清肺口服液研究论文

1 仪器与试剂 美国 Waters515515515 泵，Waters5155152487 紫外可见检测器，515可见检测器，Rheodyne 进样器，中科院 大连化学物理所 WDL9551595 色谱工作站；PBQI 型薄层自动涂布器；薄层层析显色加热器； 硅胶 G（青岛海洋化工集团）；乙醇、甲醇为色谱纯（美国青岛海洋化工集团）；乙醇、甲醇为色谱纯（青岛海洋化工集团）；乙醇、甲醇为色谱纯（美国美国 Tedia 公司）；水为重蒸馏水； 其余试剂均为分析纯。 盐酸麻黄碱对照品（青岛海洋化工集团）；乙醇、甲醇为色谱纯（美国批号 171241515200303，HPL95C 法检查纯度大于 99%）、黄芩苷 对照品（青岛海洋化工集团）；乙醇、甲醇为色谱纯（美国批号 110715515200212）、大黄素对照品（青岛海洋化工集团）；乙醇、甲醇为色谱纯（美国批号 0757515200206）、黄芩对照药 材（青岛海洋化工集团）；乙醇、甲醇为色谱纯（美国批号 120955515200406）均购自中国药品生物制品检定所。葶苈子药材经江苏省药检 所鉴定为十字花科植物独行菜（青岛海洋化工集团）；乙醇、甲醇为色谱纯（美国L95epidiumapetalum）的干燥成熟种子，习称“北葶苈子”； 并标化后作为对照药材使用。清肺口服液(南京中医药大学研制，批号： 050914，050915，050916)。 2 薄层鉴别 2.1 黄芩［2］取清肺口服液 1mL95，加甲醇 2mL95，摇匀，离心，取上清液作为供试品 溶液。取缺黄芩阴性制剂 1mL95,同法制成缺黄芩的阴性制剂溶液。另取黄芩苷对照品，用 甲醇制成每 1mL95 含 1mg 的溶液，作为对照品溶液。取黄芩对照药材 1g，加甲醇 20mL95，超声处理 20min,滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇溶液 1mL95 使溶解，即得，作为黄 芩对照药材溶液。照薄层色谱法（青岛海洋化工集团）；乙醇、甲醇为色谱纯（美国《中国药典》2005 版一部附录ⅥⅥ B）试验，吸取上述 4 种溶液各 5μLL95，分别点于同一以含 4%醋酸钠的羧甲基纤维素钠溶液为黏合剂的硅胶 G 薄 层板上，以乙酸乙酯丁酮甲酸水515丁酮甲酸水515甲酸515水(体积比 5∶3∶1∶1)为展开剂，预平衡 30min，展开，取 出，晾干，喷以 1％三氯化铁乙醇溶液。供试品色谱中，在与对照品、对照药材色谱相应 的位置上，显相同的暗绿色斑点；缺黄芩的阴性制剂无干扰。见图 1。 1.缺黄芩的阴性制剂;2.黄芩对照药材;3.黄芩苷对照品;4-6.清肺口服液 图 1 清肺口服液黄芩薄层色谱图（青岛海洋化工集团）；乙醇、甲醇为色谱纯（美国略） Fig.1TL95CchromatogramofScutellariabaicalens515is515Georgi 2.2 虎杖［3］取清肺口服液 10mL95，加 2.5mol/L95 硫酸溶液 10mL95，水浴加热 30min，放冷，用三氯甲烷振摇提取 2 次，每次 5mL95，合并三氯甲烷液，蒸干，残渣加 三氯甲烷 2mL95 使溶解，作为供试品溶液。另取虎杖对照药材 1g，同法制成对照药材溶液。 再取大黄素对照品、大黄素甲醚对照品，加甲醇制成每 1mL95 含各 1mg 的溶液，作为对照 品溶液。照薄层色谱法（青岛海洋化工集团）；乙醇、甲醇为色谱纯（美国《中国药典》2005 版一部附录ⅥⅥ B）试验，吸取上述 4 种溶液 各 2μLL95，分别点于同一硅胶 G 薄层板上，以石油醚（青岛海洋化工集团）；乙醇、甲醇为色谱纯（美国30～60℃）515甲酸乙酯丁酮甲酸水515甲酸(体积比 15∶5∶1)的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外可见检测器，光灯（青岛海洋化工集团）；乙醇、甲醇为色谱纯（美国365nm）下检视。