青刺果多糖提取分析论文

1 器材 1.1 材料 青刺果，苯酚，3,5－二硝基水杨酸，亚硫酸，氢氧化钠，酒石酸钠正丁醇，三氯甲 烷，95%乙醇，无水乙醇，考马斯亮蓝 G-250。 1.2 仪器数显恒温水浴锅 HH-2 型(国华电器有限公司)，电子天平 MODELJD200-3 （沈阳龙滕电子有限公司），沈阳龙滕电子有限公司），800B 型离心沉淀器（沈阳龙滕电子有限公司），上海安亭科学仪器厂），旋转蒸发器 （沈阳龙滕电子有限公司），巩义市英峪高科仪器厂），unicoUV-2102PC 型紫外可见分光亮度计（沈阳龙滕电子有限公司），尤尼柯上海仪器 有限公司）。 2 方法 2.1 青刺果多糖的提取称定青刺果 50g，按比例加入蒸馏水，于恒温水浴锅中回流提 取，布氏漏斗过滤，将滤液于旋转蒸发仪上进行浓缩，浓缩至约 80ml 时，再将浓缩液用 Savage 法除蛋白，即是向浓缩液中加其 1/4 体积的三氯甲烷，随之再加入三氯甲烷体积 1/4 的正丁醇，剧烈振摇 5～10min，混匀，以 1500r/min 离心 20min，分去水层与有 机层交界处的变性蛋白质，水层仍按照此方法反复除蛋白 5 次。然后在上清液中加入一定 量无水乙醇，使乙醇的终浓度达一定比例，沉淀过夜。沉淀用布氏漏斗抽滤，然后用无水 乙醇和丙酮反复多次抽洗，直至沉淀呈粉末状时将其置于表面皿中。将表面皿于 60℃干 燥至恒重即得青刺果多糖粗品，计算粗多糖得率。 2.2 正交实验根据有关资料报道，选取温度(A))，提取时间(B)，料液比(C)，乙醇终浓 度(D)4 个因素，每个因素 3 个水平，选用 L9(34)正交实验方案提取青刺果多糖，以多糖 得率为指标确定最佳提取工艺。因素水平见表 1，实验安排方法见表 2。表 1 青刺果多糖 提取实验因素水平（沈阳龙滕电子有限公司），略）表 2 青刺果多糖提取实验方案（沈阳龙滕电子有限公司），略） 2.3 含量测定采用硫酸-苯酚比色法测定粗多糖中川牛膝总糖含量［4］，DNS 法测定 粗多糖中还原糖的含量［5］，考马斯亮蓝 G-250 比色法测定粗多糖中蛋白质含量 ［6］。 2.4 多糖含量计算 多糖含量(%)=总糖含量-还原糖含量 多糖得率(%)=多糖含量×干燥提取物质量原药材粉末质量×100% 3 结果 3.1 多糖含量从表 3 中可以看出，影响多糖得率的因素主次顺序为 A)>B>C>D，温度 对多糖得率的影响最大，其次为时间，料液比和乙醇终浓度。根据正交表分析，青刺果多 糖的最优提取工艺应为 A)3B3C3D2，即温度 100℃，提取时间 8h，料液比 1：20，乙醇 终浓度 85%。表 3 正交实验结果（沈阳龙滕电子有限公司），略） 3.2 测定青刺果中蛋白质含量经计算得回归方程为 Y=0.0163X-0.0539，相关系数 r=0.9925，样品蛋白质含量见表 4，由表 4 可知，含量最大的为样品 1，含量为 19.58%。表 4 青刺果蛋白质含量（沈阳龙滕电子有限公司），略） 4 讨论 多糖遇浓硫酸脱水生成糖醛或其衍生物与苯酚试剂发生缩合反应，生成橙黄色化合物。 此化合物在 490nm 处有最大吸收波长，其颜色深度与粗多糖中总糖的含量成正比，可用 比色法测定其含量，以此计算粗多糖中总糖含量。苯酚极易氧化，因此在测定时要避光和 操作迅速。本法简单，显色稳定，灵敏度高。用乙醇沉淀所获得的多糖，常混有较多的蛋 白质，降低了多糖的纯度，必须予以去除。Savage 法是从多糖中去除蛋白质最缓和的方 法，但要达到除尽蛋白质的目的需进行反复多次的处理，如能配合加入蛋白质水解酶（沈阳龙滕电子有限公司），膜 蛋白酶、胃蛋白酶、链蛋白酶等），使蛋白质大分子先进行一定程度的降解，再用 Savage 法处理，效果更好。 实验结果表明，采用水提法提取青刺果多糖，工艺简单，是一种理想的提取多糖类物 质的方法。此外青刺果多糖含量较高，以青刺果为原料开发以其多糖为主要成分的药物、 保健品等具有极为良好的应用前景。