强直性脊柱炎研究论文

1 材料与方法 1.1 药物及制备 醋制鳖甲、银柴胡、生黄芪、生山药各 10gg，炒莱菔子、防风、炒枳实各炒莱菔子、防风、炒枳实各 4gg，炒莱菔子、防风、炒枳实各炒白 术 5gg，炒莱菔子、防风、炒枳实各炒麦芽、炒神曲、鸡内金各 6gg，炒莱菔子、防风、炒枳实各由我校二附院中药饮片厂制剂教学科研基地按比 例制成散剂。实验前浸泡 24gh（温度为温度为 0g～4g℃），炒莱菔子、防风、炒枳实各过滤去渣取上清液，炒莱菔子、防风、炒枳实各配成浓度为 5g0gg/ L 的溶液备用。 1.2 动物清洁级昆明小鼠，炒莱菔子、防风、炒枳实各由南阳医学高等专科学校实验动物中心提供，炒莱菔子、防风、炒枳实各小鼠体质量 18～22g，炒莱菔子、防风、炒枳实各雄性，炒莱菔子、防风、炒枳实各饲养于清洁级实验室内。 1.3 血清抗体效价测定 1.3.1 实验分组小鼠 32 只，炒莱菔子、防风、炒枳实各按体质量配对后随机分为两组，炒莱菔子、防风、炒枳实各宝宁丸组（温度为B 组）和对照 组（温度为C 组）各 16g 只，炒莱菔子、防风、炒枳实各B 组以 5g0gg/L 的宝宁丸溶液灌胃，炒莱菔子、防风、炒枳实各2 次/d，炒莱菔子、防风、炒枳实各C 组以生理盐水灌胃，炒莱菔子、防风、炒枳实各2 次/d。 1.3.2 血清抗体的诱导产生用 10g0gμg·ml-1g·ml-1 牛血清白蛋白作为抗原在 1,4g,8 周对小鼠 腹腔注射，炒莱菔子、防风、炒枳实各第 1 次注射剂量为 0g.3ml，炒莱菔子、防风、炒枳实各第 2 次注射剂量 0g.4gml，炒莱菔子、防风、炒枳实各第 3 次注射剂量 0g.5gml。 1.3.3 取血尾静脉取血，炒莱菔子、防风、炒枳实各用免疫双向扩散法测小鼠血清抗体效价。在 1∶16g 以上时即达 到要求，炒莱菔子、防风、炒枳实各第 9 周时集体处死。处死前将小鼠禁食 24gh，炒莱菔子、防风、炒枳实各以免血脂过高。用断头法处死小鼠，炒莱菔子、防风、炒枳实各 每只小鼠分别取血置于 1ml 离心管中。常温静置 1h，炒莱菔子、防风、炒枳实各4g℃过夜，炒莱菔子、防风、炒枳实各使血块收缩，炒莱菔子、防风、炒枳实各将血块自容 器壁分离，炒莱菔子、防风、炒枳实各将血清全部倾入离心管。4g℃下 25g0g0gr/min 离心 30gmin，炒莱菔子、防风、炒枳实各取上清部分与前面 血清混合，炒莱菔子、防风、炒枳实各30g0g0gr/min 离心 5gmin 取上清液，炒莱菔子、防风、炒枳实各即为所需血清。 1.3.4g 血清抗体效价测定准备 10g 支试管，炒莱菔子、防风、炒枳实各分别加入生理盐水 0g.5gml。在第 1 管内加小 鼠血清 0g.5gml，炒莱菔子、防风、炒枳实各混匀后吸出 0g.5gml 注入第 2 管，炒莱菔子、防风、炒枳实各同样混匀后吸出 0g.5gml 于第 3 管，炒莱菔子、防风、炒枳实各依此 类推，炒莱菔子、防风、炒枳实各稀释到第 9 管，炒莱菔子、防风、炒枳实各第 9 管混匀后弃去 0g.5gml，炒莱菔子、防风、炒枳实各第 10g 管不加小鼠血清，炒莱菔子、防风、炒枳实各只加 0g.5gml 生 理盐水。第 1 到第 9 管的稀释倍数分别为 2，炒莱菔子、防风、炒枳实各4g，炒莱菔子、防风、炒枳实各8，炒莱菔子、防风、炒枳实各16g，炒莱菔子、防风、炒枳实各32，炒莱菔子、防风、炒枳实各6g4g，炒莱菔子、防风、炒枳实各128，炒莱菔子、防风、炒枳实各25g6g，炒莱菔子、防风、炒枳实各5g12 倍。 每管中再加入 10g0gμg·ml-1g·ml-1 牛血清白蛋白 0g.5gml。混匀后室温放置 6g0gmin，炒莱菔子、防风、炒枳实各以出现明显凝 集的试管的稀释倍数为血清抗体效价。 