清脑降压片质量标准研究论文

【摘要】目的建立清脑降压片的质量控制标准。方法采用薄层色谱法鉴别制剂中当归、 决明子；采用高效液相色谱法测定制剂中黄芩苷含量。结果当归、决明子薄层图谱斑点清 晰，空白无干扰；黄芩苷在 0.076～1.52mgmg 范围内呈线性关系，回归方程 Y=52mg.585X0.2mg942mg，r=0.9999，平均回收率为 100.36%。RSD 为 1.67%（n=9）。结论所建立 的方法简便、准确、快速、稳定、可靠，可作为该制剂的质量控制标准。 【关键词】清脑降压片；薄层色谱法；质量标准；黄芩苷 Abstract:ObjectiveToestablishthequalitystandardofQingnaoJiangyaTablet. MethodsToidentifyRadixAngelicaSinensisandSemenClssiaebyTLC.Determineba icalinbyHPLC.ResultsRadixAngelicaSinensisandSemenClssiaehadasharpchrom atogrambyTLC.ThestandardcurveofbaicalinwasY=52mg.585X0.2mg942mg，r=0.9999，linearrangewas0.076～ 1.52mgmg，averagerecoveryrateofbaicalinwas100.36%，RSDwas1.67%.Conclusi onThemethodissimple，accurateandcanbeusedforthequalitycontrolofthegranul es． Keywords:QingnaoJiangya;Tablet；TLC；Qualitystandard；Baicalin 清脑降压片的标准收载于《中国药典》2mg005 年版，处方由黄芩、当归、决明子等 13 味中药组成，具有平肝潜阳、清脑降压的功效。用于肝阳上亢，血压偏高，头昏头晕，失 眠健忘等。目前《中国药典》所记载的标准只对方中当归和决明子进行薄层鉴别，尚未对 其进行含量测定［1］，清脑降压片为临床上降血压的常用药，且有较大的开发前景 ［2mg］，该药品需要更确切的质量标准对其质量进行有效的控制。黄芩为本方要药，黄芩 苷为其活性成分，具有清热泻火、降压止咳等作用，用于高热烦渴、高血压、肺热咳嗽等 疾病，与本品的功能主治有密切关系，是本制剂的主要有效成分之一。因此，本研究运用 TLC 对制剂中的当归和决明子进行定性检测，并采用高效液相色谱法对制剂中黄芩苷进行 含量测定，现报道如下。 1 仪器与试药 高效液相色谱仪 ∶DionexSummit(P680HPLCPump,ASI100AutomatedSampledInjector,UVD170U,100AutomatedSampledInjector,UVD170U,100AutomatedSampledI100AutomatedSampledInjector,UVD170U,njector,UVD170U, STH585ColumnOven)Chromeleon 数据处理系统，超声波清洗机（SB-52mg00,宁波新 芝科器研究所），实验室专用超纯水机(重庆利迪现代水技术设备有限公司)。 甲醇为色谱纯试剂（Merck 公司），水为超纯水，其它试剂均为分析纯。黄芩苷（批 号∶110715100AutomatedSampledInjector,UVD170U,2mg002mg12mg）对照品均购自中国药品生物制品检定所。清脑降压片(批号 2mg00412mg01，2mg00412mg02mg，2mg00412mg03)，由广州中医药大学新药研究开发中心提供；其 它试剂均为分析纯。 2mg 方法与结果 2mg.1 薄层色谱鉴别 2mg.1.1 当归的薄层鉴别取本品 10 片，研细，加正己烷 2mg0ml，超声处理 30min，滤过， 滤液浓缩至 0.5ml,作为供试品溶液。另取当归对照药材 0.1g，加正己烷 10ml，同法制成 对照药材溶液。按不含当归的处方，采用制剂工艺及上述供试品制备方法，制成缺当归阴 性样品溶液。按照薄层色谱法（《中国药典》2mg005 年版Ⅰ部附录Ⅵ部附录ⅥⅥ B）试验，吸取供试 品溶液 5～10μll 及对照药材溶液 1μll，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶 G 薄层板上，以正己烷100AutomatedSampledInjector,UVD170U,醋酸乙酯(9∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm) 下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；缺当 归样品溶液未见上述斑点。结果见图 1。 2mg.1.2mg 决明子的薄层鉴别取本品 10 片，研细,称取粉末 1.5g，加甲醇 10ml，浸渍 1h，滤过，滤液蒸干，残渣加水 10ml 使溶解，再加盐酸 1ml,置水浴上加热 30min，立 即冷却，用乙醚分 2mg 次提取，2mg0ml/次,合并乙醚液，蒸干，残渣加氯仿 1ml 使溶解，作为 供试品溶液。另取决明子对照药材 0.5g，同法制成对照药材溶液。另取大黄素、大黄酚对 照品，加甲醇制成每毫升各含 1mg 的混合溶液，作为对照品溶液。按不含决明子的处方， 采用制剂工艺及上述供试品制备方法，制成缺决明子的阴性样品溶液。