螯合剂脱钙
乙二胺四乙酸（EDTA）是用以脱钙地螯合剂。为有机化合物，有结合某些金属的能力，能结合钙盐，15%的溶液即起脱钙作用，组织用此方法脱钙，对组织破坏性小，即放置数月亦不致引起对组织的破坏，对以后大多数的染色技术皆可得到满意结果。
经10%中性福尔马林盐固定后，将组织移到50倍用磷酸盐缓冲剂缓冲至PH值等于7的5.5％EDTA内。
不超过5毫米厚度的小块组织在此液内每4－5天换液一次，更换三次后再每天换液一次以便较准确的确定脱钙终点。脱钙“终点”可用X射线方法或用草酸盐化学方法。
完全脱钙后将组织直接移到70%酒精内常规脱水，浸蜡，石蜡或火棉胶包埋。
三、脱钙步骤
1．取材：骨组织固定于10%福尔马林24小时后再锯取厚度约0.5厘米骨片。
2．固定：再以10%福尔马林固定2天。
3．将组织置于脱钙剂中，每日更换新鲜液、直至组织软化为止。
4．流水冲洗24小时（除酸）。
5．进行常规脱水，透明，浸蜡，切片。
四、鉴定脱钙是否彻底
确定脱钙“终点”三种方法：
1. 最常用的是最简单的方法――针刺，如果很容易被刺透，而且不感到阻力时，说明组织基本上脱钙完全，否则应继续脱钙。靠组织的柔软性测验脱钙作用靠不住，而且这种插入一根针以察觉钙沉淀的方法会造成组织损伤。
2．用X射线检查：看组织内是否仍有钙质。
3．用化学实验检查：
取5ml脱钙液用2M的NaOH（氢氧化钠）调整至中性，再加5％草酸钠或草酸铵1ml，液体混浊表示有钙质。迟至5分钟仍不混浊表示脱钙液中不含有钙质。
组织中仍有钙质时，一定量的钙离子会溶于脱钙液中，游离的钙会干扰脱钙作用的完成。显然，应在每次试验时完全更换，再试验中必须经过2－3小时间隔让钙溶解。
五．酸的中和
脱钙后水洗24小时，目的是除去组织中经无机酸浸渍后过多的酸，以免影响染色。再冲洗前应将组织用一种碱处理以使之脱酸呈中性，可用5％硫酸钾或硫酸钠处理过夜。（否则会引起组织膨胀）但直接转移到稀酒精（70％）内过12－18小时换液2次，再继续脱水，经无水酒精，氯仿透明，石蜡包埋，切片，整个过程其酸已全部除去，在多数情况下不仅不膨胀且对染色反应能有所改善。因此不冲洗对染色也没大碍，只是脱水剂被酸化。
第六节 组织的冲洗
组织经过固定后，脱水之前应进行冲洗，将组织内的固定液洗干净，否则残留组织内的固定液有碍制片和染色，而有些固定液则可在组织中继续起到脆化组织的作用，以至于损坏组织，给制片工作带来不利。在冲洗时，冲洗剂的选择应依固定液的种类和性质而有所不同。
冲洗时应注意以下事项：
1. 水溶性的固定剂：需用流水冲洗。
2. 酒精溶剂的固定剂：应用同浓度的酒精浸洗。
3. 含苦味酸的固定剂：（苦味酸与甲醛混合液除外），须用70％酒精浸洗，以免水洗后固定作用消失。
4. 含有升汞固定剂：组织经固定后应在冲洗剂－水或酒精中加碘以洗去组织内汞的沉淀。
5. 含有铬酸的固定剂：组织在冲洗时最好置于暗处，以免产生沉淀或使组织硬化而影响制片。
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