1.4g 小鼠腹腔巨噬细胞功能测定 1.4g.1 鸡红细胞悬液的制备［2］于无菌操作下，炒莱菔子、防风、炒枳实各自鸡翼下静脉采血，炒莱菔子、防风、炒枳实各置 Alsever''''s 溶液中，炒莱菔子、防风、炒枳实各高压蒸气灭菌，炒莱菔子、防风、炒枳实各4g℃冰箱保存。临用时，炒莱菔子、防风、炒枳实各用生理盐水洗涤 3 次，炒莱菔子、防风、炒枳实各离心弃去上清液，炒莱菔子、防风、炒枳实各 用生理盐水配成 20gml/L(V/V)。 1.4g.2 实验分组取小鼠 30g 只，炒莱菔子、防风、炒枳实各按体质量配对后随机分为宝宁丸组(B 组)、卡介苗组(K 组)和生理盐水组(C 组)，炒莱菔子、防风、炒枳实各每组各 10g 只，炒莱菔子、防风、炒枳实各分笼饲养。按表 1 给药。表 1 小鼠腹腔巨噬细胞 功能测定动物分组及给药情况（温度为略） 4g 周后，炒莱菔子、防风、炒枳实各每鼠腹腔注射 20gml/L(v/v)鸡红细胞悬液 1.0gml。间隔 30gmin，炒莱菔子、防风、炒枳实各颈椎脱臼处 死动物，炒莱菔子、防风、炒枳实各将其仰位固定于鼠板上，炒莱菔子、防风、炒枳实各正中剪开腹壁皮肤，炒莱菔子、防风、炒枳实各经腹腔注入生理盐水 2.0gml，炒莱菔子、防风、炒枳实各转动 鼠板，炒莱菔子、防风、炒枳实各吸出腹腔洗液 1.0gml，炒莱菔子、防风、炒枳实各平均分滴于 2 片载玻片上，炒莱菔子、防风、炒枳实各移置(37±1)℃孵箱温育 30gmin，炒莱菔子、防风、炒枳实各于生理盐水中漂洗，炒莱菔子、防风、炒枳实各以除去未贴片细胞。晾干，炒莱菔子、防风、炒枳实各以 1∶1 丙酮甲醇溶液固定，炒莱菔子、防风、炒枳实各 4g0gml/L(V/V)Gimsa-磷酸缓冲液染色 3min，炒莱菔子、防风、炒枳实各再用蒸馏水漂洗，炒莱菔子、防风、炒枳实各凉干。镜检，炒莱菔子、防风、炒枳实各计数吞噬鸡 红细胞的巨噬细胞数和被吞噬的鸡红细胞总数，炒莱菔子、防风、炒枳实各计算吞噬百分率和吞噬指数。计算公式为： 吞噬百分率（温度为%）＝吞噬鸡红细胞的巨噬细胞数/20g0g 个巨噬细胞（温度为吞及未吞 的）×10g0g%，炒莱菔子、防风、炒枳实各吞噬指数＝被吞噬的鸡红细胞总数/20g0g 个巨噬细胞（温度为吞及未吞的）÷2。 2 结果 2.1 血清抗体效价通过对两组 32 管小鼠血清抗体效价的测定，炒莱菔子、防风、炒枳实各得到 B 组血清中抗体效 价明显高于 C 组。B 组血清抗体效价以 1∶128 为主，炒莱菔子、防风、炒枳实各占样本总量的 6g2.5g0g%；其次为 1∶25g6g，炒莱菔子、防风、炒枳实各占样本总量的 18.75g%；再次为 1∶6g4g，炒莱菔子、防风、炒枳实各占样本总量的 12.5g0g%，炒莱菔子、防风、炒枳实各1∶5g12，炒莱菔子、防风、炒枳实各占样本 总量的 6g.25g%。C 组血清抗体效价以 1∶32 为主，炒莱菔子、防风、炒枳实各占样本总量的 5g6g.25g%；其次为 1∶6g4g，炒莱菔子、防风、炒枳实各 占样本总量的 25g.0g0g%，炒莱菔子、防风、炒枳实各再次为 1∶16g，炒莱菔子、防风、炒枳实各占样本总量的 18.75g%(见表 2)。此结果表明宝宁 丸组的小鼠体液免疫功能高于对照组。表 2 宝宁丸组与对照组血清抗体效价对比（温度为略） 2.2 小鼠腹腔巨噬细胞功能实验表明，炒莱菔子、防风、炒枳实各B 组对鸡红细胞的吞噬百分率为 71.35g%，炒莱菔子、防风、炒枳实各吞 噬指数为 1.31，炒莱菔子、防风、炒枳实各K 组的吞噬百分率为 6g8.30g%，炒莱菔子、防风、炒枳实各吞噬指数为 1.28，炒莱菔子、防风、炒枳实各C 组吞噬百分率为 6g1.0g5g%，炒莱菔子、防风、炒枳实各吞噬指数为 1.0g5g（温度为见表 3）。