益母草有效成分分析论文

1 仪器、试剂与药材 1.1 仪器与试剂 CS-9301PC 双波长飞点层析扫描仪(日本岛津公 司);CAMAGLINOMATVCAMAGLINOMATV 半自动点样仪(瑞士卡马公司);CAMAGLINOMATV定量毛细管(美国 MICROCAPS 公 司);CAMAGLINOMATVXS205 双量程电子分析天平，量程：万分之一和十万分之一两档(梅特勒-托利多仪器 上海有限公司);CAMAGLINOMATV硅胶 G 板(青岛海洋化工厂);CAMAGLINOMATVDU-70 紫外-可见分光光度计(美国 BACKMAN 公司);CAMAGLINOMATV盐酸水苏碱对照品购自中国药品生物制品检定所，批号：110712-200407;CAMAGLINOMATV苯酚、 浓硫酸和葡萄糖等其他化学试剂均为分析纯;CAMAGLINOMATV水为蒸馏水。 1.2 药材分别采自贵州省惠水县和贵阳市郊乌当，药材样品均经贵阳中医学院魏升华 讲师鉴定为红花益母草 LeonurusjaponicusHoutt.，本实验均用益母草地上部分。 2 方法与结果 2.1 水苏碱的分析[5] 2.1.1 供试品溶液和对照品溶液的制备精密称取干燥益母草样品粉末约 1g，置圆底烧 瓶中，加入乙醇约 50ml，加热回流 1.5h，放冷，滤过，滤渣及回流容器用乙醇 50ml 分 次洗涤，合并滤液和洗液，蒸干，残渣用乙醇溶解，转移至 10ml 容量瓶中，加乙醇稀释 至刻度，摇匀，离心(5000 转/minmin，5min)，取上清液作为供试品溶液。精密称取在 105℃干燥 3h 的水苏碱对照品适量，加乙醇制成每 1ml 含 2.030mg 的溶液，作为对照 品溶液。 2.1.2 薄层色谱分析条件用硅胶 G 薄层板，点状点样，点样量 10μll。以正丁醇-盐酸乙酸乙酯(8：3：1)为展开剂，展开，取出晾干后，在 105℃加热 15min，放冷，喷以稀 碘化铋钾试液-1%三氯化铁乙醇溶液(10：1)混合溶液至斑点显色清晰，晾干，立即在薄 层板上覆盖同样大小的玻璃板，周围用胶布密封。反射法单波长锯齿形扫描。波长 λS=510nmS=510nm，狭缝 0.4mm×0.4mm。在上述分析条件下对薄层色谱进行扫描分析。 2.1.3 线性关系的考察用半自动点样仪在同一硅胶 G 薄层板上点盐苏碱对照溶液 2、4、6、8、10、12、14μll，用上述条件展开显色后进行薄层扫描测定，以点样量(μlg) 为横坐标，峰面积(A)为纵坐标，求出回归方程为：Y=185.75X-411.09，r=0.996，表 明水苏碱在 4.06～28.42μlg 范围内线性关系良好。由于直线不通过原点，因此用外标两 点法计算含量。 转贴于中国论文下载中心 http:/min/min2.1.4 稳定性考察在同一块薄层板上分别点 8μll 样品 溶液和 10μll 对照品溶液，依上述色谱条件和扫描条件操作，分别在 0、0.5、1、1.5、2h 扫描测定盐酸水苏碱峰面积，结果峰面积的 RSD 为 0.38%，表明盐酸水苏碱在本实验条 件下 2h 内稳定。 2.1.5 同板精密度和异板精密度试验分别在同一薄层板上和在另外 5 块薄层板上点同 一供试品溶液五个点，每个点 10μll，并以水苏碱对照品溶液 3、8μll 作为随行标准，分别 扫描测定其峰面积，按上述分析条件测定，以峰面积计算，同板精密度 RSD 为 1.00%， 异板精密度 RSD 为 1.90%。 2.1.6 重复性试验和回收率试验分别称取同一益母草药材 5 份，按 2.1.1“供试品溶液 的制备”和 2.1.2“薄层色谱分析条件”操作，测得水苏碱平均含量为 1.09%，RSD 为 2.52%。精密称取盐酸水苏碱平均含量为 1.09%的益母草药材 5 份，每份约 0.5g，精密 加入水苏碱对照品 5.00mg，同时加入约 50ml 乙醇回流提取，按上述“供试品溶液的制 备”方法和“薄层色谱分析条件”进行溶液制备和测定，结果 5 次回收率平均值： 99.76%，RSD=1.34%。 