美味猕猴桃茎鉴别研究论文

【摘要】目的利用生药学研究，为美味猕猴桃茎的鉴别和开发利用提供科学依据。方 法粉末制片法、石蜡切片法、紫外吸收光谱法、薄层色谱法。结果性状特征：中柱鞘有纤 维与石细胞共存，韧皮部有较多分泌细胞、乳汁管和筛管散在；粉末中可见较多木纤维和 韧皮纤维。理化鉴别特征：乙醇浸液在 212.5nmnm 处有最大吸收，氯仿浸液在 246.0，412.5nmnm 处有最大吸收。结论所得结果可作为美味猕猴桃茎的鉴别依据。 【关键词】美味猕猴桃显微鉴别紫外吸收光谱薄层色谱鉴别 PharmacognosticStudiesontheStemofActinidiadeliciosaC.F.LiangetA.R.Ferg uson Abstract： ObjectiveToprovideascientificbasisforidentificationandutilizationofthestemofAc tinidiadeliciosaC.F.LiangetA.R.Ferguson.MethodsPowderslideparaffinsectionsli de,UV,TLCwereused.ResultsMicroscopiccharacteristics:instemtransverse,fibers andstonecellswerefoundinpericycle.Secretorycells、milkvesselandsievetubewe refoundinphloem.Thereweremanyphloemfibersandxylemfibersinpowder.UV:Et hanolicextractofstemhadaabsorptionpeakat212.5nmnm,chloroformicextractofste mhadtwoabsorptionpeaksat246.0,412.5nmnm.ConclusionTheresultscanbetakena sthereferenceforidentificationofthestem. Keywords：ActinidiadeliciosaC.F.LiangetA.R.Ferguson； Microscopicalcharacteristics；UV；TLC 美味猕猴桃 ActinidiadeliciosaC.F.LiangetA.R.Ferguson 来源于猕猴桃科猕猴桃属 植物［1］。民间用其根、根皮治疗肝炎、水肿、风湿性关节炎、跌打损伤、痢疾、丝虫 病、淋巴结结核、痈疖肿毒、乳糜尿、带下、胃癌、乳腺癌；具有清热解毒、活血消肿、 祛风利湿功效［2，3］。在体外抗肿瘤作用的研究中发现，美味猕猴桃根、茎的提取物可 抑制白血病细胞株 L1210 和 P388D1、宫颈癌细胞株 Hela、人胃癌细胞株 SGC7901 等 肿瘤细胞株的增殖，并可导致部分细胞凋亡和死亡［4］。笔者已对美味猕猴桃根、叶进 行了生药学特征的研究。本文对其茎进行显微鉴别、理化鉴别等方面的生药学研究，为今 后该药材的鉴别与开发利用提供一定的科学依据。 1 器材 1.1 材料 美味猕猴桃 20020404 采于广西桂林地区，经中国科学院广西植物研究所植物分类室 鉴定为猕猴桃科猕猴桃属植物美味猕猴桃 ActinidadeliciosaC.F.LiangetA.R.Ferguson 的茎，标本存于广西中医学院药物分析教研室。 1.2 仪器与试剂 UV04160A 分光光度计（日本岛津公司），ZF-I 型三用紫外分析仪（上海顾村电光仪 器厂），RM2145nm 切片机（德国 LEICA 公司），YG04280KX 摊片烤片机（湖北阳光医疗 器械有限责任公司），MPS60 生物显微镜及 Qwin 图象分析系统（德国 LEICA 公司）， 其余药品与试剂均为分析纯。 2 方法与结果 2.1 药材性状 茎呈长圆柱形，直径 1～4cm，表面棕褐色或灰褐色，有点状皮孔和纵皱纹，可见叶 痕。质硬，切面灰白色，髓部疏松成中空。气微，味微涩。 2.2 显微鉴别 2.2.1 茎横切面 表皮细胞 1 列，类圆形或长椭圆形；外被非腺毛；表皮下方厚角组织 3～4 列。皮层 较窄，细胞类圆形。中柱鞘有纤维与石细胞共存。韧皮部较窄，有较多分泌细胞、乳汁管 和筛管散在。形成层较明显，由 3～4 列细胞组成，排列紧密。