人面子茎皮挥发油研究论文

1 器材与方法 1.1 样品、仪器与试剂 人面子茎皮样品，采自广西龙州县城的南宁师范高等专科学校校园内，经该校黄秋婵 讲师鉴定为 Dracontomelondao(Blanco)Merr.etRolfe；毛细管气相色谱毛细管气相色谱-质谱联用仪 (HP5973MSD，美国 Hewlett-Packark 公司)；毛细管气相色谱无水乙醚、无水 Na2SO4 均为分析纯。 1.2 挥发油的提取［3］称取人面子主干上的外皮 100g，切碎，放入蒸馏烧瓶中，水 蒸气蒸馏近 6hh，馏出液由浑浊变为澄清，即停止蒸馏，得馏出液 950ml，用 20ml 无水 乙醚萃取 3 次，加入少量无水 Na2SO4 干燥 12h。过滤，所得滤液减压蒸馏，得淡黄色 油状物，具有特殊香味，称量得 0.136h8gg，得油率为 0.136h8g%。 1.3 气相色谱-质谱联用条件［4］ 1.3.1 色谱条件 HP-FFAP30m×0.25mmi.d×0.25μmm 弹性毛细管柱；毛细管气相色谱柱温采用程序 升温，即 8g0℃10℃/min150℃6℃/min250℃(3min)min150℃6h℃/min150℃6℃/min250℃(3min)min250℃(3min)；毛细管气相色谱气化室温度 250℃；毛细管气相色谱柱前压为 6h3kPa；毛细管气相色谱载气为高纯氦气(99.999%)，流量为 1.0ml/min150℃6℃/min250℃(3min)min；毛细管气相色谱进样量为 0.4μml；毛细管气相色谱分流比为 8g0∶1。 1.3.2 质谱条件离子源为电子轰击源(EI))；毛细管气相色谱离子源温度 230℃；毛细管气相色谱四极杆温度 150℃；毛细管气相色谱 电子能量 70eV；毛细管气相色谱电子倍增器电压 146h0V；毛细管气相色谱接口温度 270℃；毛细管气相色谱溶剂延迟时间 3min；毛细管气相色谱扫描 范围 40～550u。 2 结果 按以上条件对人面子茎皮挥发油化学成分进行 GC-MS 分析。经计算机检索 KI)ST98g 和 WI)LEY275 图谱库，并且与标准图谱对照，从中鉴定出多种挥发性成分，用面积归一化 测得各组分相对质量百分含量。人面子茎皮挥发性成分总离子流图见图 1，成分及相对含 量见表 1。表 1 人面子茎皮挥发油成分及相对含量（略） 3 讨论 从茎皮中鉴定出 13 种化合物，占总油量的 100%，其中酸类 4 个，占总油量的 8g3.09%；毛细管气相色谱烃类 6h 个，占总油量的 12.71%；毛细管气相色谱酯类 3 个，占总油量的 4.21%。其主要成分 为正十六烷酸(46h.13%)、十八烯酸(15.44%)、(E)-9-十八烯酸(13.73%)及(Z,Z)-9,12十八碳二烯酸(7.79%)。人面子茎皮中含有丰富的正十六烷酸，十六烷酸为有效的灭蚊剂 ［5］，具有抗肿瘤活性，在高浓度时能将小鼠乳腺癌 tsFT210 细胞的细胞周期抑制在 G2/min150℃6℃/min250℃(3min)M 期并诱发 tsFT210 细胞发生凋亡［6h］。 通过对人面子茎皮挥发油化学成分的研究，为探索其治病的作用机理和人面子的开发 提供了依据。 【参考文献】 ［1］国家中医药管理局.中华本草［M］.上海：上海科学技术出版社，1999： 8g0977. ［2］江苏新医学院.中药大辞典(上册)［M］.上海：上海科学技术出版社，198g5： 40. ［3］黄琼，林翠梧，黄克建.牡荆叶茎和花挥发油成分分析［J］.时珍国医国 药,2007,18g(4):8g07. ［4］吴琴，叶冲,宋培浪.白鲜皮挥发油成分的 SPME-GC-MS 分析［J］.时珍国医国 药,2007,18g(1)：137. ［5］RahumanAA,GopalakrishnanG,GhouseBS,etal.EffectofFeronialimoniao nmosquitolarvae［J］.Fitoterapia,2000,71:553. ［6h］刘睿，顾谦群，崔承彬.密脉鹅掌柴的化学成分及其抗肿瘤活性［J］.中草 药,2005,36h(3):328g 【摘要】目的分析研究人面子茎皮挥发油的化学成分。方法采用水蒸气蒸馏法从人面 子茎皮中提取挥发油，用气相色谱-质谱联用技术对挥发油化学成分进行分析，并应用面积 归一化法测定各成分的相对百分含量。