2020年军队文职招聘医学检验技术资料整理：药敏试验（纸片扩散法）

一、操作前准备

1.菌种

(1)标准对照菌：金黄色葡萄球菌ATCC25923、大肠埃希菌ATCC25922、铜绿假单胞菌

ATCC27853。

(2)临床分离待检菌:金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌和铜绿假单胞菌。

2.培养基与试剂：水解酪蛋白琼脂(M-H琼脂)、无菌生理盐水、0.5麦氏标准比浊管、抗菌药物纸片。

3.其他：无菌棉拭子、镊子、直尺(或游标卡尺)、接种环等。

二、操作步骤

1.菌液制备

(1)直接菌落法：从孵育18-24小时的非选择性培养基(如血琼脂)平板上挑取单个菌落直接用肉汤或无菌盐水制成0.5麦氏标准浊度的菌悬液。

(2)对数生长法：从琼脂平板上选取培养18-24小时、至少3-5个形态特征一致的菌落，用接种环转移至含45ml的肉汤管(如胰酶消化大豆肉汤)中，35℃孵育4-6小时。用无菌盐水或肉汤调整菌液浊度至0.5麦氏标准。

2.接种

细菌悬液制备后15分钟内接种至M-H琼脂平板。用无菌棉拭蘸取菌悬液，在试管内壁旋转挤去多余菌液,于M-H琼脂表面均匀涂布接种3次,每次旋转平板60°,最后沿平板内缘涂抹1周。

3.贴药敏纸片

涂布后的平板在室温下干燥3-5分钟，用纸片分配器或无菌镊子将纸片贴于琼脂表面并轻压，使纸片与琼脂表面完全接触。各纸片中心相距应大于24mm，纸片距平板内缘应大于15mm。

4.孵育

将平板倒置放入35℃孵箱(苛养菌药敏平板应放置于5%-10%CO2环境中24-48小时)，16-18小时(厌氧菌厌氧环境48小时)读取结果，葡萄球菌和肠球菌必须孵育24小时以检测对苯唑西林和万古霉素的耐药性。

5.结果判断

用游标卡尺或直尺量取抑菌圈直径。先量取质控菌株的抑菌圈直径，以判断质控是否合格。然后量取试验菌株的抑菌圈直径。

三、注意事项

1.每次试验时,均应采用质控菌株进行质量控制。质控菌株的抑菌圈应落在预期的范围内，否则则为失控。

2.培养基的酸碱度与平板厚度、菌液浓度要适宜，否则将对试验结果造成影响。

3.药物纸片的贴放要均匀，一旦接触琼脂表面，就不能再移动，因为与培养基接触后，纸片上的药物已开始扩散到培养基中。

4.抑菌环的测量要仔细、精确。