解放军文职招聘考试薄层层析操作要点

 薄层层析操作要点：

1）匀浆的稀稠除影响板的平滑外，也影响板涂层的厚度，进一步影响上样量。涂层薄，点样易过载；涂层厚，显色不那么明显。浆配比一般是硅胶G:水=1：2～3，硅胶G:羧甲基纤维素钠水溶液=1:2。

2）点样  尽量用小的点样管。最好只用1微升的点样管，。这样点的斑点较小，展开的色谱图分离度好，颜色分明。样品溶液的含水量越小越好，样品溶液含水量大，点样斑点扩散大。

3）展开剂  配制选择合适的量器把各组成溶剂移入分液漏斗，强烈振摇使混合液充分混匀，放置，如果分层，取用体积大的一层作为展开剂。绝对不应该把各组成溶液倒入展开缸，振摇展开缸来配制展开剂。混合不均匀和没有分液的展开剂，会造成层析的完全失败。各组成溶剂的比例准确度对不同的分析任务有不同的要求，尽量达到实验室仪器的最高精确度。

 

 

 

 

 

 

 

 

                           

 

 

 图   薄层板在不同的层析缸中展开的方式

（四）绿色植物如菠菜叶中含有叶绿素（绿）、胡萝卜素（橙）和叶黄素（黄）等多种天然色素。

叶绿素存在两种结构相似的形式即叶绿素a(C₅₅H₇₂O₅N₄Mg)和叶绿素b(C₅₅H₇₀O₆N₄Mg)，其差别仅是a中一个甲基被b中的甲酰基所取代。它们都是吡咯衍生物与金属镁的络合物，是植物进行光合作用所必需的催化剂。植物中叶绿素a的含量通常是b的3倍。尽管叶绿素分子中含有一些极性基团，但大的烃基结构使它易溶于醚、石油醚等一些非极性的溶剂。

胡萝卜素（C₄₀H₅₆）是具有长链结构的共轭多烯。它有三种异构体，即a-,β-和γ-胡萝卜素，其中β-异构体含量最多，也最重要。在生物体内，β-体受酶催化氧化即形成维生素A。目前β-胡萝卜素已可进行工业生产，可作为维生素A使用，也可作为食品工业中的色素。

叶黄素（C₄₀H₅₆O₂）是胡萝卜素的羟基衍生物，它在绿叶中的含量通常是胡萝卜素的两倍。与胡萝卜素相比，叶黄素较易溶于醇而在石油醚中，溶解度较小。

                                            

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

     

维生素A

【实验材料】植物叶片。

【仪器设备】研钵、漏斗、三角瓶、剪刀、滴管、大试管(带胶塞)、大头针、滤纸、天平、量筒、毛细管。

【药品试剂】①95％乙醇；②石英砂； ③碳酸钙粉；④推动剂：(1)按石油醚:乙醚(体积比4:1)比例配制 (2)石油醚(20ml+丙酮2ml+苯1ml)

【实验步骤】

    1．叶绿体色素的提取

 (1)取植物新鲜叶片1g，洗净，擦干，去掉中脉剪碎，放人研钵中。

 (2)研钵中加入少量石英砂及碳酸钙粉，2～3mL 100％丙酮，研磨至糊状，再加2～3mL 100％丙酮，过滤，即得色素提取液。

    2．叶绿体色素的分离

(1)点样。取前端剪成三角形的滤纸条，用毛细管取叶绿素提取液，如图点样于“色点”处，注意每次所点溶液不可过多，点样后晾干，再重复操作数次。

 (2)分离。在大试管中加入推动剂，然后将滤纸固定于胶塞的小钩上，插入试管中，使尖端浸入溶剂内(色点要高于叶面，滤纸条边缘不可碰到试管壁)，盖紧胶塞，直立于阴暗处层析。

    当推动剂前沿接近滤纸边缘时，取出滤纸，风干，观察色带的分布。四种色素在滤纸上的移动速度是胡萝卜素（橙黄色）>叶黄素（黄色）>叶绿素a(蓝绿色)>叶绿素b（黄绿色）。用铅笔标出各种色素的位置和名称。

【问题】

(1)研磨提取叶绿素时加入CaCO₃有什么作用?

(2) 叶绿素a、叶绿素b、叶黄素和胡萝卜素在滤纸上的分离速度不一样，这与它们的分子量有关吗？

 (3) 将纸层析法分离叶绿体色素的实验结果贴在实验报告纸上，分析层析结果与色素化学结构的关系。