内酯含量测定研究管理论文

【摘要】目的探讨外标四点法的可行性。方法 HPLC 法，色谱柱： ALLTECHC18(4.6mm×250mm，5μm)m)，流动相：正丙醇-四氢呋喃-水(1：15：85)， 流速 1.0ml/min，ELSD 参数：漂移管温度 108.0℃；载气(压缩空气)流速 3.10L/min。 结果外标四点法得出回归方程，经统计学方法证明成立，且相关系数 r 显著。结论外标四 点法可以用于银杏萜类内酯的含量测定。 【关键词】银杏叶萜类内酯；含量测定；HPLC-ELSD；外标四点法 StudyonreliabilityofESMoffourpointstodeterminetheassayforGinkgoTerpen eLactones 【Abstract】ObjectiveStudyonthereliabilityofESMoffourpoints.MethodsHPL CsystemconsistingofanAlltechC18column(4.6mm×250mm，5μm)m)，andthemo bilephasewasnPropylalchol，tetrahydrofuranandwater(1:15:84)atflowrateof1.0ml/ min.Thedetectortemperaturewas108.0℃andthedrygasflowratewas3.10L/ min.ResultsTheESMoffourpointshasbeenestablished.ConclusionTheESMoffourp ointscanbeusedondeterminetheassayforGinkgoTerpeneLactones. 【Keywords】ginkgoterpenelactones；assay；HPLC-ELSD； ESMoffourpoints 有关银杏叶中萜类内酯的含量测定方法的报道较多，目前银杏叶制剂的萜类内酯含量 测定方法采用的多为 HPLC 法［1～3］。我们亦采用 2005 版中国药典收录的 HPLC 法 ［4］，蒸发光散射检测器进行测定。HPLC-ELSD 使用外标两点法对数方程分别计算白果 内酯、银杏叶内酯 A、银杏叶内酯 B 和银杏叶内酯 C 的含量，四种银杏内酯的含量之和为 萜类内酯含量。我们在实际工作中使用外标两点法时，直接从数值上难以判断对照溶液的 配制是否准确，及其外标两点法对应的工作曲线(n＝2)是否可靠。因此，同时配制两份对 照溶液各自分别测定 5μm)l、10μm)l 两点，将四个浓度和相应峰面积一条标准曲线（n＝4）， 得出回归方程及相关系数 r，通过统计学方法考察曲线和回归方程是否成立［5］。 1 仪器与试药 1.1 仪器高效液相色谱仪：SHIMADZU-10A；蒸发光散射检测器 ALLTECHELSD2000。 1.2 试药白果内酯，银杏叶内酯 B、银杏叶内酯 C 对照品购于中国药品生物制品检定 所；银杏叶内酯 A 对照品购于 SIGMA。甲醇为色谱纯；水为自制超纯水；其他试剂均为分 析纯。 2 方法与结果 2.1 色谱条件与系统适应性试验色谱柱：ALLTECHC18(4.6mm×250mm，5μm)m)； 流动相：正丙醇-四氢呋喃-水(1：15：84)；流速 1.0ml/min；ELSD 参数：漂移管温度 108.0℃；载气(压缩空气)流速 3.10L/min；柱温 35℃；进样量 5、15μm)l。理论塔板数 按白果内酯峰计算应不低于 2500，相邻峰的分离度应＞1.5。 2.2 对照品溶液的制备分别精密称取经五氧化二磷干燥过夜的白果内酯、银杏叶内酯 A、银杏叶内酯 B 和银杏叶内酯 C 对照品适量，置同一 10ml 量瓶中加甲醇稀释至刻度， 混匀，即得。 2.2.1 对照品溶液一白果内酯 22.73mg、银杏内酯 A13.42mg、银杏内酯 B11.13mg 和银杏内酯 C9.05mg。 2.2.2 对照品溶液二白果内酯 14.71mg、银杏内酯 A11.34mg、银杏内酯 B12.24mg 和银杏内酯 C18.99mg。 以对照品浓度的自然对数 InC(x)为横坐标，峰面积的自然对数 InA(y)为纵坐标作图， 见图 2～5。 