解放军文职招聘考试支原体及检验

 支原体及检验

● 考点
◆概述
◆肺炎支原体
◆解脲脲原体

　　【内容讲解】
一、支原体
一类无细胞壁、呈高度多形态性，能通过除菌滤器，在人工培养基上能生长繁殖的最小原核型微生物。
（一）分类与命名

（二）生物学特性
1.形态与结构
◆个体微小，大小约0.2～0.3μm，呈高度多形态，有球形、杆形、分支丝状等。
◆G-，但不易着色，常用吉姆萨染色呈淡紫色。
◆无细胞壁仅有细胞膜是与细菌区别的主要特点。
◆凡能作用于胆固醇的物质如二性霉素B、皂素及洋地黄苷均可破坏细胞膜致其死亡。
2.培养特性　
◆需氧或兼性厌氧，通常在含95%N2、5%C02环境中生长良好。
◆营养要求较一般细菌高，可在含牛心浸液、马血清与酵母浸液的培养基上生长。
◆支原体一般在pH 7.8-8.0间生长，低于7.0则死亡。脲原体最适pH 5.5-6.5。
◆菌落特征（与细菌L型菌落极相似）：菌落呈“荷包蛋”样。
◆支原体与细菌L型比较：
相同点：多形性、可通过滤菌器、对低渗敏感、菌落呈 “荷包蛋”样。
不同点：细菌L型在无抗生素等因素作用下，易返祖，而支原体为独立的一类微生物，不出现返祖现象。
3.生化反应
初步鉴别支原体的依据：
支原体 葡萄糖 精氨酸 尿素 吸附红细胞
肺炎支原体 + - - +
生殖道支原体 + - - -
人型支原体 - + - -
穿透支原体 + + - +
解脲脲原体 - - + -
进一步鉴别的依据：
四氮唑还原能力、亚甲蓝抑制、溶解红细胞、吸附红细胞。
4.抗原成分　
细胞膜外层蛋白质是主要的型特异性抗原，具有免疫原性。
5.抵抗力　
对热的抵抗力一般与细菌相似，有的较弱。
支原体耐冷，不耐干燥。支原体对一些化学物质比细菌敏感，容易被重金属盐类、苯酚、来苏儿等化学消毒剂灭活。
对渗透压敏感，对作用于细胞壁的抗生素不敏感，对抑制或影响蛋白合成的抗生素如四环素、红霉素等敏感。
（三）微生物检验
标本直接镜检对各种支原体的诊断意义不大。
主要靠分离培养与血清学检验。

　　二、肺炎支原体
（一）生物学特性
短细丝状，典型的形态类似酒瓶状。吉姆萨染色呈淡紫色。
分离培养的最适pH为7.6～8.0。
Pl蛋白是肺炎支原体的主要特异性免疫源，是目前血清学诊晰的主要抗原。
（二）致病性
可从口腔、呼吸道分离到，主要通过飞沫传播，是人类原发性非典型性肺炎的主要病原体之一。
儿童和青年易感，首先引起上呼吸道感染，然后下行感染。
病理变化主要是间质性肺炎、急性细支气管炎。还可引起肺外并发症。
（三）微生物检验
1.分离与鉴定这是确诊支原体感染的可靠方法之一。
50%C02环境中培养，初次分离需1～2周才长菌落。出现“荷包蛋”样，需经数次传代后，菌落开始典型，典型菌落可初步诊断。分离培养对临床快速诊断意义不大。
典型菌落可初步诊断，再进一步进行生化反应：
（1）葡萄糖（+）、精氨酸（-）、尿素（-）
（2）氯化三苯基四氮唑（TTC）还原试验（-）
（3）生长抑制试验（GIT）和代谢抑制试验（MIT）
（4）红细胞吸附试验（+）
2.血清学试验
（1）特异性血清学试验
1）ELISA技术：抗P1蛋白单抗检测标本中的肺炎支原体P1蛋白。
2）补体结合试验：一般血清滴度≥1：64～1：128即为阳性，病程中双份血清至少效价有4倍增长，近期感染可能性越大。主要检测IgM抗体，初次感染时出现阳性，再次感染时常不出现阳性。
3）间接血细胞凝集试验：主要检测IgM抗体。
（2）非特异性血清学试验：
冷凝集试验：一般血清滴度≥1：64即为阳性，病程中双份血清至少效价有4倍增长，近期感染可能性越大。
3.PCR试验快速检测

