2018年解放军文职招聘考试——医学检验技术15

血液标本采集和血涂片制备

1．血液标本采集和抗凝剂  血液在循环系统中不断地流动，与全身各系统的组织器官均有密切的联系，参与机体的功能活动，维持正常的新陈代谢和内外环境的平衡。在病理情况下血液中各成分质和量的改变不仅能反映造血系统的疾患，而且能直接或间接地提示全身或局部组织器官的病变。很多因素会影响到血液标本检测，如患者的活动情况和精神状态、药物、年龄、性别、种族、标本采集的时间以及是否吸烟等都会明显影响检测结果。此外，血液标本的分析应密切结合临床，例如，患者有严重腹泻或呕吐时，红细胞计数可因脱水而增高。

（1）采血方法：血标本的正确采集是获得准确、可靠的实验结果的关键。血液标本的采集分为皮肤采血法、静脉采血法和动脉采血法，所有的采血技术均要求保持血液标本的完整性。不同的采血法无论细胞成分或化学组成，多存在不同程度的差异，因此在判断和比较结果时必须予以考虑。

1）静脉采血法：当所需血量较多或采用全自动血液分析仪测定时，通常使用静脉采血法。位于体表的浅静脉几乎均可作为采血部位，通常采用肘部静脉；如肘部静脉不明显时，可改用手背静脉或内踝静脉，必要时也可从股静脉采血。

2）皮肤采血法：此法所采之血实质是微动脉、微静脉和毛细血管的混合血，也含有细胞间质和细胞内液。主要用于各种微量检查或一般常规检查，多选择手指为采血部位。世界卫生组织（WHO）推荐取左手无名指指端内侧血液做血液一般检验。婴幼儿手指太小可用脚拇趾或足跟采血。严重烧伤患者，应选择皮肤完整处采血。为避免交叉感染，应严格实行一人一针制，有利于采血的质量控制。皮肤采血的主要缺点是易于溶血、凝血和可能混入组织液，检查结果重复性差。

3）真空采血法：又称为负压采血法。各种真空定量贮存抗凝试管，根据需要标有不同的色码备用，适于不同的检验项目。该法采用封闭式采血，血样无需容器之间的转移，减少了溶血现象,能有效保护血液有形成分，保证待验血标本原始性状的完整性，使检验结果更接近真实,为临床诊断提供可靠依据。但真空采血管价格较高，有待进一步降低成本。

（2）抗凝剂选择：使用全血和血浆检查，通常采集静脉血，需要使用抗凝剂。检查的项目不同，所使用的抗凝剂也不同。实验室常用的抗凝剂和使用方法如下。

1）乙二胺四乙酸（EDTA ）盐：常用其钠盐或钾盐，能与血液中钙离子结合成螯合物，而使Ca2+失去凝血作用，从而阻止血液凝固。EDTA盐对血细胞形态和血小板计数影响很小，适用于多项血液学检查。但EDTA影响血小板聚集，不适合于作凝血象检查和血小板功能试验。

2）草酸盐：常用的有草酸钠、草酸钾和草酸铵，它们溶解后解离的草酸根与标本中的钙离子形成草酸钙沉淀，使Ca2+失去凝血功能。草酸钠通常用0.1mol/L浓度，与血液按1：9比例使用，过去主要用于凝血象检查。但草酸盐对凝血V因子保护功能差，影响凝血酶原时间测定效果；草酸盐与钙结合形成的沉淀物，影响自动凝血仪的使用。因此，凝血象检查宜选用枸橼酸钠为抗凝剂。

3）肝素：肝素是生理性抗凝剂，广泛存在于肺、肝、脾等几乎所有组织和血管周围肥大细胞和嗜碱性粒细胞的颗粒中。其抗凝机制较为复杂，主要是加强抗凝血酶Ⅲ灭活丝氨酸蛋白酶的作用，从而阻止凝血酶的形成，并有阻止血小板聚集等多种抗凝作用。肝素具有抗凝力强、不影响血细胞体积、不易溶血等优点。除有些因素会干扰凝血机制检查项目外，绝大多数的检查都可用肝素作为抗凝剂，它是红细胞透渗脆性试验理想的抗凝剂。尽管肝素可以保持红细胞的自然形态，但由于其常可引起白细胞聚集，并使血涂片在罗氏染色时产生蓝色背景，因此肝素抗凝血不适合血液学一般检查。

4）枸橼酸盐：主要为枸橼酸钠，凝血试验时枸橼酸盐能与血液中的钙离子结合形成螯合物，从而阻止血液凝固。枸橼酸钠与血液的比例为1∶9。枸橼酸盐在血中的溶解度低，抗凝力不如前几种抗凝剂。多用于临床血液学检查，一般用于红细胞沉降率和凝血功能测定。因其毒性小，也是输血保养液的成分之一。

2．血液涂片制备和细胞染色  血液涂片和染色的好坏直接关系到检验的结果，必须以认真负责的态度注意操作过程中的每一个环节。

（1）血液涂片制备：血涂片制备是血液学检查重要的基本技术之一。对一张良好的血涂片的要求是：厚薄要适宜，头体尾要明显，细胞分布要均匀，血膜边缘要整齐，并留有一定的空隙。血涂片太薄，50%的白细胞集中于边缘或尾部，血涂片过厚、细胞重叠缩小，均不利于白细胞分类计数。

（2）血液细胞染色

1）瑞氏染色法：为了观察细胞内部结构，识别各种细胞及其异常变化，血涂片必须进行染色。瑞氏染色法是血细胞分析最经典和最常用的染色法。

瑞氏染料：是由酸性染料伊红和碱性染料亚甲蓝组成的复合染料。

染色原理：是染料透入被染物并存留其内部的一种过程，此过程既有物理的吸附作用，又有化学的亲和作用，各种细胞成分化学性质不同，对各种染料的亲和力也不一样。因此，染色后同一血片上各种细胞可以染上各自特征性的颜色。

pH值的影响：细胞各种成分均属蛋白质，由于蛋白质系两性电解质，所带电荷随溶液pH而定，在偏酸性环境中下正电荷增多，易与伊红结合，染色偏红；在偏碱性环境中负电荷增多，易与美蓝或天青结合，染色偏蓝。

2）姬姆萨染色法：姬姆萨染液由天青、伊红组成。姬姆萨染色原理和结果与瑞氏染色基本相同，但对细胞核和寄生虫着色较好，结构显示更清晰，而胞质和中性颗粒则染色较差。