检验主管技师考试考点：糖化血红蛋白测定常用检测方法

 糖化血红蛋白测定常用检测方法：

 

1、离子交换色谱法(HPLC、LPLC)

 

基于电荷差异进行分析。葡萄糖与血红蛋白(Hb)的β链N末端缬氨酸(Val)结合降低了等电点，导致糖化Hb带的正电荷比未糖化Hb的少，与树脂的附着力小，可以分别用不同的离子浓度的缓冲液在不同的时间将Hb从阳离子交换柱中洗脱下来，再根据每个峰值下的面积来计算HbA1c占总Hb的比例。精密度高，有些产品CV可以小于1%，非特异性问题存在，有些产品仍会受变异Hb 、氨基甲酰化和乙酰化Hb影响，可采用高通量的高效液相色谱(HPLC)和低压系统(LPLC)方法

 

2、美国糖化血红蛋白标准化计划(NGSP)的参考方法

 

(1)电泳法(Elec)

 

研制于上世纪80年代，与离子交换层析法一样也是基于糖化和非糖化Hb所带的电荷不同进行分离。该方法操作简易，不受温度、pH影响，在当时相对其他方法来说精密度较高，但是需成批样本分析，分析时间较长，临床上现已较少使用。

 

(2)亲和色谱法(HPLC-af chr)

 

基于结构不同进行分析。利用对m-氨苯基硼酸依赖的糖化血红蛋白1，2-顺式二醇基团和固定的硼酸阴离子的特殊反应而设计的。与Hbα和β链的缬氨酸(Val)和赖氨酸(?-Lys)连接的葡萄糖均会与硼酸结合形成可逆的复合物，未糖化Hb先被洗脱后，再用山梨醇分离复合物，并将全部糖化Hb洗脱出来。

 

检测结果是“总”糖化Hb，通过校准其结果与HPLC有良好的相关性，不受温度、尿毒症、HbF或Schiff base的干扰，室内精密度较高，实验室间的结果存在差异

 

(3)免疫法(Im tur)

 

抗原抗体反应原理。单克隆抗体技术的运用使该方法有了快速发展，最早是英国Dako公司研制出识别葡萄糖附着在Hb的β链N末端8个氨基酸抗原位点的单克隆抗体，用酶免疫原理(EIA)进行检测。

 

具有较好的精密度、与其他方法有较好的相关性，可以在自动生化仪上用比浊法进行定量测定，抗原与IFCC一级参考物质β链N末端6个氨基酸肽端相似，如果用6个氨基酸的为抗原，当Hb发生第6位氨基酸变异[HbS(β6glu→val)和HbC(β6glu→lys)]时将不会被识别，可导致厂家间的检测结果存在着偏倚，各厂家产品的单抗针对的抗原决定簇不同、亲和力不同等因素也会影响结果的可比性。

 

(4)酶法(En)

 

近几年才推出在自动生化仪上测定的生化反应方法。其原理是在蛋白酶的作用下，切断HbA1c的?链N末端的糖化二肽，糖化二肽在果糖基肽氧化酶的作用下生成过氧化氢，在过氧化物酶的存在下与显色剂产生显色反应，通过测定吸光度求出HbA1c的百分浓度。该方法精密度好，同HPLC和免疫法均有较好的相关性。

 

快速检验(POCT：Mic chr、Flu im)