图中四点有成一条直线的趋势，在直线方程 y＝ax+b 中，通过统计计算按公式 1、2、3 分别求出两个常数 a，b 及直线的相关系数 r，见表 2。 2.3 外标四点法直线回归方程的确定分别精密吸取对照品溶液一和二 5μm)l、15μm)l，注 入液相色谱仪，按上述色谱条件测定，记录色谱图。结果：对照溶液中白果内酯(tR＝ 8.375)、银杏叶内酯 A(tR＝9.811)、银杏叶内酯 B(tR=12.040)和银杏叶内酯 C(tR＝ 7.194)，相邻组分分离效果良好(见图 1)。浓度与峰面积的数据及处理见表 1。 (出峰顺序为银杏内酯 C，白果内酯，银杏内酯 A，银杏内酯 B) 1 2.4 直线回归方程的统计学检验 2.4.1 相关系数检验法相关系数表示两变量间关系的密切程度。使用相关系数检验法 来进行相关系数的显著性测验。见表 2。 检验 rn＝4，显著性水平 α 为 0.01 时，查相关系数临界值表得 r0.01，4＝0.990， 表 2 中 r＞r0.01，4，说明确立的回归方程是有意义的。 2.4.2t 检验法进行相关系数 r 的显著性测验 t 检验法进行相关系数的显著性测验，公 式 4 如下： t＞t(n-2)，0.01 时，x(InC)与 y(InA)间的相关关系有非常显著意义。查表得 t（２） ０．０１＝９．９３。表 2 中 t 均＞t(2)0.01，所以认为 x(InC)与 y(InA)之间存在线性相 关关系。外标四点对数方程法的直线可确立。 2.4.3 外标四点法的重复性考察取对照一与对照二，按照标准曲线的制备进行六次实 验，分别得到六组标准曲线及相关系数 r，见表 3。 3 结论 实验数据中外标四点法对应的标准曲线相关系数均大于 r0.01，4＝0.990，线性相关 且回归方程是有意义的。在实验得到的回归方程当相关系数＞0.990 时可用计算内酯的含 量，该方法增加了标准曲线的可靠性，可有效控制制剂的质量。 作者摘要：贺菊香，梁玉梅，耿排力 胃肠道间质瘤是消化道最常见的间叶源性肿瘤［1］，SNAI2 基因编译蛋白是一种含 锌指结构的基因转录因子。探究表明,该因子在间叶性肿瘤的发病机制中起重要功能［2］, 可导致细胞和细胞间的黏附功能下降，细胞迁徙和浸润能力的增加［3］，提示 SNAI2 可 能和肿瘤的恶性生物学行为有关。本文对 105 例胃肠道间质瘤的组织芯片分别进行细胞表 面分化抗原(CD)117 和 SNAI2 的免疫组化染色和分析,观察 SNAI2 的差异表达和预后的关 系。结果报告如下。 1 对象和方法 111 对象收集解放军总医院 1996～2003 年的原发胃和小肠间质瘤病例 156 例，通 过随访及病理切片分析，选取其中有具体临床病理信息者 105 例，进行组织芯片制作，进 行免疫组化分析。 112 方法 11211 主要试剂 CD117 抗体(美国 DAKO 公司)，稀释浓度为 1∶200；SNAI2 抗体(美 国 SantaCruz 公司)，稀释浓度为 1∶200。 11212 组织芯片制作根据年龄、肿瘤发病部位设计组织芯片阵列，以 1mm 直径空心 取样针取样，芯片中每 2 个点相距 016mm。每张芯片设 11 行 13 列，并以 3 例正常胃组 织在芯片右上方定位。整张芯片共 146 个点，每个病例随机取 3 个组织柱，以确保芯片具 有代表性。 11213 免疫组化染色及结果判定采用卵白素-生物素-过氧化物酶染色(ABC 染色)法， 经 CD117 组化染色，呈阳性者进行 SNAI2 染色，肿瘤细胞内出现黄色或棕黄色颗粒且芯 片的组织点中阳性肿瘤细胞数＞20%计为阳性表达。 113 统计分析采用 SPSS1210 软件进行统计分析，阴性和阳性组的发病年龄以 x±s 表示；2 组比较采用 t 检验，采用 Kaplan-Meier 法进行生存分析。 2 结果 211 阳性率在 105 例间质瘤病例中,CD117 阳性 101 例，阴性 4 例，阳性率为 9612%；101 例 CD117 阳性中，SNAI2 蛋白表达阳性率为 4915%(50/101)。 212 表达特征(图 1，2)图 1，2 可见，CD117 和 SNAI2 阳性表达的肿瘤细胞内均出 现黄色或棕黄色颗粒，并在胞浆内呈弥漫性分布。 