小鼠腹腔巨噬细胞论文

【摘要】目的探索研究几种水溶性维生素（VitB1、VitB6、VitB12andVitC）对小对小 鼠腹腔巨噬细胞活性的作用。方法采用改良的 MTT 法，来检测小鼠腹腔巨噬细胞活性。结 果 VitB15 l( . 25 g),VitB62 l( . 2 g),VitB122 l( . 2 g),VitC2 8μg) g)均对小鼠腹腔巨噬细胞有活性增强作用。结论几种水溶性维生素 （VitB1、VitB6、VitB12andVitC）对小对小鼠腹腔巨噬细胞活性有增强作用。 l( . 【关键词】水溶性维生素；MTT 法；小鼠巨噬细胞 Tostudytheactivationofinvitromicemacrophageswithvariouswatersolublevit amins 【Abstract】ObjectiveToproposestudyingtheeffectofvariouswatersolublevit amins(VitB1,VitB6,VitB12andVitC)ofinvitromicemacrophagesactivation.Method sThearticletookthemodifiedmethodofMTTtoexplosetheactivationofinvitromrice macrophages.ResultsVitB15 l( . 25 g),VitB62 l( . 2 g),VitB122 l( . 2 g),VitC2 l( . 8μg) g)allstimulatedtheeffectofinvitromicemacrophages.Co nclusionVariouswatersolublevitamins(VitB1,VitB6,VitB12andVitC)whichwereabl etostimulatetheactivationofinvitromicemacrophagesundercertainconcentratio n. 【Keywords】watersolublevitamin;MTTmethod;micemacrophage 维生素是维持人体正常生理功能及细胞内各种能量代谢生化反应所必需的一类低分子 量有机化合物。尽管机体对这类物质需求量相对很少，但是它们却十分重要，是人体必不 可少的微量物质，如果缺乏，可引起各种各样的疾病。因此某些种类维生素对人体的免疫 系统的免疫功能也起着重要作用，影响免疫系统的各种细胞功能。最近许多年，国内外营 养免疫学者都在研究探讨各种维生素对免疫系统的作用，企图探明各种维生素对免疫细胞 活化的增强或抑制，为提高机体免疫力，本文选用和人类基因组具有相当部分同源性小鼠， 选用体外实验检测维生素 B1、B6、B12 和维生素 C 对小鼠腹腔巨噬细胞活性作用的研究。 Mosmon(198μg)3)［1］报道噻唑蓝（报道噻唑蓝（MTT）对小比色法，经后人改良，使这种方法更加完善成 熟，成为定量、重复性好、简便易行检测免疫细胞活性的好方法。我们采用此法，检测小 鼠腹腔巨噬细胞的活性，现将结果报告如下。 1 材料与方法 1．1 实验动物和主要试剂及实验仪器 ICR 小鼠体重（2 ±2）对小g，雄性，由首都医科 大学实验动物部提供。RPMI164 培养液为 Hyclmone 公司产品。噻唑蓝（MTT）对小为 Sigma 公司产品，1 %十二烷基磺酸钠（SDS）对小为 BRL 公司产品，淋巴细胞分离液为 TBD 生物技术发展中心产品，液体石蜡油为北京旭东化工厂产品，VitB1（5mg/ ml）对小、VitB6（5mg/ml）对小、VitB12（ .5mg/ml）对小均为天津金耀氨基酸有限公司产品， VitC（4 mg/ml）对小为北京双鹤药业有限公司产品，酶标仪为 SLT 公司产品（型号为 A5 8μg)2）对小。 