的复杂过程。本文将近年来 有关肝星状细胞活化的重要功能改变的探究进行综述。 1 肝星状细胞活化 迄今，肝星状细胞活化尚无一个确切的定义。但它的主要特征是维生素 A 脂滴减少甚 至消失，粗面内质网增加，细胞增大，向肌成纤维样细胞转化，表达平滑肌 α-肌动蛋白， 增殖明显，合成大量细胞外基质等[4。肝纤维化时，四氯化碳（CC14）诱导肝损伤 3 周 后[5 及从正常人或其他动物分离的原代培养 7 天后的肝星状细胞或传代的肝星状细胞基本 具有上述特征，这些细胞被认为是活化的肝星状细胞。一般认为，肝星状细胞活化可分为 两个步骤摘要：（1）启动摘要：对促增生和纤维化的细胞因子反应增强。（2）后续活化 摘要：对细胞外微环境变化反应加剧。由于炎症反应在肝星状细胞活化中起重要功能，因 此，近年来有人将肝星状细胞活化分为炎症前期、炎症期、炎症后期[3。很多因素参和肝 星状细胞活化的调节，其中细胞因子起主要功能。 2 肝星状细胞活化的功能改变 2.1 细胞增殖 细胞增殖是肝星状细胞活化的重要特征之一。Davis 等[6 观察了原代培养的肝星状细 胞增殖情况，发现新分离的细胞培养 7 天后才开始分裂、增殖，同时伴有维生素 A 脂滴减 少，并发现传代肝星状细胞增殖活跃。Shiratori 等[7 分离了 CC14 诱导的实验性肝纤维 化大鼠和正常大鼠的肝星状细胞，结果两者的细胞得率分别为（2.3±0.8）×106 和 （1.2±0.37）×106 个/克肝组织，肝纤维化大鼠的肝星状细胞显著多于正常大鼠。肝星 状细胞活化增殖的机制不明，一些具有促分裂功能的细胞因子可能起重要功能。据报道， 内皮生长因子、成纤维细胞生长因子、内皮素、胰岛素样生长因子、血小板源生长因子 （PDGF）等能促进肝星状细胞增殖，其中 PDGF 是使肝星状细胞增殖最有效的细胞因子 [8。PDGF 分为三个亚型，即 PDGF-AA、PDGF-AB、PDGF-BB，而以 PDGF-BB 对肝星 状细胞增殖功能最强。其机制可能为，PDGF 和相应受体结合后激活磷脂酶 C，促进磷脂 肌醇二磷酸生成二酰甘油和 1,4,5-二磷酸肌醇，二酰甘油激活蛋白激酶 C，后者活化 Na+/H+离子流交换，细胞内 pH 值升高，细胞内的碱性化是某些 RNA 转录和蛋白质合成 的必要条件之一。蛋白激酶 C 还可使许多蛋白质磷酸化，从而实现对细胞增殖的调节，而 1,4,5-三磷酸肌醇可引起细胞内质网中 Ca2+的释放，增加细胞内 Ca2+浓度，加快细胞 内 DNA 合成和有丝分裂，促进细胞从 G1 期向 S 期转化。 2.2 合成大量细胞外基质 正常情况下，肝星状细胞合成一定量的细胞外基质，合成的胶原蛋白有Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ、 Ⅵ型；粘性蛋白有板层素、纤维连接蛋白、内皮素、腱蛋白、波浪蛋白、分区蛋白；蛋白型；粘性蛋白有板层素、纤维连接蛋白、内皮素、腱蛋白、波浪蛋白、分区蛋白；蛋白 多糖有透明质酸等。其中胶原以Ⅲ、Ⅳ型为主，而Ⅰ型较少。肝纤维化时大量细胞外基质 在 Disse 间隙沉积，而肝星状细胞是肝纤维化细胞外基质的主产细胞，提示肝星状细胞活 化能合成大量细胞外基质。肝纤维化时 Disse 间隙的大量细胞外基质以胶原为主，尤以Ⅰ 型胶原为主，因此对Ⅰ型胶原的探究较多。