图 1CD117 在胃肠道间质瘤中的阳性表达（略） 图 2SNAI2 在胃肠道间质瘤中的阳性表达（略） 213SNAI2 阴性和阳性组平均发病年龄比较 SNAI2 阳性组的平均发病年龄为 (5212±1415)岁，阴性组的平均发病年龄为(5516±1015)岁，差异有统计学意义(P＜ 0105)，即阳性组发病年龄较小。 214 阴性和阳性组生存曲线比较生存曲线显示，随时间延长，2 个组的生存率逐渐下 降，但随访时间太短，2 个组的生存率比较，差异无统计学意义(P＞0105)。 3 讨论 SNAI2 是上皮型钙粘连素 E-Cadherin 基因转录的抑制剂。探究表明，降低 ECadherin 表达和肿瘤在淋巴结的较早转移和预后较差密切相关［4］。SNAI2 在白血病 中具有抗白血病细胞凋亡的功能［5］。有探究表明，通过 SCFCkitSlug(SNAI2)CkitSlug(SNAI2)CCkitSlug(SNAI2)kitCkitSlug(SNAI2)Slug(SNAI2)通路， SNAI2 可增强恶性间皮瘤细胞的抗药性［6］。以上探究可推断出表达 SNAI2 的肿瘤恶性 程度高，患者预后差。肺腺癌组织中的探究也证实，SNAI2 的高表达和术后肿瘤的复发率 有密切关系，并使患者生存期缩短，转移瘤生长加速，并增加瘤细胞的浸润能力［7］。 本文结果显示，SNAI2 蛋白的阳性表达组发病年龄较小，提示发病年龄是影响预后的重要 因素，胃肠道间质瘤发病较早而预后较差；但生存率分析显示，2 组差异无统计学意义， 可能由于随访时间太短，未显示出 SNAI2 对胃肠道间质瘤的预后有影响。 作者摘要：杨加周，赵豫凤，苗乃周，景彩霞，艾庆燕 【精液质量 Influenceofcigarettesmokingonsemenqualityinmaleinfertilitypatients 【AbstractAIM 摘 要:Tostudytheinfluenceofcigarettesmokingonthespermquality.METHODS 摘 要:Spermsampleswereobtainedfrom395cigarettesmokers(smokinggroup)and2 02nonsmokers(nonsmokinggroup)in597maleinfertilitypatientstocomparesome spermparametersbetweenthetwogroups.RESULTS 摘 要:Thenumberofspermwithnormalmorphology,spermdensityandspermvitalityin smokersdecreasedsignificantlycomparedwiththoseinnonsmokers(P %26lt;0.01,P%26lt;0.05,P %26lt;0.01).Thespermdensityofsubjectswithsmokinghistory＞ 10adecreasedcomparedwiththatofsubjectswithsmokinghistory%26lt;10a(P %26lt;0.05).Smokingamount,Thespermvitalityanddensityofsubjectssmokingcig arettes＞20/ddeceasedcomparedwiththoseofsubjectssmokingcigarettes %26lt;20/d(P %26lt;0.05).Smokinghabits,totalannualsmokingpacksanddepthofinhalationwer eassociatedwithdecreasedspermquality.CONCLUSION 摘 要:Cigarettesmokingispossiblyassociatedwithdecreasedspermquality.Moderate ,heavyandlongtermsmokingadverselywillaffectthesemenquality. 