男宝片的健脾作用探讨论文

1 材料与仪器 1.1 药品与试剂男宝片，石河子市中医医院研制，新疆维吾尔药厂生产，每片相当于 含生药 0.41g,批号为 990421，使用时将药片研磨，加双蒸水配成每毫升含药 0.025，0.05，0.1g 或 0.035，0.07，0.14g 的混悬液，古汉养生精片，湖南古汉集团 股份有限公司产品，每片 0.4g,(97)卫药准字 Z-125 号,具补肾益脾、健脑安神等功能，批 号 990425，使用时将药片研磨，加双蒸水配成每毫升含药 0.05 或 0.07g 的混悬液，氢 化可的松，湖北制药厂出品，鄂卫药准字（1981）第 001709 号，每支 5ml/25mg，使 用时灌胃 0.2ml/只，戊巴比妥钠，上海行知化工厂出品，批号 951019，使用时用生理盐 水配成 1%的溶液，40mg/kg 腹腔注射，乙烯雌酚，上海第九制药厂产品，批号 980403，使用时用麻油稀释配成 200ng/ml 的溶液，黄体酮注射液，上海第九制药厂产 品，批号 980402，使用时用麻油稀释配成 500μg/0.1mlg/0.1ml 的溶液,实验前 4h 皮下注射 500μg/0.1mlg/只。生大黄液，称取一定重量的大黄浸泡后用温火煎煮，纱布过滤后，在 80℃浓 缩成每毫升含生药 1g 的药液；D-木糖临床诊断试剂，南京建成生物工程研究所提供，批 号 990826；D-木糖（D-Xylose）Sigma，进口分装，批号 980812，北京化学试剂公 司提供；地塞米松磷酸钠注射液，江苏省溧阳市制药厂，5mg/ml 安瓿，苏卫药准字 （1987）218212-10 号，批号 951025，；Alsever`s 液，葡萄糖 2.05g、柠檬酸钠 8.0g、氯化钠 4.2g 加双蒸水至 1000ml 溶解后，高压消毒，作为绵羊红细胞（SRBC） 保存液；都氏液，碳酸氢钠 1.0g，氰化钾 0.05g，高铁氰化钾 0.2g 加双蒸水 1000ml 溶 解，用于测定血红蛋白；绵羊红细胞（SRBC）自治区医学实验动物中心提供；免疫球蛋 白 G、M 试剂，上海长征医学科学有限公司提供；RPMI-1640 培养基，美国 GIBCO 产品； 刀豆蛋白 A（ConA），美国 Sigma 公司产品。植物血球凝集素（PHA），美国 Sigma 公司产品；牛血清，北京华美公司提供；四甲基偶氮唑（MTT），北京华美公司提供； Hank`s 液，南京建成生物工程研究所提供；酵母多糖，Sigma 公司产品，使用时用 PBS 溶液配成浓度为 10mg/ml 的混悬液；鲁米诺，Sigma 公司产品，使用时准确称取 1.77mg 加 PBS 至 4.8ml 溶解,调节 pH 值为 7.2 备用；金黄色葡萄球菌，新疆医科大学 微生物学教研室提供，菌号 26003；I125 睾酮放射免疫分析测定盒北京北方生物技术研 究所产品，（94）卫药准字 R-29 号，批号 990611。 1.2 动物昆明种，NIH 小鼠，Wistar 大鼠，均由新疆维吾尔自治区医学实验动物中心 提供，二级，合格证书：新疆医动字（94），16-001 号。 2 方法与结果［1～3］ 2.1 对小鼠小肠推进性运动的影响（墨汁法）选取小鼠 57 只，雌雄兼用，体重 (18.9+1.0)g。