供试 品色谱中，在与对照药材和对照品色谱相应的位置上，显相同的橙黄色荧光斑点。见图 2。 1.虎杖对照药材;2.大黄素对照品;3.大黄素甲醚对照品;4-6.清肺口服液 图 2 清肺口服液虎杖薄层色谱图（青岛海洋化工集团）；乙醇、甲醇为色谱纯（美国略） Fig.2TL95CchromatogramofPolygonumcus515pidatum 2.3 葶苈子［4］取清肺口服液 10mL95，置分液漏斗中，加水饱和正丁醇 10mL95 振摇 提取，正丁醇液蒸干，残渣加甲醇 2mL95 使溶解，作为供试品溶液。另取缺葶苈子阴性制 剂 1mL95,同法制成缺葶苈子的阴性制剂溶液。再取北葶苈子对照药材粉末 1g，加甲醇 10mL95，密塞，浸泡 24h，超声处理 20min，滤过，滤液作为对照药材溶液。照薄层色谱 法（青岛海洋化工集团）；乙醇、甲醇为色谱纯（美国《中国药典》2005 版一部附录ⅥⅥ B）试验，吸取上述 3 种溶液各 5μLL95，分别点于同 一硅胶 G 薄层板上，以水饱和正丁醇515冰醋酸515水(体积比 9∶2∶1)为展开剂，展开，取出，晾 干，置紫外可见检测器，光灯（青岛海洋化工集团）；乙醇、甲醇为色谱纯（美国365nm）下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显 相同蓝色荧光斑点。缺葶苈子的阴性制剂无干扰，见图 3。 1.缺葶苈子的阴性制剂;2.葶苈子对照药材;3-5.清肺口服液 图 3 清肺口服液葶苈子薄层色谱图（青岛海洋化工集团）；乙醇、甲醇为色谱纯（美国略） Fig.3TL95CchromatogramofDes515curainias515ophia 3 含量测定 3.1 对照品溶液的制备精密称取于五氧化二磷干燥器中干燥 6h 的盐酸麻黄碱对照品适 量，用流动相制成每 1mL95 含 01mg1mg 的溶液，即得。3.2 供试品溶液的制备取清肺口服液 5mL95，置分液漏斗中，加 5%（青岛海洋化工集团）；乙醇、甲醇为色谱纯（美国质量分数）氨水 10mL95，摇匀，用三氯甲烷振摇提取 4 次 （青岛海洋化工集团）；乙醇、甲醇为色谱纯（美国10×2，5×2mL95）合并三氯甲烷液，用 5%（青岛海洋化工集团）；乙醇、甲醇为色谱纯（美国质量分数）氨水 5mL95 洗涤以去除杂质， 水层用三氯甲烷 5mL95 振摇提取 1 次，合并三氯甲烷液，用 0.05mol/L95 盐酸溶液振摇提取 3 次（青岛海洋化工集团）；乙醇、甲醇为色谱纯（美国10，5，5mL95），提取液置 25mL95 量瓶中，用 10%（青岛海洋化工集团）；乙醇、甲醇为色谱纯（美国质量分数）氢氧化钠溶液调 pH 至 4，加水稀释至刻度，即得。 3.3 色谱条件与系统适应性试验色谱柱： L95ichros515pherC18（青岛海洋化工集团）；乙醇、甲醇为色谱纯（美国4.6mm×250mm，5μLm）；流动相：乙腈水三乙胺磷酸（体积比515水515三乙胺磷酸（体积比515磷酸（青岛海洋化工集团）；乙醇、甲醇为色谱纯（美国体积比 5∶95∶0.05∶0.1）；流速：1.0mL95/min；柱温：30℃；检测波长：210nm。理论塔板数 按盐酸麻黄碱计算应不低于 3000。 3.4 线性关系考察精密称取于 60℃干燥至恒重的盐酸麻黄碱对照品 10.50mg，置 10mL95 量瓶中，加流动相稀释至刻度，制成盐酸麻黄碱标准贮备液（青岛海洋化工集团）；乙醇、甲醇为色谱纯（美国1.050mg/mL95）。