1.2 方法（1）对小对小鼠腹腔注射（VitB1、VitB6、VitB12 和 VitC，无菌液体石蜡油）对小， 取 ICR 小鼠 4 只分成 4 组，每组 1 只，分别为 1 组、2 组、3 组和 4 组。1 组为 VitB1 实验组，第 1 天对其中 5 只小鼠腹腔注射无菌生理盐水 .2ml/只，作为对照，另外 5 只小 鼠腹腔注射 VitB1 . 5ml/只作为实验组。2 组为 VitB6 实验组，第 1 天对其中 5 只小鼠 腹腔注射无菌生理盐水 .2ml/只，作为对照，另外 5 只小鼠腹腔注射 VitB6 .2ml/只作为 实验组。3 组为 VitB12 实验组，第 1 天对其中 5 只小鼠腹腔注射无菌生理盐水 .2ml/只， 作为对照，另外 5 只小鼠腹腔注射 VitB12 .2ml/只作为实验组。4 组为 VitC 实验组，第 1 天对其中 5 只小鼠腹腔注射无菌生理盐水 .2ml/只，作为对照，另外 5 只小鼠腹腔注射 VitC .2ml/只作为实验组。以上 4 组小白鼠经腹腔注射生理盐水和维生素，均于 48μg)h 后 再经腹腔注射无菌液体石蜡油 .1ml/只。48μg)h 后行颈椎脱臼处死。（2）对小巨噬细胞的制备： 将处死的小白鼠行腹部皮肤消毒后，持镊提起腹中部皮肤并剪开，暴露腹膜，避开血管剪 开腹膜一小口。用毛细吸管取出腹腔液，并收集于试管中。作好标记后离心，弃上清，洗 3 次，立即进行台盼蓝染色，计算活细胞数。细胞数 1 8μg)/ml。（3）对小噻唑蓝比色法，将制 备的小鼠巨噬细胞按组分管，每组实验管（孔）对小3 管（孔）对小对照管（孔）对小3 管（孔）对小。 37℃温育 2h 后，每管加 1 %SDS（溶于双蒸水）对小，轻轻震荡，待甲簪颗粒完全释放后， 再用酶标仪测 OD57 值。 2 结果 2.1VitB1 对小鼠腹腔巨噬细胞活性的作用 VitB1 对小鼠腹腔巨噬细胞活性的作用， VitB15 l（ . 25 g）对小对小鼠腹腔巨噬细胞活性有增强作用，P< . 1，见图 1。 2.2VitB6 对小鼠腹腔巨噬细胞活性的作用 VitB6 对小鼠腹腔巨噬细胞活性的作 用,VitB62 l( . 2 g）对小对小鼠腹腔巨噬细胞活性有增强作用，P< . 1，见图 2。 2 2.3VitB12 对小鼠腹腔巨噬细胞活性的作用 VitB12 对小鼠腹腔巨噬细胞活性的作用， l( . 2 g)对小鼠腹腔巨噬细胞活性有增强作用，P< . 1，见图 3。 2 2.4VitC 对小鼠腹腔巨噬细胞活性的作用 VitC 对小鼠腹腔巨噬细胞活性的作用， l( . 8μg) g)对小鼠腹腔巨噬细胞活性有增强作用，P< . 1，见图 4。 3 讨论 Mosmon（198μg)3 年）对小［1］报道噻唑蓝（报道噻唑蓝（MTT）对小比色法测定细胞活性。MTT 可被各 种类型的活性细胞（RBC 除外）对小摄取，活性强的细胞摄取较多的 MTT，在线粒体内被脱 氢酶还原为甲簪颗粒（Formazan）对小,颜色由黄变深紫，加入 SDS 使细胞完全裂解释放出 甲簪，在波长 57 nm 下酶标仪测量 OD 值， OD 值越高，其甲簪浓度越高，反应活的细胞活性越强［2，3］报道噻唑蓝（。因此，MTT 法可定 量检测各种细胞的活性。我们曾经报道几种水溶性维生素对小鼠淋巴细胞活性的作用 ［4］报道噻唑蓝（。本报道 VitB1、VitB6、VitB12 和 VitC 对小鼠腹腔巨噬细胞活性的作用，它们在 一定浓度下对小鼠腹腔巨噬细胞活性有增强作用，VitB12 尤为显著。 VitB1、VitB6、VitB12 均涉及体内细胞正常生理生化功能，因此，它们当然参与小鼠腹 腔巨噬细胞的生化反应，完成正常生理功能。