解放军文职招聘考试洗涤,脱水,透明,浸蜡 和包埋,切片

 第一节 组织洗涤

一,洗涤的目的

组织在固定后一定要把渗透到里面的固定液洗去,然后再进行下一步过程.为防止组织中留有较多的固定液而影响脱水剂,甚至可在组织中发生沉淀物或结晶而影响观察,特别是对陈旧性标本更应注意流水冲洗,尽可能减少组织中的酸性程度和甲醛色素.对混合性固定液,更应及时洗涤,有利于脱水直至切片和染色.

二,洗涤的方法

1.固定剂以水配制者 用流水冲洗,可使组织中的固定液随时溢出和随时洗去.常用的固定剂是甲醛液(10 %甲醛水液),尸检组织,,大动物组织冲洗时间为24h左右,,小动物组织冲洗时间为2--10h左右.

2. 固定剂含乙醇者 乙醇或乙醇混合液固定液者,一般不要求冲洗,如需冲洗必需采用与固定剂中的乙醇浓度相近的乙醇冲洗,不可用水冲洗,也不应用浓度相差很大的乙醇冲洗,溶液以除去之.

三,特殊固定液洗涤法

1.重铬酸钾 用重铬酸钾固定的组织可用流水冲洗12--24h,或用亚硫酸,或用1 %含水氯溶液进行洗涤.

2.苦味酸 含苦味酸固定的组织,可用50 %或70 %乙醇浸洗.

3.氯化汞 用氯化汞固定的组织内常有一种沉淀物生成,呈棱形或不规则或略圆的块状物,棱形物被认为氯化亚汞,不规则物可能是金属汞,此种结晶必需洗去,否则会使组织发脆,或染色不良.

第二节

组织脱水

一,脱水的目的和原则

组织经固定和水洗后,会有大量水分,而水与苯根本不相融合,所以组织在透明前必须经过脱水这一环节.就是说用某些溶剂逐步将组织块吸收的水分置换出来,以利于透明剂和石蜡或火绵胶的渗入,这一过程叫脱水.

1.尸检及活检 有条件时,将组织分别进行脱水,如脑,胰腺,肌肉,胸腺或淋巴结,肝,脾等组织.因为脱水时间差异性较大,最好是单独处理.

2.动物组织 应区分动物大,小,如狗组织接近新生儿组织,大白鼠和小白鼠也有差异,前者需时稍长,后者则较短.

3.脱水时间与脱水剂的关系 脱水剂的 新旧(纯度)影响脱水时间,必须灵活掌握.

4.穿刺组织 如肾穿刺,径胃镜取得组织等,因组织块很小,常规用擦镜纸包裹,防止丢失.

二,脱水剂的种类和效果

1.非石蜡溶剂的脱水剂 如乙醇和丙酮等,其组织在脱水后必须再经二甲苯透明才能浸蜡.

2.脱水兼石蜡溶剂的脱水剂 如正丁醇等组织在脱水后即可直接浸蜡,不比经过中间溶剂如二甲苯之类的试剂.

脱水种类可根据须要选择,目前在病理诊断和实验性动物研究中,较多地采用乙醇脱水,二甲苯透明和石蜡浸透组织.

脱水方法甚多,最重要的是不应骤然进行,不能操之过急,否则可引起组织强烈收缩,或使组织发生变形,而得不到满意切片.

三,常用脱水剂的使用方法

1,乙醇(Alcohol 酒精)

沸点78.4℃,为最常用的脱水剂.脱水能力强,并能使组织硬化,能较好地与二甲苯透明剂相溶合.

其缺点是易使组织收缩,变脆.导致这些缺点是因为组织在高浓度乙醇(无水乙醇)中停留时间较长,或者加温脱水的温度过高.在日常中一般脱水从70%乙醇(人体组织从75%)开始,由低向高的梯度脱水.

一般的脱水顺序是:75% ,95%① ,95%② ,无水乙醇① ,无水乙醇②.只有脱水充分才能在透明剂中透明.

2,丙酮(Acetone)

沸点为56℃.脱水作用比乙醇强,但是对组织切的收缩较大,而价格较高,故一般少用于组织的脱水,主要用于快速脱水或固定兼脱水.脱水时间1—3h.