Shiratori 等[7 以 3H-脯氨酸掺入法测定肝星 状细胞的胶原合成，结果从正常大鼠分离的肝星状细胞胶原合成为天天 （2930±728）cpm/3×106 个细胞，而 CC14 诱导的肝纤维化大鼠的肝星状细胞胶原合 成为天天（18539±429）cpm/3×106 个细胞。Ikeda 等[9 发现肝纤维化模型大鼠肝星 状细胞合成的胶原是正常大鼠的 2.7 倍。Weiner[10 测定了新分离及培养 7 天的肝星状细 胞的Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ型 mRNA，结果表明，培养 7 天的肝星状细胞的Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ型 mRNA 分 别为新分离的肝星状细胞的 17、3、2.6 倍。有人发现人肝星状细胞活化时Ⅰ型胶原 mRNA 为静止时的 60~70 倍[11。肝星状细胞活化合成大量细胞外基质的机制尚不明了。 一方面可能和其增殖、细胞数量增加有关；另一方面也可能和单个肝星状细胞合成细胞外 基质的能力增强有关。近年有人[12 认为，转化生长因子-β 对刺激肝纤维化细胞外基质的 产生起关键功能。 2.3 产生基质金属蛋白酶 正常情况下，Disse 间隙含有Ⅳ型胶原、层粘连蛋白和蛋白多糖组成的基底膜。肝纤 维化时大量细胞外基质在 Disse 间隙沉积，这不仅和细胞外基质合成增加有关，而且和细 胞外基质降解异常也密切相关。和细胞外基质降解有关的酶系主要为金属基质蛋白酶，可 分为四个亚型摘要：（1）胶原酶；（2）明胶酶；（3）基质溶酶；（4）其他。Arthur 等[13 探究了原代培养人肝星状细胞的明胶酶 A（分子量为 63kD）产生情况，结果发现， 新分离的肝星状细胞几乎测不到明胶酶 AmRNA 表达，但随着肝星状细胞的活化，其明胶 酶 AmRNA 表达明显增加。Vyas 等[14 发现，原代培养活化的肝星状细胞释放基质溶酶 （分子量为 57kD）。Herbst 等[15 发现，基质溶酶 mRNA 转录水平在正常肝脏较低， 而在 CC14 诱导的肝损伤中明显增高。但肝星状细胞活化对间质胶原酶（一种胶原酶）产 生似乎无明显影响。原位杂交探究表明，正常肝脏和纤维化肝脏的间质胶原酶 mRNA 表达 均很低或缺乏[16。 2.4 分泌趋化因子、细胞因子 趋化因子可引起白细胞在损伤部位的聚集，而白细胞向肝小叶的聚集能加速肝纤维化 的进程。肝星状细胞活化可分泌一些趋化因子。巨噬细胞炎症蛋白-2（MIP-2）是一种重 要的趋化因子，Sprenger 等[17 用肿瘤坏死因子（TNF）-α 作为刺激因素用酶联免疫吸 附法测定了培养的肝星状细胞上清液的 MIP-2，结果显示，活化的肝星状细胞显著高于培 养早期的肝星状细胞。单核细胞趋化蛋白-1（MCP-1）是一种诱发单核细胞趋化和活化的 因子，Marra 等[18 发现，慢性活动性肝炎患者的肝脏 MCP-1 明显高于正常人。肝星状细 胞活化还能表达或分泌转化生长因子-β、TNF-α、肝细胞生长因子、成纤维细胞因子、白 介素-6 等细胞因子[3。 2.5 细胞收缩 （1）肝星状细胞位于肝窦内皮细胞和肝细胞之间的 Disse 间隙内，就解剖位置而言， 类似组织的外膜细胞；（2）肝星状细胞表达肌细胞所具有的中间丝、结蛋白；（3）在某 些情况下表达平滑肌 α-肌动蛋白。这些因素决定了肝星状细胞的收缩功能。Bockey 等 [19 发现，肝星状细胞只有活化后才收缩，有关机制尚不明了。