　　三、解脲脲原体
（一）生物学特性
液体培养基中菌体以球形为主，直径约50～300nm。
吉姆萨染色呈紫蓝色。
生长最适pH为5.5～6.5。
脂多糖抗原、蛋白抗原、脲酶抗原，后者是种特异性抗原。
（二）致病性
人类生殖道最常见的寄生菌之一，在特定环境下可以致病。
主要通过性行为传播，是非淋菌性尿道炎主要病原体之一。
还可通过垂直传播，引起新生儿，特别是早产儿，呼吸道感染和中枢神经系统感染。
（三）微生物检验
1.分离培养：相对容易和快速的。
◆接种于含酚红、尿素及血清的液体培养基内，最好在95%N2和50%C02环境中，37℃孵育，1～2天内即可出现生长现象。
◆出现典型菌落，则进行形态观察及生化试验，进行初步鉴定。分解尿素，不分解葡萄糖、精氨酸。
◆进一步利用特异性血清作MIT和GIT试验进行最终鉴定。
2.核酸检测　
PCR方法扩增后的产物进行核酸杂交，鉴定解脲脲原体。
3.血清学诊断意义不大。
支原体及检验

　　人型支原体
形态与结构：与溶脲脲原体相似
生化：分解精氨酸，不分解尿素和葡萄糖
抵抗力：对1：2000的醋酸铊与红霉素（100mg/L）不敏感，对四环素和林可霉素敏感
液体培养基：因分解精氨酸产氨，易死亡
固体培养基：菌落大小为40～60μm，个别菌落达100～200μm，呈典型“油煎蛋”样
主要寄居于生殖道
通过性接触传播
引起盆腔炎、输卵管炎、产后热、阴道炎、宫颈炎及肾盂肾炎等
也能引起新生儿感染，如脑膜炎、脑脓肿、硬脑膜下脓肿等
穿通支原体
（一）生物学特性
形态：杆状或长烧瓶状。一端为尖形结构，具有黏附、穿入细胞的作用
培养：营养要求高，菌落呈“油煎蛋”样；生长较慢，初代多在10天以上
生化：发酵葡萄糖，水解精氨酸，但不分解尿素
本菌对红霉素、四环素、林可霉素敏感，对青霉素不敏感
（二）致病性
研究认为穿通支原体、发酵支原体、梨支原体三种新支原体是加速AIDS进程的一个协同因子。
2000年国内学者从AIDS患者尿中分离到1株穿通支原体，从病原学上证实我国AIDS和HIV患者中存在感染。
（三）微生物学检验
标本：咽分泌物、血清、尿液等
1.分离培养
选SP-4培养基
若由红变黄透明无沉淀，视“培养可疑阳性”，再用滤膜过滤。滤液转种传代，当培养基颜色再度由红变黄则认为“初代培养阳性”
2.鉴定
1）生化反应：葡萄糖发酵试验、水解精氨酸试验及尿素分解试验阳性。
2）代谢抑制试验。
3）PCR：扩增特异性DNA。
4）抗体检测：HIV感染者中用ELISA法检测出大量本菌抗体，其中无症状者的阳性率为20%，艾滋病患者为40%。
【例题】支原体进行分离培养时，应采取
A.需氧培养
B.厌氧培养
C.兼性厌氧培养
D.微需氧培养
E.兼性厌氧或专性厌氧培养
[答疑编号502389240101]
  
【正确答案】E

 

　　本章小结：
一、概述
二、肺炎支原体
三、解脲脲原体