2019执业药师考试中药学备考考点资料:乌梢蛇的理化鉴别

　　（1）　聚丙烯酰胺凝胶蛋白电泳鉴别：
　　①　试剂配制和凝胶制备：试剂和凝胶按文献方法制备。分离胶浓度为7.5％，浓缩胶浓度为2.5％。
　　②　样品液制备：取样品1g，加入生理盐水4ml，研磨成匀浆，以4000rpm离心15分钟，取上清液，加入1倍量丙酮，4000rpm离心15分钟，放置冰箱中备用。
　　③　电泳分析：取样上清液，加入1/2体积的40％蔗糖液，用微量注射器在凝胶样品池中加样，点样量20μl.上电极液中加入数滴溴酚蓝指示剂示踪。电泳开始时，电流控制在10mA，样品进入分离胶后加大至15mA，待指示剂行至末端约1cm时，即可停止电泳。取出胶板，放入7％乙酸溶液中固定10分钟，然后放入0.2％考马斯亮兰R250染色液中染色半小时。用蒸馏水冲去凝胶表面附着的染料，再放入含20％甲醇和7％醋酸的脱色液中，脱色数小时至背景无色为止。
　　电泳结果：乌梢蛇一级带三条，二级带和三级带各二条，扩散带一条。
　　（2）　紫外光谱鉴别：取粉末1g，分别用石油醚和无水乙醇各10ml浸泡36小时，前6小时每隔1小时振摇1次，滤过，滤液稀释成一定浓度，置1cm比色池中，UV-265FW紫外分光光度计上测定吸收曲线，扫描范围200～300nm，扫描速度60nm/分钟。结果乙醇浸出液在210.0nm，石油醚浸出液在215.0、240.0、246.0处有吸收峰。此特征能与其他蛇类区别。