探究表明，肝星状细胞表 达内皮素受体[20。内皮素可引起活化的肝星状细胞收缩，可能机制为内皮素和其受体结 合，引起细胞内 Ca2+含量增加，增加的 Ca2+和钙调蛋白结合，后者激活肌球轻链激酶， 引起收缩蛋白如肌动蛋白、肌浆蛋白的收缩[21。 3 肝星状细胞活化功能改变的意义 肝星状细胞活化合成大量细胞外基质是肝纤维化形成的直接原因。肝星状细胞活化增 殖、数量增加，从而增加细胞外基质的合成。肝星状细胞活化时其细胞外基质降解酶合成 异常，一方面不能正常地降解细胞外基质，导致细胞外基质增加；另一方面基质的异常代 谢可引起静止的肝星状细胞活化，活化的肝星状细胞产生的趋化因子、细胞因子可通过自 分泌或旁分泌途径使静止的肝星状细胞活化，从而产生大量细胞外基质。细胞外基质增加、 肝星状细胞数量增加以及肝星状细胞的收缩使窦腔狭窄限制肝窦血流，有助于门脉高压形 成。 1、尿频、尿急 妊娠早期，由于增大子宫压迫膀胱所致。当妊娠 15 周子宫越出腹腔后，症状自然消 失。妊娠晚期，由于胎先露的入盆，膀胱再次受到挤压，尿频现象又重复出现。某些孕妇 咳嗽、擤鼻涕或打喷嚏时有尿外溢情况。护士需要向病人解释出现症状的原因，只要排除 尿道感染情况，尿频、尿急属于正常现象。不必要为此限制孕妇液体的摄入量，以免导致 脱水，影响机体正常代谢过程。同时指导孕妇作缩肛运动，练习盆底肌肉的张力有助于控 制排尿。尿频、尿急以及孕期溢尿情况，在妊娠终止后，症状自然消失。假如症状继续存 在，表示会阴肌肉过度松弛或盆底有损伤，应该进一步检查、处理。 5、胃区不适 孕妇常有反映酸、暖气、上腹压迫感等症状，是由于子宫增大造成胃部受压的结果。 再加上孕期胃肠蠕动减弱，胃部肌肉张力低，尤其胃贲门部括约肌松弛，致胃内容物倒流 到食道下段，食道粘膜受到刺激而产生胃区烧灼感，孕妇主诉“烧心”。护理实践提示，饭 后立即卧床、进食过多或摄取过多脂肪及油炸食品均会加剧“烧心”症状，故应避免。有人 认为脂肪有抑制胃酸分泌的功能，因此饭前吃些奶油、奶酷加工食品，有预防“烧心”功能。 “烧心”已经出现，再吃奶油制品食物就不起功能。可以服用氢氧化铝、三硅酸镁等制酸剂， 但应避免选用含重碳酸钠的食物（如苏打饼干）或药物，以免所含的钠离子促使水潴留， 造成电解质的紊乱。指导孕妇选择少量多餐的原则，可以减少胃内容物体积，以缓解症状。 5、胀气 怀孕期，由于胃肠道活动减弱，肠内气体常易积聚引起令人不悦的腹胀，多不需非凡 治疗。办法是帮助孕妇识别起胀气的食物，指导选择轻易消化的食品，避免过饱情况，以 少量多餐方式满足机体的需要。建议孕妇养成定期排便的习惯、适当锻炼均能促进肠蠕动， 有预防和减轻腹胀的功能。必要时可按医嘱使用缓泻剂或软化大便的药物，保持大便通畅， 也有助于减轻症状。 5、便秘 造成便秘的原因是增大的子宫推挤使小肠移位、液体摄入及室外活动量减少、孕期肠 蠕动减缓、孕期补充铁剂。 办法是帮助孕妇回顾促成便秘的因素，了解孕妇饮食情况。和孕妇共同讨论并使其理 解液体的摄入量、新鲜水果、蔬菜以及纤维素食物的重要性，以及定期排便习惯和便秘的 关系。鼓励天天适量运动，以助维持良好的肠道功能。必要时按医嘱使用大便软化剂或缓 泻剂，但不能养成依靠药物的习惯。建议孕妇多吃香蕉，不仅获得食物的满足，还能预防 便秘，称之谓“非药物性治疗方法”。 6、背痛 随着妊娠子宫的增大，孕妇身体重心前移，为保持身体的平衡，必须采取头和肩向后 仰，腹部向前突，脊柱内弯的姿势。