随机分成 5 组，即正常对照组、古汉养生精片组（0.7g/ kg，ig，qd×10d）、男宝片小剂量组（0.5g/kg，ig，qd×10d）、男宝片中剂量组 （1.0g/kg，ig，qd×10d）、男宝片大剂量组（2.0g/kg，ig，qd×10d）。给药第 10 天动物禁食 12h，用 50%碳素墨汁生理盐水溶液 0.2ml/10g 体重灌胃，20min 后脱颈椎 处死，立即剖腹，将消化管幽门至直肠末端完整地摘出，不加牵引平铺于玻璃板上，轻轻 将小肠拉成直线，测量肠管长度作为小肠总长度。以幽门至墨汁前沿的距离为“墨汁在肠内 推进距离”，用公式计算墨汁推进百分率，并注意观察各组小鼠小肠是否增大。 墨汁推进率（%）=墨汁在肠内推进距离（cm）肠管全长（cm）×100% 结果，3 个不同剂量组的男宝片能降低小肠墨汁推进率，提示该药对肠蠕动有抑制作 用。结果见表 1。表 1 男宝片对小鼠小肠运动的影响（墨汁法）（略） 2.2 对生大黄所致脾虚小鼠耐常压缺氧的影响选取小鼠 80 只，雌雄兼用，体重 （20.4±1.3）g，随机分 8 组，即正常对照组、长正常组、脾虚模型组、长脾虚模型组、 古汉养生精片组（0.7g/kg，ig，qd×10d）、男宝片小剂量组（0.7g/ kg，ig，qd×10d）、男宝片中剂量组（0.7g/kg，ig，qd×10d）、男宝片大剂量组 （0.7g/kg，ig，qd×10d）。正常组和长正常组不进行任何处理，其余组给生大黄液 （1g/只，ig×8d），第 8 天造成脾虚小鼠模型。模型建立后正常组和脾虚模型组小鼠进 行常压缺氧实验，其余 6 组继续给生大黄或和给药治疗，治疗第 9 天，末次给药后 1h 将 小鼠放入盛有 15g 钠石灰的广口瓶内（体积 200ml），用凡士林涂抹瓶口盖严，使之不 漏气，立即计时，以呼吸停止为指标，观察小鼠因缺氧而死亡的时间。 结果，3 个不同剂量的男宝片明显延长脾虚小鼠常压缺氧条件下存活时间，提示该药 有明显的增强脾虚小鼠耐缺氧能力。结果见表 2。表 2 男宝片对生大黄致脾虚小鼠耐常压 缺氧的影响（略） 2.3 对生大黄致脾虚小鼠抗疲劳能力的影响（游泳实验）选取小鼠 60 只，雌雄兼用， 体重（19.4+1.2）g，随机分 6 组，即正常对照组、脾虚模型组、古汉养生精片组、男宝 片 3 个不同剂量组。正常组不进行任何处理，其余 5 组小鼠 ig 生大黄药液 1g/只（1ml/ 只），连续给药 8d，造成脾虚模型。并于第 9 天起按下述剂量进行治疗，同时继续 ig 生 大黄药液，即古汉养生精片组（0.7g/kg，ig，qd×9d）；男宝片小剂量组（0.5g/ kg，ig，qd×9d）；男宝片中剂量组（1.0g/kg，ig，qd×9d）；男宝片大剂量组 （2.0g/kg，ig，qd×9d），治疗 9d 后小鼠各种症状消失。第 17 天末次给药 1h 后，在 （15±1）℃冷水中进行游泳实验，以下沉水底 5s 以上，未能再上浮为死亡指标，记录小 鼠游泳存活时间。 结果，3 个不同剂量的男宝片组使脾虚小鼠游泳时间明显延长。结果见表 3。表 3 男 宝片对生大黄致脾虚小鼠耐常压缺氧的影响（略） 2.4 对生大黄所致脾虚耐高温的影响选取小鼠 60 只，雌雄兼用，体重(20.7±0.9)g。 随机分 6 组，即正常对照组、脾虚模型组、古汉养生精片组、男宝片 3 个不同剂量组。