【Keywordscigarettesmoking;spermquality;infertility,male 【摘要目的摘要：探索吸烟对男性精液质量的影响.方法摘要：选择 597 例男性不育 患者精液标本，其中 395 例为吸烟者，202 例为非吸烟者，观察比较 2 组精液标本的各项 参数.结果摘要：吸烟者和非吸烟者相比，精子的正常形态数、精子的密度和精子的活力降 低，2 组之间有显著性差异（P%26lt;0.01,P%26lt;0.05,P%26lt;0.01）.吸烟 龄%26gt;10a，其精子的密度降低(和%26lt;10a 者相比 P%26lt;0.05).吸烟量＞20 支/ d 者,其精子的活力和密度降低(和%26lt;20 支/d 者相比 P%26lt;0.05).吸烟状况、年吸烟 总量和吸烟深度均和精子的质量下降有关.结论摘要：吸烟行为可能和精子的质量下降有关. 中、大量吸烟或吸烟龄长者对男性生育有不良影响. 【吸烟；精液质量；育，男性 0 引言 男性精液质量随不同年代呈明显下降，在我国男性精液质量也呈下降的趋向［1］.影 响精液质量的因素不明［2，3］，多数认为吸烟对生育的影响较大，是否和其精液质量下 降有关，一直倍受人们的关注.我们探究的目的是探索吸烟对男性精液质量的影响. 1 对象和方法 1.1 对象 将 2001/2004 中 597 例男性不育病例，分为吸烟组和非吸烟组，均 2a 以上未育， 否认全身性疾病，生殖道感染及各种手术史，无放射线接触，药物过敏及嗜酒史.体检外生 殖器发育正常，睾丸大小正常，男性副性征明显，无精索静脉曲张.女方经妇科检查无异常. 吸烟组为 395 例，年龄 22～49 岁，平均 28 岁；非吸烟组 202 例，年龄 24～36（平均 26.5）岁. 1.2 方法 被检测者均禁欲 3~5d 后，在实验室用手淫法留取精液于 10mL 量杯中.采精后精液 放置于 37℃恒温箱,待液化后进行精液常规分析，并按 WHO 标准［4］分析精液的溶积、 液化时间、密度、活率和活力等. 统计学分析摘要：用 SPSS 软件包对搜集的数据采用 χ2 检验进行统计学分析. 2 结果 吸烟组的精子正常形态数和密度显著低于非吸烟组（P%26lt;0.01）；吸烟组的精子 活力也明显低于非吸烟组（P%26lt;0.05）；而精子的活率两组之间无显著性差异 （Tab1）.在吸烟组内，吸烟年限对精子的密度有影响，吸烟龄在 10a 以上者，其精子密 度明显低于 10a 以下者（P%26lt;0.05,Tab2）.平均每日吸烟 20 支者，其精子的活力和 密度明显低于 20 支以下者(P%26lt;0.05,Tab3).吸烟年限、每日吸烟量对精子形态的影 响，两组之间无显著性差异.表 1 吸烟组和非吸烟组精液各指标比较（略）表 2 吸烟年限对 精子形态、活力及密度的影响（略）表 3 每日吸烟量（支）对精子形态、活力及密度的影 响（略） 3 讨论 男性不育人数的增多，而病因不明是世界性新问题［5，6］.吸烟可导致 Leydig 细胞、 Sertoli 分泌异常，睾丸静脉中睾酮、雄激素结合蛋白浓度降低［7］.尼古丁等直接影响精 子发生，尼古丁浓度≥1mmol/L，可显著降低精子的运动能力，重度吸烟还可使阴茎动脉 收缩，睾丸和附睾血流动力学改变，阻碍精子的发生和成熟［8］.烟草浓聚物及其代谢产 物中富含有诱导基因突变和致癌物质，这些物质可使精子对酸性诱变剂的敏感性增高，精 子 DNA 链断裂增加，导致畸形精子增多［9］.我们探究表明吸烟对精子质量有不同程度 的影响，尤其是对精子的形态、活力和密度损害较为明显，和非吸烟组存在显著性差异.我 们还统计了吸烟组内，吸烟龄超过 10a 的和未超 10a 的相比，精子的密度明显降低.此外， 我们还从吸烟的深度作了比较，发现平均每日吸烟在 20 支以上者，其精子的活力和密度 比 20 支以下者明显降低，但无统计学意义. 【摘要目的了解贵州省会贵阳市城区（云岩区、南明区、小河区）部分老年人及其家 庭幽门螺杆菌(Hp)的感染率及相关影响因素。方法采用统一调查表进行问卷调查；抽取静 脉血 5ml，用同一批胃幽门螺杆菌金标免疫斑点法快速诊断试剂盒测定抗 HpCkitSlug(SNAI2)IgG。结果