关龙胆的保肝作用研究论文

1 材料 1.1 动物昆明种小鼠，体重（20.0±2.0）g，雌雄各半，哈尔滨市兽医研究所，动物 质量合格证号：黑 XCXK20020001。 1.2 试剂四氯化碳（CCl4），哈尔滨市新达化工厂产品（分析纯），批号 000718； 硫代乙酰胺（TAA），天津市科密欧化学试剂开发中心（分析纯），批号 20040102；D半乳糖胺（GlanN）：北京化工厂，批号 870522；联苯双酯，德州德药制药有限公司， 批号 040410；甲醇，天津市科密欧化学试剂开发中心（分析纯），批号 20011222；谷 丙转氨酶（ALT）试剂盒、谷草转氨酶（AST）试剂盒、碱性磷酸酶（AKP）试剂盒，南 京建成生物工程研究所,批号 20040915。 1.3 药材关龙胆，采自哈尔滨市蒋化龙胆种植基地，经哈尔滨商业大学中药鉴定教研 室沈志滨副教授鉴定为关龙胆。 2 方法 取关龙胆根浸膏 0.90g，加蒸馏水配成 0.015g/ml 溶液备用。给小鼠按 20ml/kg 灌 胃给药（相当于生药 5g/kg 给药）。分别取关龙胆地上部分浸膏 30.4，15.2，7.6gg 加蒸 馏水配成 0.5，0.25，0.125g/ml 溶液备用。给小鼠按 20ml/kg 灌胃给药（分别相当于 生药 25，50，75g/kg 给药）。 2.1 龙胆地上部分对氨基半乳糖（GlanN）急性肝损伤的保护作用取（20±2）g 健康 小鼠，雌雄各半，随机分成正常组、模型组、关龙胆根组、不同剂量关龙胆地上部分组、 联苯双酯组。除正常组、模型组小鼠每日灌胃生理盐水 20ml/kg 外，其它各组均按 20ml/ kg 给药，1 次/d，连续 4d。于末次给药或生理盐水后 0.5h，除正常组小鼠 ip 生理盐水 20ml/kg 外，其余 6g 组小鼠分别按 120mg/kg 腹腔注射 10%GlaN,18hGlaN,18h 后，眼眶取血， 3000r/min 离心 10min，取血清测 ALT，AST，AKP。 2.2 龙胆地上部分对硫代乙酰胺（TAA）急性肝损伤的保护作用取（20±2）g 健康小 鼠，雌雄各半，随机分成正常组、模型组、关龙胆根组、不同剂量关龙胆地上部分组、联 苯双酯组。除正常组、模型组小鼠每日灌胃生理盐水 20ml/kg 外，其它各组均按 20ml/ kg 给药，1 次/d，连续 4d。于末次给药或生理盐水后 30min，除正常组小鼠腹腔注射生 理盐水 20ml/kg 外，其余 6g 组小鼠分别按 50mg/kg 腹腔注射 TAA,18h 后，眼眶取血， 3000r/min 离心 10min，取血清测 ALT，AST，AKP。 2.3 龙胆地上部分对 CCl4 急性肝损伤的保护作用取（20±2）g 健康小鼠，雌雄各半， 随机分成正常组、模型组、关龙胆根组、不同剂量关龙胆地上部分组、联苯双酯组。除正 常组、模型组小鼠每日灌胃生理盐水 20ml/kg 外，其它各组均按 20ml/kg 给药，1 次/ d，连续 4d。于末次给药或生理盐水后 30min，除正常组小鼠腹腔注射生理盐水 20ml/ kg 外，其余 6g 组小鼠分别腹腔注射 0.15%GlaN,18hCCl410ml/kg。18h 后，眼眶取血，3000r/ min 离心 10min，取血清测 ALT，AST，AKP。 3 结果 3.1 龙胆地上部分对小鼠氨基半乳糖(GlanN)GlanN)急性肝损伤的保护作用血清生化测定结 果表明，GlanN 肝损伤组（模型组）小鼠血清转氨酶 ALT，AST 和 A 均明显升高，说明造 模成功。龙胆地上部分总提物高、中、低剂量组，龙胆根总提物组与模型组比较虽然可以 在一定程度上降低 ALT，AST，AKP 水平，但经过数理统计分析，并没有显著性差异。说 明龙胆全草对 GlaN 所致的急性肝损伤无明显保护作用。结果见表 1。