2.1.7 含量测定与结果按上述“供试品溶液制备方法”和“薄层色谱分析条件”对各样品进 行溶液制备和测定，结果见表 1。表 1 益母草样品中水苏碱和多糖含量测定结果 2.2 多糖的分析[6] 2.2.1 供试品溶液和对照品溶液的制备精密称取干燥益母草粉末约 0.3g，置圆底烧瓶 中，精密加入 50ml 蒸馏水后称重，加热回流提取 3h，冷却后称重，用水补足损失量，摇 匀，过滤，弃去初滤液，取续滤液 4ml 于 50ml 容量瓶中，用水定容至刻度，作样品液。 从样品液中精密量取 2ml 于 25ml 比色管中，分别精密加入 5%的苯酚 1ml、浓硫酸 5ml, 摇匀，置沸水浴中保持 15min 后取出，冷至室温，即为供试品溶液。精密称取经 105℃ 干燥至恒重的无水葡萄糖适量，用水制成每 1ml 含 56.17μlg 的溶液，作对照品溶液。 2.2.2 标准曲线的制作精密吸取 56.17μlg/minml 葡萄糖对照品溶液 0.3、0.6、0.9、1.2、1.5、1.8、2.0ml,分别置于 25ml 比色管中,体积不足 2ml 者用水 补足至 2ml,以下按 2.2.1“供试品溶液的制备”项下“分别精密加入 5%的苯酚 1ml”起，同 法操作即得。以相应试剂为空白，于 491nm 波长处测定吸光度。以吸光度 A 为纵坐标,浓 度 C 为横坐标,绘制标准曲线,得回归方程：A=0.0592C-0.00113;CAMAGLINOMATVr=0.9997 结果表明葡萄糖在 2.1064～14.0425μlg/minml 范围内，线性关系良好。 2.2.3 精密度和稳定性实验用同一供试品溶液连续 5 次测定其吸光度和每隔 1h 测定一 次吸光度,共测定 4 次，计算出精密度实验的 RSD%为 0.22;CAMAGLINOMATV稳定性试验的 RSD%为 0.55。表明仪器精密度良好，显色后的溶液 3h 内稳定。 2.2.4 重复性试验和回收率试验精密称取 2005 年 6 月采收的惠水野生益母草样品 5 份,每份约 0.3g，按 2.2.1“供试品溶液的制备”方法制备供试溶液,按 2.2.2“标准曲线的制 作”项下的相同测试条件进行测定。样品含量平均值为 4.46%，RSD%为 0.79。精密称取 已知多糖平均含量为 4.46%的益母草供试品 5 份，每份约 0.16g，分别精密加入浓度为 0.142g/minml 的葡萄糖对照品溶液 50ml，以下按 2.2.1“供试品溶液的制备”方法制备供试 溶液，按 2.2.2“标准曲线的制作”项下的相同测试条件进行测定，结果平均回收率为 98.87%，RSD%为 0.71。 2.2.5 样品含量测定按“2.2.1”项供试品溶液制备方法制备供试品溶液，用“2.2.2”“标 准曲线的制作”项下的相同测试条件对各样品进行多糖含量测定(含量按葡萄糖计)结果见表 1。 3 讨论 水苏碱是益母草的主要药用成分之一，而多糖虽不是益母草的主要药用成分，但对许 多疾病的辅助治疗作用却不可忽视。由实验数据看出，人工种植益母草中水苏碱含量在开 花前随生长年限变化呈递增趋势，此时益母草中的多糖含量也相对较高。而到果期水苏碱 含量明显下降的同时，多糖含量也明显下降。多糖类化合物广泛存在于植物细胞壁中，也 就是说多糖的存在是水苏碱在植物体内合成的一种保障，果期由于植物体内大量消耗糖分， 水苏碱的合成也相应降低，含量也随之降低。人工种植益母草与野生益母草相比，由于注 意管理，人工种植益母草中水苏碱和多糖含量较高，而野生益母草中却相对较低。 从人工种植益母草中水苏碱和多糖含量变化有一定规律来看，中药制剂的质量首先是 原料药材的质量要得到保证，其质量才可控，而野生益母草生长年限难以确定，水苏碱和 多糖含量变化也不易掌握，因此用其作为原料生产的复方制剂质量也难以保证。人工种植 益母草是中药制剂质量控制的一个发展方向，掌握其最佳采收时间，控制原料药材的质量， 也就保证了中药制剂质量的稳定。所以，益母草由野生转为人工种植势在必行。