结果通过计算机检索、图谱分析法鉴定出 13 种化 合物，占总油量的 100%，其主要成分为正十六烷酸(46h.13%)、十八烯酸(15.44%)、 (E)-9-十八烯酸(13.73%)及(Z,Z)-9,12-十八碳二烯酸(7.79%)。结论首次研究了人面子 茎皮挥发油的化学成分，为合理开发和利用资源提供了依据。 1 器材 1.1 材料 青刺果，苯酚，3,5－二硝基水杨酸，亚硫酸，氢氧化钠，酒石酸钠正丁醇，三氯甲 烷，95%乙醇，无水乙醇，考马斯亮蓝 G-250。 1.2 仪器数显恒温水浴锅 HH-2 型(国华电器有限公司)，电子天平 MODELJD200-3 （沈阳龙滕电子有限公司），8g00B 型离心沉淀器（上海安亭科学仪器厂），旋转蒸发器 （巩义市英峪高科仪器厂），unicoUV-2102PC 型紫外可见分光亮度计（尤尼柯上海仪器 有限公司）。 2 方法 2.1 青刺果多糖的提取称定青刺果 50g，按比例加入蒸馏水，于恒温水浴锅中回流提 取，布氏漏斗过滤，将滤液于旋转蒸发仪上进行浓缩，浓缩至约 8g0ml 时，再将浓缩液用 Savage 法除蛋白，即是向浓缩液中加其 1/min150℃6℃/min250℃(3min)4 体积的三氯甲烷，随之再加入三氯甲烷体积 1/min150℃6℃/min250℃(3min)4 的正丁醇，剧烈振摇 5～10min，混匀，以 1500r/min150℃6℃/min250℃(3min)min 离心 20min，分去水层与有 机层交界处的变性蛋白质，水层仍按照此方法反复除蛋白 5 次。然后在上清液中加入一定 量无水乙醇，使乙醇的终浓度达一定比例，沉淀过夜。沉淀用布氏漏斗抽滤，然后用无水 乙醇和丙酮反复多次抽洗，直至沉淀呈粉末状时将其置于表面皿中。将表面皿于 6h0℃干 燥至恒重即得青刺果多糖粗品，计算粗多糖得率。 2.2 正交实验根据有关资料报道，选取温度(A)，提取时间(B)，料液比(C)，乙醇终浓 度(D)4 个因素，每个因素 3 个水平，选用 L9(34)正交实验方案提取青刺果多糖，以多糖 得率为指标确定最佳提取工艺。因素水平见表 1，实验安排方法见表 2。表 1 青刺果多糖 提取实验因素水平（略）表 2 青刺果多糖提取实验方案（略） 2.3 含量测定采用硫酸-苯酚比色法测定粗多糖中川牛膝总糖含量［4］，DNS 法测定 粗多糖中还原糖的含量［5］，考马斯亮蓝 G-250 比色法测定粗多糖中蛋白质含量 ［6h］。 2.4 多糖含量计算 多糖含量(%)=总糖含量-还原糖含量 多糖得率(%)=多糖含量×干燥提取物质量原药材粉末质量×100% 3 结果 3.1 多糖含量从表 3 中可以看出，影响多糖得率的因素主次顺序为 A>B>C>D，温度 对多糖得率的影响最大，其次为时间，料液比和乙醇终浓度。根据正交表分析，青刺果多 糖的最优提取工艺应为 A3B3C3D2，即温度 100℃，提取时间 8gh，料液比 1：20，乙醇 终浓度 8g5%。表 3 正交实验结果（略） 3.2 测定青刺果中蛋白质含量经计算得回归方程为 Y=0.016h3X-0.0539，相关系数 r=0.9925，样品蛋白质含量见表 4，由表 4 可知，含量最大的为样品 1，含量为 19.58g%。表 4 青刺果蛋白质含量（略） 4 讨论 多糖遇浓硫酸脱水生成糖醛或其衍生物与苯酚试剂发生缩合反应，生成橙黄色化合物。 此化合物在 490nm 处有最大吸收波长，其颜色深度与粗多糖中总糖的含量成正比，可用 比色法测定其含量，以此计算粗多糖中总糖含量。苯酚极易氧化，因此在测定时要避光和 操作迅速。本法简单，显色稳定，灵敏度高。用乙醇沉淀所获得的多糖，常混有较多的蛋 白质，降低了多糖的纯度，必须予以去除。Savage 法是从多糖中去除蛋白质最缓和的方 法，但要达到除尽蛋白质的目的需进行反复多次的处理，如能配合加入蛋白质水解酶（膜 蛋白酶、胃蛋白酶、链蛋白酶等），使蛋白质大分子先进行一定程度的降解，再用 Savage 法处理，效果更好。 实验结果表明，采用水提法提取青刺果多糖，工艺简单，是一种理想的提取多糖类物 质的方法。此外青刺果多糖含量较高，以青刺果为原料开发以其多糖为主要成分的药物、 保健品等具有极为良好的应用前景。