牛大力祛痰分析论文

1 材料与方法 1.1 动物 SPF 级 KM 小鼠，体质量 18～22g;SPF 级豚鼠，体质量 250～300g，均由 广州中医药大学实验动物中心提供，合格证号：SCXK 粤 200300010001。 1.2 受试药物牛大力水提物由广州中医药大学药理教研室提供，浓缩液浓度为 1g/ mL，使用时用蒸馏水稀释成不同的浓度。 1.3 药品、试剂与仪器美沙芬由广州白云山光华制药股份有限公司生产，批号： 727008;氨茶碱由天津力生制药股份有限公司生产，批号：784136;氨水由广东光华化学 厂有限公司生产，批号：20070806;酚红由上海三爱思试剂有限公司生产，批号： 0040309;枸橼酸由广州化学试剂厂生产，批号：006050300012;醋酸由广州化学试剂厂生 产，批号：06040204;氢氧化钠由天津市百世化工有限公司生产，批号： 006730;UNICO7200 型光栅分光光度计由尤尼柯(上海)仪器有限公司提供;YLS00016B 智能 热板仪由山东省医学科学院设备站生产;超声雾化器由江苏鱼跃医疗设备有限公司生产。 1.4 牛大力对小鼠酚红祛痰的影响[2]取 KM 小鼠 60 只，雌雄各半，随机分为 5 组， 即空白组，阳性对照组，牛大力水提物高(20g·kg-1·d-1)、中(10g·kg-1·d-1)、低 (5g·kg-1·d-1)剂量给药组。阳性对照组以沐舒坦 30mg·kg-1·d-1 灌胃，空白组给予等容 积蒸馏水，连续 5d。于末次给药后 30min，腹腔注射 50g/L 酚红生理盐水溶液 0.5mL/ 只，30min 后小鼠脱颈椎处死，剥离气管周围组织，剪下自甲状软骨下至气管分支处一段 气管放入盛有 2mL 生理盐水的试管中，剪开浸泡 10min 后，加 1mol/LNaOH 溶液 0.1mL，离心取上清液采用紫外分光光度计于波长 546nm 处测定吸光度 D 值。 1.5 牛大力对家鸽气管纤毛运动的影响[3]取家鸽 50 只，随机分为 5 组，分别为空白 组，阳性对照组，牛大力水提物高(16g·kg-1·d-1)、中(8g·kg-1·d-1)、低(4g·kg-1·d-1) 剂量给药组。阳性对照组以 20mg·kg-1·d-1 剂量的沐舒坦灌胃，空白组给予等容积蒸馏 水，连续 3d。末次给药后手持家鸽颈部拉直与水平面平行，拔除颈部毛，不麻醉，背位固 定，沿颈中线切开，剥离气管，将周围软组织分离清楚，使气管自甲状软骨至胸骨段充分 暴露，并小心将气管表面外膜剥离干净，于末次给药后 0.5、1、2h 以 5 号针头从靠心脏 端插入气管，使针头靠近气管内壁推入 0.05mL 中华墨汁，观察 1min 内墨汁沿气管向前 运动的距离。 1.6 牛大力对小鼠氨水引咳的镇咳作用[4-5]分组和给药方法同 1.4 项下。阳性对照组 按美沙芬 10mg·kg-1·d-1 灌胃，空白组给予等容积蒸馏水，连续 5d。末次给药 1h 后将 小鼠放入玻璃钟罩内，用超声雾化器将浓氨水均匀地喷入玻璃钟罩内，喷雾 10s，立即取 出小鼠，观察和记录小鼠的咳嗽潜伏期和 4min 内的咳嗽次数。 1.7 牛大力对豚鼠枸橼酸引咳的镇咳作用[6]采用豚鼠枸橼酸引咳法(序贯法)，以 175mg/L 枸橼酸在玻璃钟罩内连续喷雾 90s，观察 5min 内咳嗽次数进行筛选，咳嗽次数 小于 10 次者弃除。将筛选合格的豚鼠分为 5 个组，分别为空白组，阳性对照组，牛大力 水提物高(16g·kg-1·d-1)、中(8g·kg-1·d-1)、低(4g·kg-1·d-1)剂量给药组。阳性对照组 以 8mg·kg-1·d-1 美沙芬灌胃，空白组给予等容积蒸馏水，连续 5d。于末次给药后 1h(美 沙芬 0.5h)，按预选方法，用枸橼酸引咳，观察豚鼠自喷雾开始至出现咳嗽的潜伏期及喷 雾停止后 5min 内的咳嗽次数。 1.8 牛大力对豚鼠的平喘作用[7-8]取 250～300g 豚鼠，按整体喷雾致喘法，用 4g/L 磷酸组胺与 20g/L 氯化乙酰胆碱以体积比 1：2 混合液超声雾化器喷雾 25s 致喘，挑选潜 伏期在 150s 内出现哮喘的豚鼠为合格的敏感动物。将合格豚鼠分为 5 个组，分别为空白 组，阳性对照组，牛大力水提物高(16g·kg-1·d-1)、中(8g·kg-1·d-1)、低(4g·kg-1·d-1) 剂量给药组。