解放军文职招聘考试免疫金银法步骤

 免疫金银法

　　1. 免疫金法（IGS）

　（1）切片常规脱蜡入水。

　（2）0.05M TBS PH7.4 洗10分钟。

　（3）1％卵蛋白作用切片15分钟。

　（4）滴加特异性一抗，室温2小时后4℃过夜。

　（5）0.5M TBS PH7.4洗3次。

　（6）0.02M TBS PH7.4(内含0.1％牛血清白蛋白)5分钟.

　（7）1％ 孵蛋白作用切片15分钟。

　（8）胶体金标记SPA（萄萄球菌A蛋白，详见亲和免疫细胞化学技术一章）室温孵育1~2小时。

　（9）0.02M TBS PH7.4洗3次。

　（10）双蒸水洗2次。

　（11）1％戌二醛10分钟。

　（12）双蒸水洗3次。

　（13）复染、封片、观察。

　 结果：胶体金结合部位呈鲜樱红色。

　　2．免疫金银法

　（1）切片常规脱蜡入水。

　（2）经含汞固定液固定的组织切片需经0.5％碘酒精脱汞,然后入0.5％硫代硫酸纳水溶液脱碘,再用流水冲洗10分钟,蒸馏水洗后入0.05M TBS PH7.4液冲洗.

　（3）抗原性较弱的组织切片，需经0.1％胰蛋白酶液消化，37℃ 30分钟，抗原性较强的组织可免去此步骤。

　（4）正常羊血清（1：5或1：10）作用10分钟，吸去，不洗涤。

　（5）滴加适当稀释的特异性抗体37℃ 30—60分钟或4℃过夜，室温复温2小时。

　（6）0.05M TBS PH7.4 液洗3次。

　（7）0.02M TBS PH7.2 液洗3次。

　（8）正常羊血清（1：5）10分钟，吸去，不洗涤。

　（9）滴加适当稀释的金标记抗体（如金标记羊抗兔IgG抗体，此时特异性抗体为兔源性）室温下1小时后4℃过夜。

　（10）0.02M TBS PH8.2液洗3次。

（11）0.05M TBS PH7.2 液洗3次。

（12）蒸馏水洗2次，双蒸水洗2次。

（13）入银显影液中3—5分钟或阿拉伯胶银液中20—40分钟，反应过程需避光。

（14）蒸馏水洗。

（15）自来水冲洗，苏木素淡复染。

（16）脱水、透明、封片、观察。

结果：特异性抗体结合部位呈灰黑色颗粒，背景呈清灰色，核呈淡蓝色。

3．注意事项

（1）染色过程中若用标记葡萄球A蛋白代替金标记间接抗体，需用1%卵蛋白处理切片。0.02M TBS均为 PH7.4。若用金标记间接抗体，则用正常羊血清处理切片，0.02MTBS应为PH8.2，要注意PH值变化时的良好过渡，不可直接由蒸馏水入PH8.2的TBS，应经PH7.4过渡。

（2）对不经含汞液固定的组织，若也经碘液的处理，有作者认为染色结果更为满意。

（3）切片入银显影液应避光，最好是在暗室内用红色安全灯监测染色反应强度。显影液用重蒸水配制反应速度很快，用阿拉伯胶配制则反应速度较慢，容易掌握。