解放军文职招聘考试葡萄球菌A蛋白免疫染色

 葡萄球菌A蛋白免疫染色

葡萄球菌A蛋白（staaphylococal protein A,SPA）是一种从金黄色葡萄球菌壁上分离的蛋白质。早在1940年，Verwey发现在某些金黄色葡萄球菌中，含有一种物质，在双向扩散实验中能与正常人血清形成沉淀。Jensen（1952）也发现了类似现象，并将其命名为A抗原。其后分离并证明了这种物质是一种蛋白质，为了与A多糖相区别，Crov（1960）将其命名为葡萄球菌A蛋白，简称SPA或蛋白A。由于SPA的一些免疫特性，引起了很多免疫学家的兴趣，并迅速发展成为免疫学上一种极为有用的工具。

SPA存在于大多数（90%）金黄色葡萄球菌中，而不存在于表皮葡萄球菌中，SPA为蛋白质成分，仅含少量或不含碳水化合物，其分子是一个单链多肽，由亮、颉、脯、丙、苏、甘、丝、谷、赖和门冬氨酸等10种氨基酸组成，整个分子不含胱氨酸合半胱氨酸，故部含二硫键。分子量因提取方法不同而异，用脱氧核糖核酸消化细胞壁后超速离心或用加热抽提法，所测分子量为12，000—15，000。用沉淀平衡分析和在6M鸟嘌呤盐酸盐重凝胶过滤，测出分子为42，000。SPA的粘度高于球蛋白，等电电为PH5.1，其天然结构十分文，即使用尿素、硫氰酸盐和酸等处理也不影响其活性。

SPA的单链多肽分子上，含3个高度相似的Fc段结合量区，每区由50个以上氨基酸组成。能与任何多种哺乳动物血清IgG分子中的Fc段结合，能起反应的哺乳动物包括豚鼠、小鼠（纯种）、狗、猪、猴和经免疫的家兔。一般而言，SPA只与人的IgG1,、IgG2和IgG4结合，结合部位经证实为CH2和CH3交界处。人血清中少数IgA和IgM也可与SPA反应。

SPA与IgG结合的部位是Fc段而不是Fab段，这样就不会影响抗体的活性。同时，SPA的结合力是双价的，每个SPA分子可以同时结合两个IgG分子，也可一方面与IgG相结合，一方面与标记物如荧光素、过氧化物酶、胶体金和铁蛋白等相结合。而且结合后并不影响上述物质的活性。SPA的这一特性，使其成为抗体和标记物之间的纽带，充当了亲和细胞化学与免疫细胞化学相结合的又一重要角色。

SPA在免疫组织化学重的主要作用有：

1.    标记SPA定位组织内的IgG 由于SPA能与IgG Fc段结合，因此就成为天然的抗IgG。用荧光素或酶标记的SPA可代替荧光素或酶标记的IgG抗血清，直接检测定位组织的内IgG和免疫物。

2.    标记SPA替代第二抗体   利用SPA与多种IgG分子Fc段的高度亲和结合的能力，可用标记的SPA替代的二抗体。由于器具由于多种动物抗血清反应的能力，则不需因不同种属动物而制备相应的第二抗体（即桥抗体）。同时由于SPA 与Fc段的高度亲和力，可高度稀释SPA，减少非特异性背景着色。

3.    作为桥抗体用于PAP法 SPA作为桥抗体的最大优点是不受种属特异性的限制，SPA不仅能与多种动物的第一抗体反应，也能与不同的PAP复合物反应，这样，当特异性一抗为鼠源性，利用SPA的特点，可连接上兔源性的PAP复合物，而不必只能连接鼠源性PAP复合物，是应用的范围明显拓宽了。此外，由于SPA与Fc段的结合是亲和反应，而不是抗原抗体的免疫反应，因而反应的速度极为迅速，大大减少了实验时间，降低了实验的难度。

4.    用于双标记技术 SPA可与其他免疫组织化学技术相结合而用于双标记技术，从而同时检测组织中的两种抗原。

5.    用于免疫电镜 应用SPA与胶体金和铁蛋白相结合，可在电镜水平检查抗原抗体反应的定位。