正 常组不进行任何处理，其余 5 组小鼠 ig 生大黄药液 1g/只（1ml/只），连续给药 8d，造 成脾虚模型。并于第 9 天起按下述剂量进行治疗，同时继续 ig 生大黄药液，即古汉养生精 片组（0.7g/kg，ig，qd×9d）；男宝片小剂量组(0.5g/kg，ig，qd×9d)；男宝片中剂 量组（1.0g/kg，ig，qd×9d）；男宝片大剂量组（2.0g/kg，ig，qd×9d），治疗 9d 后小鼠各种症状消失。第 17 天末次给药 1h 后，将小鼠每只分别放入 45℃恒温孵育箱 1h，以每组小鼠死亡数为指标进行耐高温试验。结果进行 χ2 检验。 结果，3 个不同剂量的男宝片组可提高脾虚小鼠 45℃环境中的生存能力，尤其是大剂 量组作用明显。结果见表 4。表 4 男宝片对生大黄致脾虚小鼠耐高温能力的影响（略） 2.5 对生大黄所致脾虚耐寒能力的影响选取小鼠 90 只，雌雄兼用，体重(20±2)g。 随机分 9 组，即正常对照组、长正常对照组、脾虚模型组、长脾虚模型组、古汉养生精片 组（0.7g/kg，ig，qd×9d）、男宝片小剂量组(0.5g/kg，ig，qd×9d)、男宝片中剂量 组（1.0g/kg，ig，qd×9d）、男宝片大剂量组（2.0g/kg，ig，qd×9d）、自然恢复组 （生大黄液 1g/只，ig×8d）。正常对照组和长正常对照组不进行任何处理，其余组给生 大黄液（1g/只，ig×8d），第 8 天造成脾虚小鼠模型。模型建立后，正常组和脾虚模型 组小鼠在-5℃进行耐寒试验；其余除自然恢复组以外继续给生大黄或和给药治疗，治疗第 9 天，给药后 1h 将小鼠分别放入-5℃恒温箱 2h，以每组小鼠死亡数为指标进行耐寒实验， 结果进行 χ2 检验。 结果，3 个不同剂量的男宝片可提高寒冷环境中脾虚小鼠的生存百分率，大剂量组作 用更明显。结果见表 5。表 5 男宝片对生大黄致脾虚小鼠耐高温能力的影响（略） 2.6 对生大黄致脾虚大鼠木糖排泄率的影响选取大鼠 60 只，雌雄兼用，体重 (227±14)g。随机分 6 组，即正常对照组、脾虚模型组、古汉养生精片组（0.5g/ kg，ig，qd×9d）、男宝片小剂量组(0.35g/kg，ig，qd×9d)、男宝片中剂量组 （0.7g/kg，ig，qd×9d）、男宝片大剂量组（1.4g/kg，ig，qd×9d）。正常对照组不 进行任何处理，其余组 ig 生大黄液（1.25ml/100g，qd×8d）造成脾虚。第 9 天开始加 药治疗 9 天。末次给药后禁食 5h，ig10%木糖溶液 4.5ml/只，收集 5h 尿液，同时尾静 脉采血分离血清，按试剂盒操作要求进行实验。 结果，模型组大鼠尿木糖排泄率和血清木糖量明显低于正常组，3 个不同剂量的男宝 片组与模型组比较尿木糖排泄率和血清木糖水平明显提高。结果见表 6。表 6 男宝片对生 大黄致脾虚大鼠木糖排泄率的影响（略） 2.7 对生大黄致脾虚小鼠免疫器官重量的影响选取小鼠 72 只，雌雄兼用，体重 (19.4±1.1)g。随机分 6 组，即正常对照组，脾虚模型组、古汉养生精片组、男宝片 3 个 不同剂量组。正常对照组不进行任何处理，其余 5 组小鼠 ig 生大黄药液 1.0g/只(1.0ml/ 只)，连续给药 8d，造成脾虚模型（症状有便溏、体重减轻、低温偏低、畏寒等）。