解放军文职招聘考试抗酸杆菌的荧光法

 抗酸杆菌的荧光法

在组织切片中大量的抗酸杆菌易于见到，少量时则难于寻找，用荧光法则比齐一尼氏染色易于找到。

操作方法：

⑴切片置入二甲苯，(1份花生油+2份二甲苯更好)脱蜡至水。

⑵在金胺，若丹明溶液中10分钟(60℃)。

⑶自来水洗。

⑷盐酸酒精分化2分钟。

⑸自来水洗。

⑹0.5%高锰酸钾液中2分钟。

⑺自来水速洗。

⑻吸水纸吸干。

⑼急速入80%酒精洗。

⑽吸水纸吸干。

⑾纯酒精。

⑿二甲苯透明，用荧光封固剂或DPX及中性树胶封固。

结果：抗酸杆菌一明亮的黄色荧光，背景不染色。

试剂配制：

金胺O(Auramino O)       1.5g

若丹明B(Rh oolamlire B)   0.75g

甘油                 75ml

酚结晶(50℃液化)         10ml

蒸馏水               50ml

 

四、梅毒螺旋体染色法

Levediti氏组织块整体染色法

（1）切取2-4mm厚的组织块在10%福尔马林中固定24小时。

（2）流水冲洗。

（3）95%酒精24小时。

（4）蒸馏水洗至组织下沉为止。

（5）2%硝酸银溶液(暗处)每日换一次，3-4天。

（6）置于焦性没食子酸—福尔马林还原剂1-2天(焦性没食子酸4克，福尔马林5ml加水至100ml)。

（7）洗于蒸馏水。

（8）石蜡切片5微米，脱蜡、封固。

结果：螺旋体黑色，背景竭色。

 

五、铬酸P、A、S(真菌类染色)

⑴石蜡切片2-3微米，脱腊常规至水。

⑵4%铬酸氧化1小时。

⑶流水冲洗5分钟，蒸馏水洗2分钟。

⑷冷雪夫氏(Cold Sohiff)液，15-20分钟。

⑸0.5%偏重亚硫酸钠水溶液5分钟(更换2次)。

⑹水洗5分钟。

⑺蒸馏水洗，至70%酒精洗2分钟。

⑻醛复红染液30分钟。

⑼95%酒精洗(洗去多余染料)。

⑽蒸馏水洗，入淡绿染液30秒钟。

⑾蒸馏水速洗(镜下观察)。

⑿曲霉菌、念球菌属、细胞浆菌属、隐球菌属为红紫色。曲霉菌丝周边紫红色，弹力纤维紫色，背景绿色。

 

六、病毒包涵体染色法

1、Mann氏甲基蓝伊红染色法

Mann氏甲基蓝伊红染色法，是一种病毒包涵体的染色法，在HE染色切片上包涵体就能显示出来，用这一染色法则更清楚。

操作方法：

（1）切片脱蜡至水。

（2）用Mann氏染液染色8-24小时(染液要新配制)。

（3）蒸馏水洗。

（4）用碱性酒精分化(40%氢氧化钠2-3滴，无水酒精100ml)约30秒钟。

（5）两酮速脱水。

（6）二甲苯透明、封固。

结果：Negri氏小体红色。

试剂配制：

Mann氏染液。

1%甲基兰水溶液     6ml

1%伊红水溶液       6ml

蒸馏水           28ml

 

2、Nacchiavello氏染色

（1）切片脱蜡至水。

（2）以0.25%碱性品红水溶液染色30分钟。

（3）用0.5%柠檬酸分化约3秒钟。

（4）自来水洗。

（5）用1%亚甲兰作对比染色15-30分钟。

（6）水洗。

（7）脱水、透明、封固。

结果：包涵体、立克次氏体均染红色，其余组织呈蓝色。