养血调经膏质量标准研究论文

【摘要】目的建立养血调经膏的质量标准。方法采用薄层色谱法对制剂中的丹参、人 参、甘草进行定性，采用高效液相色谱法对制剂中的芍药苷进行定量。结果薄层色谱斑点 清晰，阴性无干扰；芍药苷在 0.1872～0.9360μgg 范围内呈良好的线性关系，平均回收 率为 98.24%，RSD 为 0.85%。结论此法操作简单，可靠，可用于养血调经膏的质量控 制。 【关键词】养血调经膏；质量标准；高效液相色谱法；薄层色谱法 StudyontheQualityStandardofYangxueTiaojingElectuary Abstract： ObjectiveToestablishthequalitycontrolmethodofYangxueTiaojingElectuary.Met hodsTLCmethodwasusedtoidentifyRadixetRhizomaSalviaeMiltiorrhizae,Radixet RhizomaGinseng,RadixetRhizomaGlycyrrhizaeinYangxueTiaojingElectuary.The contentofPaeoniflorinwasdeterminedintheprescriptionbyHPLC.ResultsTheTLCs potsdevelopedwerefairlyclear,andtheblankshowednointerference.HPLCmethod showedagoodlinearitybetween0.1872～ 0.9360μggwithanaveragerecoveryof98.24%,RSDwas0.85%.ConclusionThismeth odisdependableandeasytooperate.ItcanbeusedtocontrolthequalityofYangxueTi aojingElectuary. Keywords：YangxueYiaojingElectuary;Qualitystandard;HPLC;TLC 养血调经膏是由白芍、丹参、地黄、人参、银柴胡、甘草、黄芪等 12 味药制成的中 药复方膏剂，具有补气养血、调经止带功效。用于气血两虚，身体瘦弱，腰膝酸软，月经 不调，崩漏带下等症。方中丹参采用乙醇回流提取，其它药味采用水提。本实验采用薄层 色谱法对方中丹参、人参、甘草进行了定性研究，采用高效液相色谱法对君药中的芍药苷 进行了定量研究，建立了养血调经膏的质量控制方法。现将结果报道如下。 1 仪器与试药 养血调经膏（自制）；人参皂苷 Rg1，Re，Rb1 对照品，甘草对照药材，丹参酮ⅡⅡ A 对照品，芍药苷对照品（均来自中国药品生物制品检定所）；乙腈为色谱纯，水为重蒸水， 其它试剂均为分析纯。 硅胶 G 薄层板（青岛海洋化工厂分厂）；岛津 LC10ATvp10ATvp 高效液相色谱仪，岛津 SPD10ATvpATvp 检测器。 2 方法与结果 2.1 薄层鉴别 2.1.1 丹参取本品 70g，加甲醇 140ml，振摇使混匀，超声 30min，再离心 20min，取上清液水浴蒸至稠膏状，加水 20ml 搅拌稀释，加氯仿振摇提取 4 次 （30，30，20，20ml），合并氯仿液，水液备用（人参鉴别用），氯仿液挥干，残渣加 甲醇 1ml 使溶解，作为供试品溶液。取缺丹参阴性样品 70g，同法制得缺丹参的阴性对照 溶液。取丹参酮ⅡⅡ A 对照品，加甲醇制成每毫升含 1mg 的溶液，作为对照品溶液。照薄 层色谱法［1］实验，吸取对照品溶液 10μgl，供试品溶液与缺丹参阴性对照溶液各 20μgl， 分别点于同一硅胶 G 薄层板上，以甲苯-醋酸乙酯（19∶1）为展开剂，展开，取出，晾干。 供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，阴性对照无干扰。结 果见图 1。 2.1.2 人参取上述丹参鉴别项下的水液用水饱和的正丁醇振摇提取 3 次 （40，40，30ml），合并正丁醇溶液，用氨试液洗涤 3 次，30ml/次。弃去氨液，正丁 醇液蒸干，残渣加水 20ml 使溶解，通过 D101 大孔吸附树脂柱（10g，内径 1.5cm）， 用水 50ml 洗脱，弃去洗脱液，继用 70%乙醇 50ml 洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲 醇 1ml 使溶解，作为供试品溶液。