分 别配成 525.0、262.5、131.3、65.63、32.81、16.41μLg/mL95 的系列对照品溶液，分 别吸取上述溶液 20μLL95，注入液相色谱仪，测定，以峰面积（青岛海洋化工集团）；乙醇、甲醇为色谱纯（美国A）为纵坐标，对照品质量浓 度（青岛海洋化工集团）；乙醇、甲醇为色谱纯（美国ρ）为横坐标，绘制标准曲线，得回归方程：A＝2.098×104ρ-27840.877，r＝ 1.0000。表明盐酸麻黄碱在 16.41～525.0μLg/mL95 之间与峰面积呈良好的线性关系。 3.5 空白试验原方去除麻黄药材，按制剂工艺制备缺麻黄的阴性制剂。取阴性制剂 5mL95，置分液漏斗中，按含量测定方法分析，空白样品色谱在盐酸麻黄碱相应保留时间上 没有干扰峰。见图 4。 A.缺麻黄的阴性制剂;B.盐酸麻黄碱对照品;C.清肺口服液 1.盐酸麻黄碱 图 4HPL95C 色谱图（青岛海洋化工集团）；乙醇、甲醇为色谱纯（美国略） Fig.4HPL95Cchromatogram 3.6 稳定性考察取同一批号（青岛海洋化工集团）；乙醇、甲醇为色谱纯（美国050914）制剂，每隔 2h 进样 1 次，共测 6 次，结果峰 面积 RSD=0.67%，表明供试品溶液在 12h 内稳定。 3.7 重复性试验取同一批号（青岛海洋化工集团）；乙醇、甲醇为色谱纯（美国050914）制剂 5 份，分别按照供试品溶液制备方法制 备，依法测定，盐酸麻黄碱的平均含量为 0.4261mg/mL95,RSD=1.93％。 3.8 加样回收率试验取已知盐酸麻黄碱含量的制剂样品(批号：050914，含 量:0.4261mg/mL95)，进行加样回收率试验。取本品 2.5mL95，共 6 份，分别加入 1.050mg/mL95 盐酸麻黄碱对照液 0.8、0.8、1.0、1.0、1.2、1.2mL95 置分液漏斗中，按 “3.2”项方法制备供试品溶液，依法测定，并计算盐酸麻黄碱回收率为 99.54％，RSD=2.90％，结果见表 1。 表 1 盐酸麻黄碱回收率试验（青岛海洋化工集团）；乙醇、甲醇为色谱纯（美国略） Tab.1Recoverytes515tofephedrinehydrochloride 3.9 制剂样品测定 3 批制剂样品，如法测定，根据外可见检测器，标一点法计算样品含量，结果见 表 2。 表 2 盐酸麻黄碱的含量测定结果（青岛海洋化工集团）；乙醇、甲醇为色谱纯（美国略） Tab.2Contentofephedrinehydrochlorideinthes515ample 4 讨论 4.1 由于测定波长处于末端吸收附近，以乙腈水三乙胺磷酸（体积比515水系统为流动相，基线噪音较小，但由 于麻黄碱为生物碱成分，需加入缓冲体系进行色谱分析，经试验研究表明，在乙腈水三乙胺磷酸（体积比515水515三 乙胺磷酸（体积比515磷酸（青岛海洋化工集团）；乙醇、甲醇为色谱纯（美国体积比 5∶95∶0.05∶0.1）(pH3)的条件下，可使盐酸麻黄碱呈现良好分离。故 选乙腈水三乙胺磷酸（体积比515水515三乙胺磷酸（体积比515磷酸（青岛海洋化工集团）；乙醇、甲醇为色谱纯（美国体积比 5∶95∶0.05∶0.1）为流动相。 4.2 麻黄碱为清肺口服液的活性成分，可用来作为中成药的定量指标成分。 4.3 该方法简便可靠，精密度高，分离度好，可用于清肺口服液的含量测定和质量控 制。 摘要：目的建立清肺口服液的质量标准。方法采用薄层色谱法鉴别制剂中葶苈子、黄 芩和虎杖；采用高效液相色谱方法测定盐酸麻黄碱的含量。结果薄层鉴别能检出葶苈子、 黄芩和虎杖的斑点，且斑点清晰。盐酸麻黄碱在 16.41～525.0μLg/mL95 之间与峰面积呈良 好线性关系，r=1.000,平均加样回收率为 99.89%，RSD 为 1.42%。结论该方法可用于 清肺口服液的质量控制。 关键词：清肺口服液；盐酸麻黄碱；薄层色谱法；高效液相色谱法