VitC 经临床实验证实［5］报道噻唑蓝（，它具有抗氧化 作用，增强巨噬细胞的吞噬杀菌功能，并有增强淋巴细胞功能（曾已报道）对小的 VitC 还参与 免疫球蛋白的二硫键的形成，从而促进免疫球蛋白的合成。有增加补体 C1 和干扰素的产 生，以及增强 NK 细胞的活性，因此增强人体抗肿瘤的作用［6，7］报道噻唑蓝（。 营养免疫是当今热门的研究课题之一。人体许多种疾病都涉及免疫系统，免疫系统有 防御、监视、耐受和调节功能。各种营养素，是人体依存最为重要的环境因素，也是维持 人体正常免疫功能和健康的物质基础。各种维生素虽然人体每日需要量很少，它们常以辅 酶或辅基的形式参与酶的功能，尤其是 B 族的维生素，因此它们在调节人体物质代谢过程 中起着关键的作用。研究各种维生素对人体免疫系统的作用是营养免疫的重要任务。 【摘要】目的观察 32 例胸部手术后腹胀病人采取新斯的明针刺足三里与口服四磨汤 相结合的方法促进肛门排气，消除腹胀的效果。方法病人发生腹胀时，给予针刺足三里， 同时口服四磨汤。结果 32 例病人中，有效 32 例。结论针刺足三里与四磨汤相结合治疗术 后腹胀，能促进手术后腹胀病人在短时间内排气和排便，且病情无反复，取得了满意的效 果。 【关键词】胸部手术后；腹胀；护理 腹胀是胃肠内有过量气体积聚而不能排出，是手术后常见的症状之一，病人表现为腹 部膨胀、疼痛，当胀气压迫膈肌和胸腔时，可出现气急和呼吸困难，严重腹胀可使腹内压 升高，下腔静脉回流受阻，诱发下肢深静脉血栓形成［1］报道噻唑蓝（。为了减轻腹胀病人的痛苦， 有效地缓解术后腹胀，2 3 年 1 月～2 6 年 7 月对我科 32 例胸部手术后出现腹胀的病 人，采取新斯的明针刺双侧足三里与口服中成药四磨汤相结合的方法，收到了满意的效果。 现将护理报告如下。 1 临床资料 本组 32 例病人中，年龄为 5 ～76 岁，均为男性；其中胸腔闭式引流术 1 例，肺大 疱结扎术 13 例，肺叶切除术 18μg) 例；局部麻醉 1 例，气管内插管全身麻醉 31 例；本组病 人中，术前均无腹胀病史，其中 1 例在胸腔闭式引流术后第 72h 出现腹胀，7 例、19 例、 5 例分别在术后 12h、24h、42h 出现腹胀，并且排除机械性肠梗阻。32 例病人均采取针 刺足三里与口服四磨汤相结合的方法，32 例病人在 1h 内均排气、排便、腹胀减轻，且腹 胀消失后无病情复发。有效率 1 %。 2 方法 2.1 治疗方法本组病人在术后 12h、24h、42h、72h 出现腹部膨胀、疼痛、肛门未 排气，确诊为术后腹胀的情况下，先采用针刺双侧足三里治疗的方法，让患者仰卧，双腿 屈膝成 9 °，在外膝眼下 3 寸处胫骨前棘外一横指，用 2ml 注射器抽取新斯的明 1ml（ .5mg）对小,常规消毒局部皮肤后,分别直刺左右两穴 1.5～2cm 深,缓慢上下提插,待两 腿感酸、胀、麻后抽取无回血后，即将药物缓慢推入，注射完毕后用干棉签压迫 1min。 然后口服 2 ml 四磨汤，以后每次 2 ml，每日 3 次，直至腹胀消失后停药。 2.2 观察方法用药后，记录病人第一次排气、排便时间，并且密切观察病人腹胀消除 的情况。 2.3 疗效标准根据病人排气时间，结合临床症状，制定疗效标准。用药后 15～3 min 内肛门排气、1h 内排便、腹胀减轻为有效；1h 后肛门未排气和排便、腹胀未减轻为无效。 2.4 护理要点（1）对小针刺足三里时，取穴位置要准确，进针要快，上下提插后，有酸、 麻、胀感时缓慢注入新斯的明，拔针后要继续压穴位，以加强疗效。（2）对小口服四磨汤时， 应嘱病人遵医嘱按时服药。 3 讨论 正常人胃肠内有少量气体，一般为 1 ～15 ml［2］报道噻唑蓝（，当胃肠内有过量气体而不能 排出时，人们会感到腹胀。