阳性对照组以氨茶碱 1.2g·kg-1·d-1 剂量灌胃，空白组给予等容积蒸馏水， 连续 7d。于末次给药后 1h(氨茶碱 0.5h)，按预选方法记录各组动物出现哮喘的潜伏期。 1.9 统计学方法采用 SPSS11.5 统计软件进行 T 检验分析。 2 结果 2.1 牛大力对小鼠酚红祛痰的影响表 1 结果表明，牛大力水提物能显著增加小鼠气管 酚红排泌量，与空白组比较差异有显著性意义(P<0.05)，随着剂量的增加，祛痰作用增强， 呈现良好的量效关系。提示牛大力水提物具有较好的祛痰作用。 2.2 牛大力对家鸽气管纤毛运动的影响表 2 结果表明，牛大力水提物高剂量组药后 1h 炭末推进距离与空白组比较差异有显著性意义(P<0.05)，表明其对家鸽气管纤毛运动有明 显的影响。 2.3 牛大力对小鼠氨水引咳的镇咳作用表 3 结果表明，牛大力水提物能显著延长咳嗽 潜伏期，减少咳嗽次数，与空白组比较差异有显著性意义(P<0.05 或 P<0.01)。提示牛大 力水提物对氨水诱导的小鼠咳嗽有较好的镇咳作用。 2.4 牛大力对豚鼠枸橼酸引咳的镇咳作用表 4 结果表明，不同剂量的牛大力水提物均 能延长枸橼酸引咳豚鼠的咳嗽潜伏期，减少豚鼠 5min 内的咳表 1 各组对小鼠酚红祛痰的 影响表 2 各组对家鸽气管纤毛运动的影响表 3 各组对小鼠氨水引咳的镇咳作用比较嗽次数， 以高剂量组效果显著，与空白组比较差异有显著性意义(P<0.05)。提示牛大力水提物对枸 橼酸引咳的豚鼠有一定的镇咳作用。 2.5 牛大力对豚鼠的平喘作用表 5 结果表明，不同剂量的牛大力水提物对组胺-乙酰胆 碱诱发的哮喘有明显的保护作用，能使引喘潜伏期显著延长，与空白组比较差异有显著性 意义(P<0.01)。提示牛大力水提物有较好的平喘作用。表 4 各组对豚鼠枸橼酸引咳的镇咳 作用表 5 各组对豚鼠的平喘作用比较 3 讨论 到目前为止，有关牛大力对呼吸系统疾病的药理研究尚未见报道，临床证明其对慢性 支气管炎有一定疗效，本实验从镇咳、袪痰和平喘三个方面对其进行了初步研究，目的为 其进一步开发利用提供可靠的药理学依据。 慢性支气管炎是由于感染或非感染因素引起的气管、支气管黏膜及其周围组织的一种 慢性非特异性炎症，临床主要表现为咳、喘、痰症状，因而镇咳、祛痰和平喘在慢性支气 管炎的症状控制中起重要的作用。文献报道[9]化学物质氨水、枸橼酸可通过刺激呼吸道感 受器，引起支气管平滑肌收缩，兴奋引发神经冲动，激活脑内咳嗽中枢从而引起咳嗽反射。 本实验结果表明牛大力水提取物能显著抑制氨水引发小鼠咳嗽反应次数及枸橼酸引起豚鼠 咳嗽反应次数，延长咳嗽潜伏期，说明该药可作用于有关的化学感受器，保护支气管黏膜 免受刺激，达到镇咳效果。痰是由气管、支气管的腺体和杯状细胞所分泌，它的存在是引 起咳嗽以致喘息的重要原因。痰液的清除有赖于黏液胶的物理特性和黏液、气道及纤毛之 间的相互作用。本实验结果表明牛大力水提取物能增加小鼠气管酚红排出量，加速家鸽气 管黏膜的黏液纤毛运动，表明其可促进腺体分泌，使分泌量增加，稀释痰液从而达到化痰 祛痰作用。中医认为哮喘是宿痰内伏于肺，遇诱因而引发，使痰阻气道，肺失肃降，气道 挛急。文献报道[10]组胺可通过兴奋体内 H1 和 H2 组胺受体产生广泛而复杂的生理和病 理作用。本实验采用磷酸组胺和氯化乙酰胆碱混合液复制豚鼠哮喘模型，主要是由于在哮 喘急性发作时，这两种物质是导致气管痉挛收缩的主要介质，结果表明，牛大力水提取物 对组胺-乙酰胆碱诱发的哮喘有保护作用，能对抗组胺、乙酰胆碱等过敏介质引起的气管、 支气管收缩，明显延长哮喘潜伏期。综上所述，牛大力水提取物具有止咳、祛痰及平喘作 用。 【摘要】[目的]观察牛大力的祛痰、镇咳及平喘作用。[方法]通过小鼠气管酚红法、 家鸽纤毛运动实验、小鼠浓氨水引咳法、豚鼠枸橼酸引咳法及豚鼠组胺-乙酰胆碱超声雾化 法观察牛大力的祛痰镇咳平喘作用。[结果]牛大力能显著增加小鼠气管酚红排泌量，促进 家鸽气管内墨汁运动，减少氨水引发小鼠和枸橼酸引发豚鼠咳嗽反应的次数，延长咳嗽潜 伏期，对抗组胺-乙酰胆碱引起的豚鼠支气管哮喘(均 P<0.05 或 P<0.01)。[结论]牛大力 具有一定的祛痰、镇咳及平喘作用。 【关键词】牛大力/药理学慢性支气管炎/中药疗法疾病模型动物小鼠豚鼠家鸽