结果使腰部和后背肌肉、韧带负担加重，则引起不同 程度的背痛。此外，过度紧张、倦怠、弯腰或抬举重物，妊娠子宫压迫神经以及骨盆关节 松弛（尤其妊娠晚期），也是腰背疼痛的原因。为了预防或减轻腰痛，护士要和孕妇共同 讨论预防以及缓解背痛的办法。要使孕妇理解妊娠早期背痛的促进因素，并把握预防症状 发生的应对办法，例如，在日常生活中注重保持良好的姿势，避免过度倦怠；坐位时，背 部靠在枕头上或靠背椅的扶手上；盘腿坐势也有助于预防背部用力。同时指导孕妇通过调 整工作台的高度或孕妇的位置，以维持最佳的姿势。建议孕妇有计划地锻炼以增强背部肌 肉强度也是预防腰痛的有效办法，例如骨盆摆动运动体操，每日 5 次，可以减少脊柱的曲 度，有利于缓解背痛。孕妇拾取物品时，应该弯曲膝盖而不弯背部，以保持脊柱的平直。 7、眩晕 许多孕妇有眩晕现象，尤其在拥挤、空气不流通，人群集聚的场所。促成症状的原因 可以是摘要： （1）孕妇长时间站立或忽然改变体位，出现低血压状态而导致眩晕或疲惫。 （5）由于过度兴奋或焦虑影响呼吸功能导致换气过度和眩晕。 （5）妊娠期血液被稀释引起“生理性贫血”或低血糖状态。 （5）较长时间的仰卧位，巨大子宫压迫下腔静脉，使回流血量及心搏出量减少、出 现低血压可致眩晕。 护理办法是帮助护理对象识别造成眩晕的诱发因素，针对原因采取相应的办法。例如 告诫孕妇应该避免摘要：（a）过快地变换姿势；（b）长时间地站立；（c）过度兴奋和 精神过度紧张；（d）过度疲惫等。指导孕妇采取侧卧位方式尤其左侧卧位，不仅可以改 善胎儿血氧供给，还可以预防仰卧位低血压综合征引起的眩晕。假如出现的眩晕。假如出 现的眩晕症状经上述办法处理后无效或频繁出现时，均应和医师联系，以免延误病情。 8、下肢肌肉痉挛 主要指小腿腓肠肌发生疼痛性挛缩，孕期任何时期均可出现，常见于孕期，夜间发作 较多。系因增大的子宫压迫下肢神经所致，倦怠、严寒、不合理的体姿以及体内钙、磷比 例失调致神经系统应激功能过强，均可促使发作。办法是监测孕妇摄入的食物中是否有足 量的维生素 B，被确定缺钙者，有计划摄取牛奶，必要时按医嘱补钙。禁止滥用含钙磷的 片剂，以免加重体内钙磷的不平衡情况。还要和孕妇讨论预防及减轻症状的方法，例如摘 要：（a）避免穿高跟鞋，以减少腿部肌肉的紧张度；（b）热敷患处，抬高下肢，按摩腿 部肌肉等都能生效。当小腿肌肉发生痉挛时，只要立即伸展肌肉即可缓解。具体做法是让 孕妇平卧，护士或家属按住孕妇膝盖（患侧），协助伸直小腿，同时使足背屈，症状即可 缓解。有人认为，睡前按摩小腿部，或将脚部垫高后入睡，有助于预防症状的发生。 9、静脉曲张 可能发生于下肢，偶然发生于外阴部。造成症状的原因是由于妊娠子宫压迫盆腔静脉， 影响下肢静脉回流所致。持久站立位工作，妊娠晚期腹内压力的增加，都促使症状加重。 采取相应的护理办法，改善下肢静脉回流状况，则可预防或缓解症状。具体做法是指导已 出现症状的孕妇增加卧床休息机会，坐立时注重抬高腿部，促进下肢血液回流，以示范方 式指导孕妇采用直角位置，即平卧位，双腿向上伸直和身体成直角，臀部和脚跟靠墙，每 日做数次，每次 5～5 分钟。晚期妊娠阶段孕妇往往难以接受这种姿势，可以使用弹性绷 带。更为重要的是预防症状的发生，最为简单的方法就是提醒孕妇摘要：（a）坐势时尽 可能抬高腿；（b）避免过久站立；（c）避免穿环形紧口袜带。 10、阴道分泌物增多 妊娠期间，由于激素的功能，新陈代谢旺盛，阴道上皮细胞及宫颈腺体分泌旺盛，致 阴道分泌物增多。