胸部手术后腹胀的原因主要是：麻醉及手术后胃肠道蠕动功能 受抑制，气体不能排出，产生腹胀；或手术刺激引起交感神经兴奋，胃肠运动受抑制，即 使不进食，术后仍可发生腹胀［3］报道噻唑蓝（；胸部疾病手术后留置胸腔引流管，病人由于害怕疼 痛不敢咳嗽、深呼吸，更不愿下床活动，致使肠蠕动的恢复减弱，食物排泄慢，易产生胃 肠道菌群失调，导致肠道积气而腹胀。 新斯的明通过抑制胆碱酯酶活性而发挥完全拟胆碱作用，对胃肠平滑肌能促进胃收缩 和增加胃酸的分泌，并促进小、大肠，尤其是结肠的蠕动，从而防止肠道弛缓、促进肠内 容物向下推进。足三里穴注射新斯的明，增加了对足三里穴的刺激，也促进了胃肠平滑肌 的兴奋性。 四磨汤的主要成分是木香、枳壳、乌药和槟榔。木香、枳壳、乌药、槟榔均具有兴奋 胃肠道平滑肌、抑菌作用，同时木香、乌药均具有解痉止痛作用；槟榔具有促使胃肠道分 泌亢进、食欲增加的作用，同时有驱虫作用；枳壳还具有化痰消积作用［4］报道噻唑蓝（。 为了尽快解除病人腹胀的痛苦，我们采用新期的明针刺双侧足三里与口服四磨汤相结 合的方法，使病人在短时间内消除了腹胀，本组病人中腹胀明显缓解最短时间为 5min。 与单纯采取针刺足三里的方法相比，由于操作简便而有效地缓解了术后腹胀，病情无反复， 且易于执行，在不同程度上给病人减少了一定的针刺痛苦，同时病人也乐于接受。 【摘要】目的研究本地区海洛因依赖者肝脏损伤与 HCV、HBV 感染关系及人群分布。 方法对 18μg)2 例毒品依赖者肝功能、HCV、HBV 感染及相互关系进行检测分析。结果 HCV、HBV 感染较普通人群明显增高，阳性率分别为 36%和 3 .9%。HCV、HBV 重叠 感染占 17.6%。静脉注射者 HCV、HBV 单项或重叠感染较烫吸明显增高。常用肝功指标 仅 ALT 和 AST 两项异常。结论海洛因依赖者肝脏损伤指标以 ALT 和 AST 异常为主。嗜肝 病毒感染（HCV、HBV）对小加重肝脏损伤，尤以重叠感染为甚。静脉吸毒，共用注射器是 HCV、HBV 感染重要因素。应加强对高危人群的宣教工作，及早戒毒。 【关键词】毒品依赖者；HCV、HBV；肝脏损伤；人群分布；吸食方式 吸毒已成为世界性公害，毒品的依赖对人体造成严重危害。近年本地区吸毒者呈上升 趋势。分析本地区吸毒对人体损伤，特别是静脉注射引起嗜肝病毒（HCV、HBV）对小感染或 双相重叠感染现象尤为突出。探讨毒品的吸入方式、吸食时间长短等因素与肝脏损伤、嗜 肝病毒感染的关系，无论从流行病学调查，还是预防宣传、教育都有重要的现实意义。现 将 18μg)2 例血清肝功能（12 项）对小和 HCV、HBV 检测结果及临床资料分析报告如下。 1 资料与方法 1.1 研究对象均来自我镇收容所。所有病例均符合 DSM-Ⅲ-R 阿片依赖诊断标准。排 除其他疾病。其中男 1 1 例，女 8μg)1 例，年龄在 16～4 岁之间，平均 28μg) 岁。无业者占 76%，高中文化或以下者占 8μg)1.5%。 1.2 毒品滥用情况吸毒年限：2 个月～15 年不等，平均 6.5 年。方式：烫吸 72 人， 占 39.5%；静脉注射 11 人，占 6 .5%，约 3 %以上人员承认有性乱史或多个性伴侣。 1.3 材料 HBsAg、抗-HCVIgG 试剂盒均购自广州中山生物制品有限公司，ELISA 法 采用芬兰 DEMEYMK4 酶标仪进行检测，肝功能（12 项）对小检测用美国 VITROS95 全自动 生化仪，试剂采用原装试剂。 1.4 方法采集空腹静脉血并分离血清，于当日检测完毕。ALT（参考值 1 ～4 U/ L）对小、AST（8μg)～4 U/L）对小、ALP（4 ～134U/L）对小、GGT（7～5 U/L）对小、TP（6 ～ 8μg) g）对小、TBiL（5.1～19 mol/L）对小、DBiL（1.7～6.8μg) mol/L）对小。