解放军文职招聘考试免疫金银法

 免疫金银法

免疫金银法（Immurogold-sliver method,IGSM）或称免疫金银染色（Immurogold-sliver staining,IGSS）是一种新的免疫组织化学技术，近年来又不断改进，已成为最为灵敏而又经济的方法之一。免疫金银法实际上是在免疫金法的基础之上发展形成。

免疫金和免疫金银法都是利用胶体金作为标记物。胶体金系指金的水溶胶，溶胶是一种物质以大或小的微小粒子分散在另一种物质中所形成的体系，被分散的物质叫分散相，容纳分散相的物质叫分散介质。按分散相离子的大小可将分散体系分为三种，相分散分散体系（分散相粒子直径大于10nm）；胶体分散体系（分散相粒子直径在1~100 nm之   间）；低分子一离子分散体系（分散相粒子直径〈1 nm〉。胶体金属于胶体分散体系，是指金以微小的粒子分散在水中所形成的金溶胶。溶胶的颜色取决于分散相物质的颜色，对同一种物质的溶胶而言，粒子大小不同，颜色也不同。若粒子为20-40nm的金溶胶因主要吸收波长为530nm的绿光而呈深红色，60nm的金溶胶因主要吸收波长为600nm的橙黄色光而呈紫蓝色。在光镜水平应用的胶体金粒直径不能小于10nm，否则无可见的红色。

1．免疫金法是将用胶体金（直径>20 nm）标记的间接抗体或A蛋白再与特异性抗体结合，在光镜下就可见红色的反应物出现，不需进行呈色反应。但该法要求金标抗体浓度高，因此，价格昂贵，既不经济同时也不够敏感。

２．免疫金银染色（IGSS）是在免疫金染色的基础上，在对苯二酚存在的情况下，通过含银离子的显影液中的还原反应，使在抗原抗体反应部位的金粒子周围形成很多沉淀层，光镜下就可看到阳性反应部位呈清晰的棕黑色，从而显示不易被光镜定位的金粒，显示出组织中抗原的部位。这种方法不仅提高灵敏度，同时金标记抗体可以稀释10倍以上后应用，此外还可避免使用具有致癌危险的有机色素。

IGSS法的主要优点是：

（1）敏感性高。与其他的免疫组织化学技术相比，IGSS法被认为是最敏感的方法，尤其适合于只含微量抗原的组织标本。

（2）应用范围广。IGSS法不仅可以在冰冻切片，细胞涂片以及培养细胞、石蜡切片上进行光镜观察，而且还能应用于树脂包埋的切片的电镜观察，并且能准确定位抗原。

（3）定位准确。IGSS法的银颗粒沉积在搞原体反应部位，一般无扩散，定位较为准确。

（4）方法简便、安全、成本低、经济、同时标本也可以长期保存。

（5）用醋酸银代替硝酸银和乳酸银，不仅保持了原有方法的敏感性、特异性、低背景、对比度好的特点，而且整个显影过程可以在常光下进行，从而弥补了在暗室显色的不足。

　　IGSS法的主要问题是非特异性背景，由于其非特异性背影染色影响了IGSS法在常规免疫组织化学鉴别诊断上的应用。但若能较好地控制染色的各关键环节，如特异性抗体的纯度，特异性；切片的消化以及显影液的配制和显影时间的控制等，能较好地解决这一问题。