通常为乳白色，属于正常的生理现象，不过常给孕妇带来不适。当发现 阴道分泌物增多时，护士要善于识别异常情况，例如分泌物为黄绿色或带血伴难闻的臭味， 以及孕妇反映外阴有明显刺激、搔痒等症状，需及时检查明确炎症的性质，予以治疗。假 如属于生理现象，护士需和孕妇讨论症状出现的原因并为其提供有效的办法，例如勤淋浴， 常换内裤，保持外阴部的清洁，促进舒适。并告诫孕妇应该避免穿尼龙质料内裤，推荐使 用吸水性好、质地柔软的棉质内裤。 摘要：血浆钙磷 斯氏小体(corpusclesofStannius,CS)corpusclesofStannius,CS)是硬骨鱼类独有的内分泌腺，其分泌的斯钙素 (corpusclesofStannius,CS)stanniocalcin,STC)具有抑制鱼类鳃、肠的钙转运和促进肾小管对磷酸盐的重吸收以调 节钙、磷代谢的功能。现已证实，人和哺乳动物中也存在有 STC，其生理功能表现在抑制 肠对钙的吸收、促进肠对磷酸盐的吸收及促进肾小管对磷酸盐的重吸收以调节钙、磷代谢， 并且对鱼的鳃钙转运也有抑制功能。那么鱼类 CS 分泌物能否对哺乳动物的钙、磷代谢产 生影响呢?鱼类 CS 匀浆液对大鼠血清钙、磷含量的影响已有报道，而鱼类 CS 匀浆液能否 也对小鼠血清钙、磷代谢产生影响，国内外未见报道。为此，我们观察了鲤鱼 CS 匀浆液 对小鼠血浆钙、磷代谢的影响。 1 材料方法 (corpusclesofStannius,CS)1)实验材料实验用昆明种小鼠由本院实验动物房提供，共计 48 只，体重 19～26g, 雌性 2 只雄性 46 只。用于制备 CS 匀浆液的鲤鱼(corpusclesofStannius,CS)Cyprinuscarpio)购自当地集贸市场， 体重 380～520g，均为雌性，性腺发育至Ⅳ期。 (corpusclesofStannius,CS)2)鲤鱼 CS 匀浆液的制备按仇存网等的方法，取出鲤鱼 CS 称重后，加入一定比例的 生理盐水制备成 10mg/ml、5mg/ml、2.5mg/ml 的 CS 匀浆液，3000r/min 离心 5min 后，取上清液备用。 (corpusclesofStannius,CS)3)实验方法取小鼠 48 只，随机分为 6 组。正常对照组腹腔注射生理盐水，另一组腹 腔注射 5mg/ml 的鲤鱼 CS 匀浆液；其余 4 组在腹腔注射 5mmol/LCaCl2 溶液的基础上， 一组腹腔注射生理盐水，另外 3 组分别腹腔注射 2.5mg/ml、5mg/ml 和 mg/ml 的鲤鱼 CS 匀浆液。上述 6 组注射剂量均为 0.2ml/10g 体重。注射 2h 后眼眶静脉丛采血，肝素 抗凝，6000r/min 离心 5min 后取血浆备用。 (corpusclesofStannius,CS)4)血浆钙、磷含量的测定血浆钙、磷含量的测定分别按邻甲酚酞络合酮(corpusclesofStannius,CS)OCPC)法和 钼蓝法进行，所用试剂均为北京中生生物工程高技术公司生产，操作步骤严格按产品说明 进行，722-光栅分光光度计(corpusclesofStannius,CS)上海第三分析仪器厂)比色测定。 (corpusclesofStannius,CS)5)统计学方法实验数据采用单因素方差分析进行统计学处理，结果用均数±标准差 (corpusclesofStannius,CS)±s)表示。