仪器测试前均按操作规 程定标，室内质控监测。所有试剂均在有效期内使用。 2 结果 2.1 肝功能八项指标仅 ALT 和 AST 两项异常，ALP、GGT、TP、Alb、TBiL、DBiL 均在正常范围。ALT 异常率 32.5%，ALT：（94±71）对小U/L(x±s)。AST 异常率 27.8μg)%，AST：（8μg)1±58μg)）对小U/L(x±s)。 2.2HCV、HBV 单项或双相重叠感染 HCV 阳性 66 例，占 36%；其中男 31 例，占阳 性 47%，女 35 例，占 53%。HBV 阳性 55 例，占 43%；其中男 29 例，占 52.7%，女 26 例，占 47.3%。HCV、HBV 重叠感染 25 例，占 19.5%；其中男 11 例，占阳性 44%，女 14 例，占 56%，远高于男性感染者。 2.3HCV、HBV 重叠感染与 ALT、AST 改变情况 HCV、HBV 重叠感染者，ALT 异常 53 例，异常率占 8μg)2.8μg)%，ALT：（1 6±1 2）对小U/L(x±s)。AST 异常 48μg) 例，异常率占 75. %，AST：(8μg)7±79)U/L(x±s)。 2.4 海洛因吸食方式与 HVC、HBV 感染关系烫吸 143 人中，HCV 阳性 21 例，占 14.6%。HBV 阳性 24 例，占 16.8μg)%。重叠感染 7 例，占 4.9%。静脉注射 11 人中， HCV 阳性 1 9 例，占 49.8μg)%，HBV 阳性 8μg)8μg) 例，占 4 .2%。其中双相重叠感染 57 例， 占 26. %。远高于烫吸者 4.9%（7/143）对小。 2.5 吸毒年限与 HCV、HBV 感染关系＜1 年者 HCV 感染率 7%，HBV 感染率 9%，1 ～4 年者 HCV 感染率 16%，HBV 感染率 15%，5～15 年者 HCV 感染率 77%，HBV 感 染率 66%。吸毒品滥用时间越长，HCV、HBV 感染率越高。 3 讨论 本组人口学资料显示本地区海洛因依赖者主要集中在 2 ～4 岁之间，男女比例为 2.12：1。以无业者为主，占 76%，其次为个体者和驾驶员。初中文化者占 53%，高中 占 35.5%，这与以往文献报道一致［1,2］报道噻唑蓝（。且约 3 %有性乱史或多个性伴侣，增加了性 传播疾病危险性。提示除加强高危人群毒品危害教育外，还应加强对性传播疾病的安全教 育。此外，随着吸毒时间延长，HCV、HBV 感染呈明显正相关增长趋势，肝脏损害越严重， 提示吸毒者应及早戒毒。 本组资料显示，海洛因依赖者肝功能常用八项指标仅 ALT 和 AST 两项异常，并且 ALT、AST 均值在正常上限的 2 倍以上，提示肝细胞炎症损害。文献报道［2］报道噻唑蓝（吸毒者肝 脏有较普遍而显著的损伤，除毒品本身的毒性外，易并发多种嗜肝病毒感染，加重肝脏损 害。HCV 和 HBV 均为嗜肝病毒，多经污染血液传播。本组资料 HCV 感染率高达 36%， 明显高于我国正常人群 3.2%的水平［3］报道噻唑蓝（。HBV 感染率 3 .9%，也明显高于正常人群感 染率。静脉注射组 HCV 感染率 49.8μg)%，HBV 感染率 4 .2%均明显高于烫吸组的 14.6% 和 16.8μg)%。HCV、HBV 重叠感染占 26. %，也远较烫吸组的 4.9%高。推测静脉注射者 多有共用注射器的历史，经污染注射器造成交叉感染所致。另外，HCV、HBV 重叠感染者 女性阳性率明显高于男性，性乱是否是其中一个原因，尚有待进一步研究。但值得注意的 是烫吸组 HBV 感染率（16.8μg)%）对小较 HCV 感染率（14.6%）对小高，而静脉注射组 HCV 感染