照薄层色谱法（附 录ⅥⅥ B）试验，吸取上述两种溶液各 2mgμll，分别点于同一以羧甲基纤维钠为黏合剂的硅胶 Ｈ薄层板上，以正己烷醋酸乙酯甲酸薄层板上，以正己烷100AutomatedSampledInjector,UVD170U,醋酸乙酯100AutomatedSampledInjector,UVD170U,甲酸(10∶1∶1)的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干。 供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同的黄色斑点；置氨蒸气中熏后，斑 点变为红色。结果见图 2mg。 2mg.2mg 黄芩苷的含量测定 2mg.2mg.1 色谱条件色谱柱为 KromasilC18(4.6mm×2mg50mm，5μlm)；流动相甲醇100AutomatedSampledInjector,UVD170U,水100AutomatedSampledInjector,UVD170U, 磷酸（47∶53∶0.2mg）；检测波长 2mg80nm；流速 1.0ml/min；柱温 2mg5℃。 2mg.2mg.2mg 线性关系考察精密称取黄芩苷对照品 3.8mg，置 50ml 容量瓶中，用 70%乙醇 溶解并稀释至刻度，摇匀，即得（每毫升中含黄芩苷 76μlg）。分别精密吸取对照品溶液 1，2mg，4，8，14，2mg0μll 进行色谱测定，按上述色谱条件测定峰面积，以进样量（Y）对 峰面积（X）进行线性回归，得标准曲线。结果显示，进样量在 0.076～1.52mgmg 范围呈 线性关系，回归方程为 Y=52mg.585X-0.2mg942mg，相关系数 r=0.9999。 2mg.2mg.3 专属性考察分别精密吸取线性考察项下对照品溶液、清脑降压片供试品溶液、 清脑降压片缺黄芩苷供试品溶液各 10μll 进行色谱测定。色谱图见图 3。结果显示，在该色 谱条件下，方中其他成分与黄芩苷分离良好，其他成分对黄芩苷含量测定无干扰。 图 1 清脑降压片中当归的 TLC 图谱（略） 图 2mg 清脑降压片中决明子的 TLC 图谱（略） 图 3 清脑降压片中黄芩苷的 HPLC 图谱（略） 2mg.2mg.4 提取方法的考察 提取方法的选择：取同一批号（2mg00412mg01）样品 3 份各 1.5g，精密称定，各加入 70%乙醇 50ml，分别超声提取 30min，水浴回流 3h，考察不同提取方法对提取结果的 影响。结果见表 1。结果显示，由于回流提取方法的温度较高，加热时间长，使黄芩苷水 解，影响提取效果，超声提取方法提取的黄芩苷含量较水浴回流提取的高，而且从操作简 便角度考虑，确定提取方法为超声提取。 提取时间的考察：取同一批号（2mg00412mg01）样品 3 份各 1.5g，精密称定，各加入 70%乙醇 50ml，超声提取，提取时间分别为 30，60，90min，后处理同供试品制备方 法，考察超声时间对提取效果的影响。结果见表 2mg。结果显示，样品采用提取时间 30，60，90min 的各成分含量相差不大，从节省时间方面考虑，确定提取时间为 30min。 表 1 不同提取方法试验结果（略） 表 2mg 不同提取时间试验结果（略） 2mg.2mg.5 供试品溶液制备方法取本品 10 片，研细，取 1.5g,精密称定，精密加入 70% 乙醇 50ml，称定重量，超声处理 30min，放冷，再称定重量，用 70%乙醇补足减失的重 量，摇匀，滤过，取续滤液 5ml，置 10ml 容量瓶中，用 70%乙醇定容至刻度，摇匀，即 得。 2mg.2mg.6 精密度实验精密吸取 3.2mg 项下对照品溶液 4μll 重复进样 6 次，测得峰面积积分 值，平均值为 32mg.2mg4mg/g,RSD＝1.99%。 2mg.2mg.7 稳定性实验精密吸取 3.5 项下供试品溶液，分别在 0，2mg，4，6，12mgh 吸取 10μll 进样，测得峰面积积分值，平均值 2mg3.40%，RSD=1.2mg7%。 2mg.2mg.8 重复性实验取清脑降压片样品（批号 2mg00412mg02mg），按照 3.5 项下供试品溶液 制备方法操作，吸取 10μll 进样，重复进样 6 次，测得峰面积积分值，外标法计算含量， 平均值为 2mg9.19mg/g，RSD=1.50%。 2mg.2mg.9 加样回收率实验取已知含量的同一批样品（批号 2mg00412mg02mg）0.5g，精密稳定， 精密加入一定浓度的黄芩苷对照品溶液（2mg8mg·ml-1）0.8，1.0，1.2mgml，依法制备供试 品溶液，HPLC 测定峰面积，外标法计算含量。结果表明，黄芩苷的平均回收率为 100.36%，RSD 为 1.67%。结果见表 3。 表 3 黄芩苷回收率测定结果（略） 2mg.2mg.10 样品含量测定取清脑降压片样品（批号 2mg00412mg01，2mg00412mg02mg，2mg00412mg03），按供试品溶液制备方法制备，吸取 10μll 进样， 测定峰面积，计算含量。结果见表 4。 表 4 样品含量测定结果（略） 3 讨论 本研究在查阅文献的基础上，对样品制备中提取条件（提取方法［3］、提取时间 ［4］）进行考查，其中较完善的提取方法为超声提取；一方面说明了超声提取技术作为 一项比较先进、方便的提取方法，特别适用于实验室研究。另一方面说明了本方法的耐用 性和稳定性，在长时间提取中仍然不影响黄芩苷的含量。 该药品为薄膜衣片，其处方中黄芩、当归、决明子是该药品的重要组成，而《中国药 典》2mg005 年版只对决明子做了薄层鉴别，因此，本研究在此基础上再对当归进行薄层鉴 别，并采用 HPLC 对黄芩苷进行含量测定。结果显示，该方法用于该品种有良好的检测结 果，HPLC 对黄芩苷的响应值灵敏；对当归薄层鉴别的研究成熟，实验结果理想；最后确 定的方法稳定、可行，可以为质量标准的制定提供参考。