ELISA属于酶免疫分析中的异相酶免疫分析，其基本原理是抗原或抗体预先结合到某种固相载体表面。测定时，将待测样品(含待测抗体或抗原)和酶标抗原或抗体按一定程序与结合在固相载体上的抗原或抗体反应形成抗原抗体复合物。反应终止时，固相载体上酶标抗原或抗体被结合量与待测标本中待检抗体和抗原的量呈一定比例，经洗涤去除反应液中其他物质，加入底物进行显色，最后通过定性和定量分析有色产物量即可确定样品中待测物质含量。
其中，最常用的酶是辣根过氧化物酶(HRP)，最常用的底物是四甲基联苯胺，常用的固相载体是聚苯乙烯。
ELISA可用于测定抗原，也可用于测定抗体。常见测抗原的方法有双抗体夹心法、双位点一步法;测抗体的方法有间接法、双抗原夹心法;既可测抗原又可测抗体的方法有捕获法、竞争法。现将各类方法的常考要点总结如下：
| 原理 | 考点 | |
| 测抗原 | 双抗体夹心法 | 检测抗原最常用的方法 |
| 双位点一步法 | 易出现“钩状效应”，相当于后带现象，造成假阴性 | |
| 测抗体 | 间接法 | 测抗体最常用的方法，只要更换不同的固相抗原，可以用一种酶标二抗检测各种与抗原相应的抗体 |
| 双抗原夹心法 | 考题中很少涉及 | |
| 测抗原或抗体 | 捕获法 | 用于检测特异性IgM |
| 竞争法 | 待测标本含量与显色程度成反比 | |
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