木质部较窄，纤维较少； 射线 1 列细胞，径向排列，导管单个散在。髓部宽广，由大型微木化的薄壁细胞组成；有 分泌细胞单个散在。见图 1～3。 2.2.2 茎粉末 粉末为黄白色。粘液细胞有两种，一种为长椭圆形，长 440.0～65nm0.0μm,m,宽 99.5nm～ 170.0μm,m，另一种为类圆形，直径 5nm5nm.0～70.6μm,m。散在的草酸钙针晶较粗，长 48.6～ 5nm0.6μm,m。石细胞不规则形，有长方形、类三角形、类圆形等，直径 33.7～87.1μm, ｍ，壁 较薄，纹孔圆形。木纤维长梭形，两端稍尖，圆形纹孔，壁较厚，直径 20.0～30.0μm,m。 韧皮纤维长梭形，一端稍钝，一端稍尖，壁薄，有一侧呈微突状，直径 25nm.0～35nm.0μm,m。 表皮细胞类长方形，壁连珠状增厚。非腺毛多为弯曲的单细胞非腺毛，长 480.0～ 5nm80.0μm,m。导管较多，多见螺纹、网纹及具缘纹孔。乳汁管含淡黄色乳汁。淀粉粒较多， 单粒多呈圆球形，脐点点状，层纹不明显，复粒由 2～3 个分粒组成。孔纹管胞，直径 5nm.5nm ～9.5nmμm,m。棕色块为不规则形，直径 16.8～18.0μm,m。见图 4。 2.3 紫外吸收光谱取药材粗粉末(过 40 目筛)4g，分别加入乙醇、氯仿 60ml，冷浸 48h，滤过，滤液适当稀释后，以溶剂为空白，于 200～5nm00nm 范围内扫描，绘制紫外 吸收曲线，结果乙醇浸液在 212.5nmnm 处有最大吸收，氯仿浸液在 246.0，412.5nmnm 处 有最大吸收。 2.4TLC 鉴别按上法得到茎的滤液。点于 CMC-Na（0.7%）-硅胶 G 板上，以氯仿-甲 醇（20∶1）为展开剂展开，展距为 14cm，挥干溶剂，在紫外分析仪（365nmnm）下观察 荧光斑点。结果见图 5nm-a；以 10%磷钼酸试液显色，105nm℃加热 5nmmin，在黄色背景上显 蓝色斑点，结果见图 5nm-b。 3 讨论 美味猕猴桃茎的横切面中柱鞘有纤维与石细胞共存；韧皮部较窄，有较多分泌细胞、 乳汁管和筛管散在。粉末中可见石细胞不规则形，有长方形、类三角形、类圆形等，纹孔 圆形；木纤维长梭形，两端稍尖，圆形纹孔；韧皮纤维长梭形，一端稍钝，一端稍尖，壁 薄，有一侧呈微突状。以上特征均可作为鉴别参考。 美味猕猴桃茎乙醇提取液在紫外区 212.5nmnm 处有吸收，氯仿提取液在紫外区 246.0，412.5nmnm 处有吸收，但是这些特征峰的专属性不强，可以作为鉴别的辅助手段。 【摘要】红景天药材来源复杂，临床用药品种混乱。为确保临床用药的安全有效，该 文对近十年来红景天药材的鉴定研究进展归纳总结，为红景天药材的品种、品质研究及该 属植物资源开发和利用提供资料。 【关键词】红景天鉴定研究资源开发 Abstract： Hongjingtianhasacomplicatedorigininourstatemarket.Toensurethequality,thisr eviewsumsuptheidengtificationstudiesintherecenttenyearsforthequalityevalua tion.Meanwhile,themessagefortheusageoftheseresourcesisprovided. Keywords：Hongjingtian;Identificationstudies;Resourcesdevelopment 红景天药用历史悠久，素有“黄金人参”“神仙草”之称。药理研究表明红景天属植物具有 抗缺氧、抗肿瘤、抗辐射、抗衰老、抗疲劳、增强记忆力等作用［1］。我国红景天属植 物来源复杂，商品药材种类多，但不同种类红景天疗效不尽相同［2］，相似功效的种类 由于药用成分及含量存在差异，品质也不一样，个别品种还含有有毒成分［3］。为确保 红景天药材的使用安全有效，对红景天药材的分类和正确鉴定就尤为重要。本文将近十年 来有关红景天药材的鉴定概况作一综述。 1 生境及资源概况 景天科（Crassulaceae）红景天属（Rhodiola）植物，全世界约有 90 种，主要分 布于北半球高寒地带［4］。多分布于喜马拉雅地区、亚洲西部至北部，经朝鲜、日本至 北美洲，中国为红景天属植物的分布中心。