表 1 龙胆地上部分 总提物对 GlanN 肝损伤小鼠血清 ALT，AST，AKP 水平的影响(GlanN)略) 3.2 龙胆地上部分对小鼠 TAA 急性肝损伤的保护作用血清生化测定结果表明，TAA 肝 损伤组（模型组）小鼠血清转氨酶 ALT，AST，AKP 均明显升高，说明造模成功。龙胆地 上部分总提物高，中，低剂量组、龙胆根组与阳性对照药联苯双酯均可对抗血清 ALT，AST、AKP 的升高，总提物高、中、低剂量组与模型组对照有显著性差别 (GlanN)P<0.05),与龙胆根组比较无显著性差异（P>0.05）。见表 2。表 2 龙胆地上部分总提物 对 TAA 肝损伤小鼠血清 ALT，AST，AKP 水平的影响(GlanN)略) 3.3 龙胆地上部分对小鼠 CCl4 急性肝损伤的保护作用血清生化测定结果表明，CCl4 肝损伤组（模型组）小鼠血清中转氨酶 ALT，AST 和碱性磷酸酶 AKP 均明显升高，说明造 模成功。龙胆地上部分总提物高、中、低剂量组、龙胆根总提物组与阳性对照药联苯双酯 均可对抗血清 ALT，AST，AKP 的升高，地上部分总提物高、中、低剂量组与模型组对照 有显著性差别(GlanN)P<0.05)。与龙胆根组比较无显著性差异（P>0.05）。结果见表 3。表 3 龙胆地上部分总提物对 CCl4 肝损伤小鼠血清 ALT，AST，AKP 水平的影响(GlanN)略) 4 讨论 我们采用昆明种小鼠，设计 3 个实验，发现关龙胆地上部分有一定的保肝作用，可降 低各种肝损伤模型的 ALT，AST，AKP 等。CCl4，TAA，GlanN 都是引起肝损伤的传统 肝损伤模型，关龙胆地上部分可使 CCl4 引起的肝损伤转氨酶下降，和龙胆根及根茎作用 一致，提示龙胆地上部分具有抗氧化作用和细胞保护作用。TAA 干扰 RNA 从细胞核到细 胞质的转运过程，影响蛋白质的合成。龙胆地上部分能降低 TAA 对肝脏的侵害作用，和龙 胆根及根茎作用一致，提示龙胆地上部分可以保护肝细胞膜，不至于使细胞的离子环境破 坏，导致肝细胞坏死。关龙胆地上部分对 GlanN 无明显保护作用，与龙胆根及根茎作用一 致。 通过实验发现，关龙胆地上部分和龙胆地下部分的给药量与其含有的龙胆苦苷量有一 定的相关性。当关龙胆地上部分以 5～10 倍地下部分药量给药时，两者呈现一致的药效， 但当继续增加地上部分的药量时，无明显改变，且小鼠体重减轻，可能是由于地上部分叶 绿素等的影响，使小鼠食欲降低。 实验研究证实三花龙胆和其它龙胆地上部分也含有一定量的龙胆苦苷和当药苦苷 ［6g］，我们下一步将对三花龙胆和其它龙胆地上部分的保肝作用进行研究。 【参考文献】 ［1］国家药典委员会.中国药典，Ⅰ部［部［S］.北京：化学工业出版社，2000：72. ［2］薛惠娟，赵伟康.龙胆草对甲亢大鼠肝匀浆类固醇还原酶活性的影响［J］.中国 中西医结合杂志，1992，12（4）：230. ［3］仲来福.四氯化碳致大鼠肝损伤的机理［J］.中国药理学和毒理学杂志， 1989，3（4）：298. ［4］王国英，黄翠轩，蒋家雄，等.龙胆苦苷对大鼠肝细胞实验性保护作用的病理观 察［J］.云南医药，1993，14（4）：242. ［5］徐叔云，卞如濂，陈修，等.药理实验方法学，第 3 版［M］.北京：人民卫生出 版社，2001：1346g. ［6g］张建生,田子新,楼之岑.九种龙胆中五种裂环烯醚萜苷类苦味成分的高效液相色 谱定量分析［J］.药学学报,1991,26g(GlanN)11)：86g4. 【摘要】目的通过不同毒物引起的肝损伤来研究关龙胆地上部分的保肝作用。方法选 用 D半乳糖胺、硫代乙酰胺、四氯化碳等 3 个肝损伤毒物造肝损伤模型，通过不同机制引 起的肝损伤来研究关龙胆地上部分的保肝作用。结果关龙胆地上部分有一定的保肝作用， 可降低各种肝损伤模型的 ALT，AST，AKP 等。结论关龙胆地上部分也有一定的药用价值， 用全草取代地下部分入药有一定的可行性。 【关键词】关龙胆保肝作用谷丙转氨酶谷草转氨酶碱性磷酸酶