3,正丁醇(N-Butyl-alcohol)

为无色液体,沸点100—118℃,微溶于水,在100ml水中能溶8.3g,故脱水能力较弱,但能与水,乙醇及石腊混合,故这种脱水的组织块,可直接浸蜡包埋.

这种脱水剂兼透明剂的最大优点是很少引起组织块的收缩及变脆.

第三节 组织透明

一,透明的目的

在制片过程中有两次透明,第一次是脱水以后组织块的透明,第二次透明是染色以后切片的透明.

组织块透明的目的是便于透蜡包埋,切片透明的月的就是有利光线的透过,便于显微镜下的观察.

组织块在浸蜡前,必须通过透明以便使石蜡浸入组织内,起充分支持硬化组织块的作用,以便完整切片.

通常根据透明时间与肉眼观察相结合判断透明程度.

二,常用透明剂的种类和使用方法

最常用透明剂的种类较多,但使用最多的是二甲苯.

1,二甲苯

易挥发,无色透明液体,长期接触对呼吸粘膜有刺激作用.透明能力强,易使组织收缩,变脆,故组织块在二甲苯中宜久留,特别对小动物组织材料必须严格控制好.

2,甲苯

性质虽同二早苯,但透明较慢,时间比二甲苯长一倍多,也易变脆.有时用以代替二甲苯.

3,苯

苯的用途与二甲苯相似,对组织有较小收缩,是较好的透明剂.但也易挥发,易燃.吸入苯能引起中毒,可以较小使用.

4,氯仿

即三氯甲烷.其透明能力比二甲苯及苯差,透明时间长达24h.不易使组织变脆,能溶于醇,醚,苯等,微溶于水,极易挥发.多用于大块组织的透明.

5,香柏油

对组织收缩及硬化程度比任何透明剂小,但透明时间长,小块组织至少12h以上,缺点它不能溶解石腊,透明以后还需二甲苯补充透明.

6,松节油,汽油

可作脱水,又可透明,但需用优质(无杂质)的工业汽油也不行,在条件困难时可试用.

第四节,组织浸蜡(透蜡)

浸蜡的目的和方法

组织经过脱水,透明后要用石蜡,火棉胶,碳蜡等支持剂透入内部,使其变硬并将组织包埋进去以利于切片和观察,这个过程称为"透入(浸蜡)"或"包埋".

以石蜡切片的透入即(浸蜡)为例,其目的就是除去组织中"透明剂(如二甲苯等)而代之以石腊,并渗入组织内部,把软组织变为适当硬度的蜡块,以便切成薄片.

浸蜡的方法是将组织经过二甲苯透明以后,并立即投入到液体石蜡中去.在浸蜡时组织必须经过数次纯石蜡(石蜡Ⅰ,Ⅱ,Ⅲ),这样可以使石蜡中剩余的透明剂完全除尽,以免影响切片质量.

浸蜡剂的种类

1,石蜡 石蜡有高熔点和低熔点之分,一般普遍应用熔点为56℃以上的石蜡.低熔点在54℃以下,用于酶的显示和保存抗原活性.

石蜡分软蜡(52℃—54℃),硬蜡(56℃—58℃),蜂蜡60℃.

一般气温用硬蜡,气温低时用软蜡.

2,火棉胶 目前使用火棉胶透入组织较少,用于染色前的覆盖液较多.

3,碳蜡

4,明胶

第五节 组织包埋

石蜡是动物植物,人体组织制片技术中极重要且应用最广的包埋剂.包埋蜡须在温箱内经多次熔化沉淀后的干净蜡,包埋较为理想,其包埋蜡熔点为56℃—58℃.

石蜡包埋的注意点:

(1)动作要迅速:特别是冬天,在有多块组织要包埋时,蜡很快会凝固,就包埋不成.

(2)切而向下埋:组织包埋要平整或按要求包埋.

(3)包埋的镊子必须加温,镊子温度又不能太高,否则会烧坏组织.

(4)包埋后待蜡块冷却后再放入冷水中,不能太快,否则变形有气泡.

(5)包埋时组织不能重叠挤压,否则切片不全会影响诊断.

(6)包埋用的蜡一般为工业蜡,气候炎热可用熔点高石蜡(60℃)