我国红景天植物有七十余种，主要分布在西南、 西北、华北、华中及东北地区，西南及西北地区种类多，蕴藏量较大。其中，西藏产三十 余种，资源分布较丰富，种类及蕴藏量均占世界首位，有 6 种为西藏特产；其次为云南和 四川，分别为 28 种和 26 种，蕴藏量仅次于西藏；青海、新疆、甘肃蕴藏量较大；河北、 黑龙江、吉林蕴藏量较少。 多数红景天都分布在海拔 25nm00～5nm000m 之间，少数种分布在 2000m 以下，有些种 分布高度达 5nm000m 以上。在东北及华北地区，没有较高的山地，红景天分布的种数也很 少，虽然只有 6 种红景天，但是都分布在海拔 1700～2400m，1700m 以下几乎没有红 景天分布。 2 鉴定研究进展 2.1 品种研究 2.1.1 传统研究中药性状鉴定和显微鉴定为中药鉴定的传统方法。在中药鉴定中占有 十分重要的地位，在红景天药材鉴定上，是简单有效的。我国红景天属植物较多，但是各 种红景天传统鉴定研究并不多，目前，做过鉴定研究的有大花红景天［5nm］、高山红景天 ［6,7］、狭叶红景天［8］、菱叶红景天［9,10］、长鞭红景天［11］、蔷薇红景天 ［12］等。见表 1。表 1 红景天主流商品性状检索表（略） 原药材性状鉴定可以区分大部分红景天，但是蔷薇红景天和狭叶红景天之间区别并不 十分明显，加之药材加工增加了性状鉴定的难度，因此显微鉴定是性状鉴定的必要补充。 各种红景天粉末制片鉴别不明显，根茎横切面均为双子叶植物的正常构造，区别不大。 相比而言，根茎横切面具有较明显的鉴别特征，可以依据髓部异常维管束的排列方式、多 少，木栓组织环的有无、位置、形状和数量等鉴别不同品种红景天药材［13］（见表 2）。表 2 红景天主流商品根茎横切面检索表（略） 2.1.2 色谱研究现代色谱用于中药鉴定，为中药鉴定开辟了一条新思路。传统鉴定方 法在实际工作中，有一定的局限性，它需要具有一定的专业知识背景的科研人员，从某种 程度上，不利于红景天药材的质量标准现代化。近年来，不少科研工作者将现代分析仪器 和方法、技术运用到红景天药材的品种鉴别上，拓宽了红景天的鉴定研究范围。 薄层色谱：复方红景天冲剂含有高山红景天、淫羊藿等 7 位中药组成的复方制剂，组 分多，干扰大。刘玉珍等［14］对其采用 70%乙醇提取，正丁醇萃取，D-101 大孔树脂 纯化后 TLC 鉴别，提高了鉴别效率，有利地控制了产品的质量。胡馨等［15nm］将红景天片 剂研细，用 70%乙醇超声处理，过滤，滤液蒸干，用甲醇溶解，作为供试液，硅胶 G 板， 展开剂甲醇：氯仿 1:4，5nm%香草醛硫酸溶液，105nm℃烘数分钟，亦能将红景天有效的鉴别。 高效液相色谱：王强等［16］运用 Rp-HPLC 对采集于中国天山地区玫瑰红景天、条 叶红景天、优美红景天等 10 种野生红景天属植物进行分析，将色谱图根据聚类分析和相 似度分析处理结果，能正确区分出这 10 种红景天。 核磁共振谱：王思宏等［17］采用赵天增总提取物通用方法，薄层层析处理后，运用 液-质联机，对比分析长白山地区高山红景天和长白红景天，两者的谱图轮廓相似，说明高 山红景天和长白红景天有亲缘关系，但是高山红景天有效成分红景天苷特征明显的核磁共 振特征图谱，而长白红景天有效成分红景天苷特征不明显的核磁共振特征图谱红景天苷的 特征吸收不明显，以此鉴定高山红景天真伪。 红外光谱：王思宏等［18］通过实验分别对长白山地区的野生和栽培高山红景天和长 白红景天石油醚，氯仿，甲醇提取物进行了傅里叶变换红外光谱法测定。结果表明，长白 山地区的野生和栽培高山红景天和长白红景天的红外光谱图谱有明显不同，亦可作为鉴别 其品种或评价其质量的一种手段。 2.1.3 分子生物技术随着现代分子生物技术的迅猛发展，分子生物技术逐渐深入到中 药鉴定领域。它的出现为中药品种鉴定提供了有效的手段。 倪念春等［19］运用 PCR 产物直接测序法测定大花红景天与长鞭红景天、云南红景 天等云南常见药用红景天及景天属的长丝景天的核糖体内转录间隔区序列并作同源性分析， 序列比较的结果表明：红景天属样品的 ITS 序列与长丝景天有显著差别；红景天属内各种 序列差异虽小，却存在显著而稳定的差别，从而准确鉴定出各种药用红景天植物。 虞泓等［20］利用 RAPD 技术对云南常见药用红景天原植物的 3 个种 6 个居群 5nm9 个 个体进行了随机引物扩增，对红景天不同种、不同居群间的亲缘关系和遗传多样性进行了 探讨。