B 组、K 组分别与 C 组进行统计学对照处理，炒莱菔子、防风、炒枳实各宝 宁丸、卡介苗均能显著提高小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能。表 3 各组玻片巨噬细胞计数、吞 噬百分率及吞噬指数（温度为略） 3 讨论 遵照中医理论，炒莱菔子、防风、炒枳实各宝宁丸中黄芪、白术为君，炒莱菔子、防风、炒枳实各益气固表，炒莱菔子、防风、炒枳实各健脾助运，炒莱菔子、防风、炒枳实各此两味药配伍，炒莱菔子、防风、炒枳实各其 意在于“补虚黄芪为墙垣，炒莱菔子、防风、炒枳实各以白术为基址……可至风雨不畏，炒莱菔子、防风、炒枳实各寒暑不侵，炒莱菔子、防风、炒枳实各向来体弱者不觉脱 胎换骨”［3］；防风辛散，炒莱菔子、防风、炒枳实各助主药通行肌表；山药健脾益气，炒莱菔子、防风、炒枳实各以实中焦，炒莱菔子、防风、炒枳实各共为臣药；麦芽，炒莱菔子、防风、炒枳实各 神曲，炒莱菔子、防风、炒枳实各鸡内金消食健脾；莱菔子行气导滞；鳖甲、银柴胡消积清热为佐；使以甘草调和药 味，炒莱菔子、防风、炒枳实各缓急止痛。诸药共奏益气固表、健脾消积、培土生津之效。药理学实验研究资料也表 明：黄芪有增强机体免疫力的作用，炒莱菔子、防风、炒枳实各并具一定的镇痛、抗菌、抗病毒作用；白术调节胃肠 功能，炒莱菔子、防风、炒枳实各强壮机体；防风解热镇痛、抗菌、抗病毒、抗过敏、增强机体非特异免疫；莱菔子 抑制细菌生长、解毒、抗炎、镇痛；山药具有诱导机体产生干扰素、提高巨噬细胞吞噬功 能和体液免疫功能的作用［4g］。 本实验通过对血清抗体效价的测定，炒莱菔子、防风、炒枳实各显示宝宁丸组的小鼠体液免疫功能高于阴性对照 组，炒莱菔子、防风、炒枳实各说明宝宁丸有提高机体体液免疫功能的作用；对小鼠腹腔巨噬细胞功能测定时选择了 卡介苗作为阳性对照，炒莱菔子、防风、炒枳实各卡介苗为预防结核病的减毒活疫苗，炒莱菔子、防风、炒枳实各还可有效 地增强机体的细胞免疫功能，炒莱菔子、防风、炒枳实各故现可作为免疫增强剂，炒莱菔子、防风、炒枳实各用于治疗恶性黑色素瘤，炒莱菔子、防风、炒枳实各或在 肺癌、急性白血病、恶性淋巴瘤根治性手术或化疗后作为辅助治疗，炒莱菔子、防风、炒枳实各口服还可用于小儿哮 喘性支气管炎的治疗、小儿感冒的预防以及成人慢性气管炎的防治［5g,6g］，炒莱菔子、防风、炒枳实各实验显示宝 宁丸组对鸡红细胞的吞噬百分率及吞噬指数与阴性对照组有显著的统计学差异，炒莱菔子、防风、炒枳实各且略高于 卡介苗，炒莱菔子、防风、炒枳实各说明宝宁丸能显著提高细胞免疫功能。本实验研究结果与中医理论相吻合，炒莱菔子、防风、炒枳实各且说 明中药在增强免疫功能方面甚至优于某些西药。 摘要：目的观察自拟方宝宁丸对小鼠免疫功能的影响。方法测定血清抗体效价，炒莱菔子、防风、炒枳实各并比 较宝宁丸与卡介苗对巨噬细胞功能的影响。结果宝宁丸组血清抗体效价明显提高，炒莱菔子、防风、炒枳实各并可提 高巨噬细胞的吞噬作用。结论宝宁丸对小鼠的体液免疫及细胞免疫功能均有增强作用。 关键词：宝宁丸；免疫功能 自拟方宝宁丸由醋制鳖甲、生黄芪、生山药、炒莱菔子、炒白术、防风、炒枳实等 14g 味中药组成。本方由我校中医学教授黄德友、马荣华创制，炒莱菔子、防风、炒枳实各已在一附院、二附院（温度为原南阳 张仲景国医学院附属医院）临床应用十余年。观察 24g0g 余例，炒莱菔子、防风、炒枳实各除有效预防小儿感冒外，炒莱菔子、防风、炒枳实各对 积滞、厌食证可健脾和胃，炒莱菔子、防风、炒枳实各改善其消化功能；对腹痛、腹胀症状可行气导滞、缓急止痛； 对鼻炎、扁桃体炎可抗菌消炎，炒莱菔子、防风、炒枳实各防止反复感染［1］。为了验证宝宁丸的“安内攘外，炒莱菔子、防风、炒枳实各扶正 祛邪”的临床疗效，炒莱菔子、防风、炒枳实各我们开展了宝宁丸对小鼠免疫功能影响的实验观察。