并于 第 9 天起按下述剂量进行治疗，同时继续 ig 生大黄药液：即古汉养生精片组（0.7g/ kg，ig，qd×8d）；男宝片小剂量组(0.5g/kg，ig，qd×8d)；男宝片中剂量组（1.0g/ kg，ig，qd×8d）；男宝片大剂量组（2.0g/kg，ig，qd×8d）。末次给药后 1h，摘眼 球放血处死，摘出胸腺及脾脏称重。以胸腺和脾脏重量（mg）与体重 10g 之比为胸腺指 数和脾脏指数。 结果，脾虚组与正常对照组比较，胸腺指数和脾脏指数明显降低，而男宝片 3 个不同 剂量组与模型组比较，其胸腺指数和脾脏指数明显增加，其中大剂量组基本恢复正常。结 果见表 7。表 7 男宝片对生大黄致脾虚小鼠免疫器官重量的影响（略） 2.8 对生大黄致脾虚小鼠体温变化的影响选取小鼠 72 只，雌雄兼用，体重 (19.4±1.1)g。随机分 6 组，即正常对照组、脾虚模型组、古汉养生精片组、男宝片 3 个 不同剂量组，并测定肛温作为正常体温。正常组不进行任何处理，其余 5 组小鼠 ig 生大黄 药液 1.0g/只(1.0ml/只)，连续给药 8d，造成脾虚模型（症状有便溏、体重减轻、体温偏 低、畏寒等）后测定肛温作为造模后体温。并于第 9 天起按下述剂量进行治疗，同时继续 ig 生大黄药液：即古汉养生精片组（0.50g/kg，ig，qd×8d）；男宝片小剂量组(0.35g/ kg，ig，qd×8d)；男宝片中剂量组（0.70g/kg，ig，qd×8d）；男宝片大剂量组 （1.40g/kg，ig，qd×8d），分别于给药后第 4 天和第 8 天再各测肛温 1 次。 结果，脾虚模型组与正常对照组比较小鼠体温下降，而男宝片 3 个剂量与模型组比较， 治疗第 8 天其体温明显升高。见表 8。表 8 男宝片对生大黄致脾虚小鼠体温变化的影响 （略） 2.9 对生大黄致脾虚小鼠体重变化的影响选取小鼠 72 只，雌雄兼用，体重 (19.1±1.1)g。随机分 6 组，即正常对照组、脾虚模型组、古汉养生精片组、男宝片 3 个 不同剂量组。正常组不进行任何处理，其余 5 组小鼠 ig 生大黄药液 1.0g/只(1.0ml/只)， 连续给 8 天，造成脾虚模型，并于第 9 天起按下述剂量进行治疗，同时继续 ig 生大黄药液： 即古汉养生精片组（0.7g/kg，ig，qd×8d）；男宝片小剂量组(0.5g/ kg，ig，qd×8d)；男宝片中剂量组（1.0g/kg，ig，qd×8d）；男宝片大剂量组（2.0g/ kg，ig，qd×8d）。观察造模后、治疗第 4 天和第 8 天小鼠体重变化。 结果，脾虚模型组与正常组比较小鼠体重显著下降，而男宝片 3 个剂量组与模型比较， 治疗第 8 天其体重明显增加。结果见表 9。表 9 男宝片对生大黄致脾虚小鼠体重的影响 （略） 3 讨论 男宝片经上述 4 项实验，在以生大黄造成大鼠、小鼠脾虚模型中，本片剂可使其耐常 压缺氧、低温游泳、耐高温、耐寒时间明显延长；使免疫器官重量（脾脏和胸腺）、体温 和体重均高于模型组；使脾虚大鼠尿木糖排泄率提高等均提示本片剂有健脾、纠正脾虚症 状的作用。对正常小鼠肠推进性运动有抑制作用，依据理气健脾药物多有抑制胃肠运动， 少部分兴奋胃肠运动的原则，本实验结果符合健脾理气药的作用规律。本实验为男宝片健 脾作用提供了药理学依据。