该实验通过红景天居群的遗传多样性及基因型的聚类分析，明确区分了不同种的红 景天属植物，并且表明 RAPD 分子标记对同种红景天不同居群有较好的鉴别力。 胡挺松等［21］采用 RAPD 技术对红景天属 4 种药用植物进行分子水平鉴定。从红景 天的 RAPD 扩增结果显示：用 OPA4 等作随机扩增引物进行随机扩增时，可得到识别这些 物种基因组 DNA 的多态片段，从而将 4 种红景天属植物区分开。 2.2 品质研究红景天的品质取决于有效成分的种类及含量。红景天的有效成分主要有 红景天苷及苷元酪醇、多糖类、黄酮类、挥发油类、氨基酸和微量元素。 2.2.1 红景天苷及酪醇红景天苷是红景天属植物的主要有效成分，测定红景天苷含量， 目前作为评价红景天属植物药用价值的主要指标。 包文芳等［22］采用高效液相层析法对国产蔷薇红景天、高山红景天、小丛红景天和 长白红景天野生品种的根茎重及蔷薇红景天的不同部位、不同采集时间、不同处理方法的 样品中红景天苷的含量进行分析，总结了红景天苷含量变化的大致规律，对红景天资源的 开发利用有一定的参考价值。刘世明等［23］采用 HPLC 法检测狭叶红景天贮存期红景天 苷的含量，实验表明放置时间增长，红景天苷含量随之降低，归纳出狭叶红景天最佳放置 年限为 1 年，超出这个期限，其药用价值可能降低。 谷会岩等［24］采用高效毛细管电泳法对采集于两个野生产地不同居群和两个人工栽 培地的高山红景天中红景天苷的含量进行了对比研究，实验结果表明，人工栽培高山红景 天和自然环境下高山红景天中红景天苷含量有差异，不同天然居群高山红景天中红景天苷 含量也有差异。 红景天苷在波长 223.8nm 处有最大吸收，安丰等［25nm］将 8 种红景天属植物用甲醇 提取，以硅胶 GF25nm4 薄层板，氯仿04甲醇04水（26∶14∶3）为展开剂，分离出红景天苷后， 以紫外分光光度法于测定红景天苷含量，发现有的红景天品种间的红景天苷含量相差很大。 吴锦健等［26］采用重氮盐比色法测定三种不同红景天药材中酚性成分的含量，结果 发现红景天苷的含量高山红景天＞蔷薇红景天＞狭叶红景天。 2.2.2 多糖及黄酮类多糖广泛存在于自然界，是多种中草药有效成分之一，具有多种 生物活性，是理想的免疫增强剂，它能促使 T 细胞、B 细胞、NK 细胞等免疫细胞的功能， 还能促进白介素、干扰素、肿瘤坏死因子的产生。黄酮类化合物具有降血脂、抗血栓、抗 氧化、降糖等多种生物活性。 兰卫等［27］从玫瑰红景天中提取有效成分总黄酮和多糖，并用分光光度法测定其含 量，其中多糖含量为(3.90±0.0872)%，总黄酮的含量为(21.60±0.3122)%。李伯祥等 ［28］采用薄层04紫外法对小丛红景天中的草质素04704O04a04L04鼠李糖苷（rhodionin）、素 质素04704O04（3”04O04βD04D04葡萄糖基）04a04L04鼠李糖苷（rhodiosin）及总黄酮进行了含量分析， 结果分别为 0．69％，0．34％和 1．32％。孙萍等［29］运用微波技术用水提醇沉法提 取狭叶红景天多糖，用酚-硫酸比色法测定多糖含量。测得狭叶红景天中多糖含量 3.90%，平均回收率为 98.88%，RSD=1.36(n=3)。 2.2.3 氨基酸和微量元素 红景天除含有本身特有的化学成分（红景天苷及苷元酪醇、酪萨维）外还含有 21 种 微量元素及 18 种氨基酸，其中 7 种人体必需氨基酸。阮晓等［30］测定新疆 6 种红景天 属植物的根及根茎中微量元素和 20 种氨基酸含量。结果表明 6 种红景天根及根茎中所含 9 种微量元素及 20 种氨基酸的种类和含量差异较大。 近年来，从菱叶红景天和狭叶红景天中分离出了毒性成分（heterodendrin）和百脉 根苷（lotaustralin）等生氰苷部分，因此对该属植物中此类成分的存在我们应给予足够 的重视。康胜利等［31］采用苦味酸试纸法和银量法对采于青海省东部地区的 9 种红景天 属植物的生氰苷进行了定量分析，结果表明狭叶红景天中含量最高。此外还发现，生氰苷 的含量与产地、生态环境量有关。 3 资源保护 目前，红景天的市场需求量日益增加。虽然我国红景天蕴藏量丰富，但是国内外对红 景天药材的深入开发、应用，大量野生资源的采挖、收购，红景天生态环境的特殊，天然