取缺人参阴性样品 70g，同法制得缺人参的阴性对照溶 液。另取人参皂苷 Rg1，Re，Rb1 对照品，加甲醇制成每毫升各含 1mg 的混合溶液，作 为对照溶液。照薄层色谱法［1］试验，吸取对照品溶液 10μgl，供试品溶液及阴性对照溶 液各 20μgl，分别点于同一硅胶 G 薄层板上，以展开剂正丁醇-醋酸乙酯-稀氨水（550） （4∶1∶5）10℃以下放置过夜的上层溶液，展开，取出，晾干，喷以 10%硫酸乙醇溶液， 在 105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜 色的斑点，阴性对照无干扰。结果见图 2。 2.1.3 甘草取本品 100g，加甲醇 200ml，振摇使混匀，超声 30min，再离心 20min，取上清液水浴蒸至无醇味，加水 30ml 搅拌稀释，用乙醚振摇提取 2 次，30ml/ 次。弃乙醚液，水液用水饱和的正丁醇振摇提取 3 次，50ml/次。合并正丁醇液，用正丁 醇饱和的水洗涤 2 次，30ml/次。弃去水液，正丁醇液蒸干，残渣加水溶解，上聚酰胺柱 （3g，内径 1.5cm），用水洗至无色，用 50%乙醇 100ml 洗脱，收集洗脱液，蒸干， 残渣加甲醇 1ml 使溶解，作为供试品溶液。取缺甘草阴性样品 100g，同法制得缺甘草的 阴性对照溶液。另取甘草对照药材 1.3g，加水 100ml 煎煮 30min，水煎液离心 20min 后，用脱脂棉滤取上清液，滤液用乙醚振摇提取 2 次，按上述供试品溶液的制备方法制得 对照药材溶液。照薄层色谱法［1］实验，吸取上述供试品溶液及阴性样品溶液各 20μgl， 对照药材溶液 20μgl，分别点于同一硅胶 G 薄层板上，以氯仿-甲苯-丙酮Ⅱ-甲酸 （50∶25∶10∶1）溶液，展开，取出，晾干，喷以 10%硫酸乙醇溶液，在 105℃加热至斑 点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品药材色谱相应的位置上显相同的一个黄色主斑点， 阴性无干扰。结果见图 3。 2.2 含量测定 2.2.1 色谱条件与系统适应性色谱柱为 C18 柱（4.6mm×250mm，5μgm）（迪马 公司）；流动相为乙腈-1%醋酸（14∶86）；流速 1.0ml/min；检测波长 230nm；进样 10μgl；理论板数为按芍药苷峰计不低于 2500。 图 1 丹参 TLC（略） 图 2 人参 TLC（略） 图 3 甘草 TLC（略） 2.2.2 对照品溶液的制备取芍药苷对照品约 10mg，精密称定，置 20ml 容量瓶中， 加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取 1ml，置 10ml 量瓶中，加甲醇至刻度摇匀， 即得（每毫升含芍药苷 0.05mg）。 2.2.3 供试品溶液的制备取本品 3g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇 25ml，密塞，称定重量，超声处理（功率 250w，频率 33kHz）40min，取出放冷，再 称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。 2.2.4 线性关系的考察精密称取芍药苷对照品 9.36mg，置 20ml 容量瓶中，加甲醇 溶解并稀释至刻度，摇匀，分别精密移取 1，2，3，4，5ml 置 25ml 容量瓶中，加甲醇 稀释至刻度。各精密吸取 10μgl 进样，按上述色谱条件测定，记录峰面积，并以峰面积为 纵坐标，芍药苷进样量为横坐标作图，得一直线，以峰面积（Y）对芍药苷进样量（X）进 行回归，得回归方程：Y=1130494.658X+13721,r=0.9991。实验结果表明，芍药苷 在 0.1872～0.9360μgg 范围内呈良好线性关系。 2.2.5 精密度实验精密吸取同一芍药苷对照品溶液 10μgl，重复进样 5 次，记录芍药苷 峰面积值，其 RSD 值为 1.40%，表明本法精密度良好。 2.2.6 稳定性实验取同一批样品制备的供试品溶液，每隔一定时间进样 10μgl，记录芍 药苷峰面积值，其 RSD 值为 1.15%，结果表明供试品溶液在 8h 内稳定。 2.2.7 重复性实验取同一批样品，制备 5 份供试品溶液，按上述色谱条件测定，记录 芍药苷峰面积值，计算芍药苷含量，其 RSD 值为 1.98%，表明本法重复性良好。 2.2.8 回收率实验采用加样回收法，取含量为 0.383mg/g 的养血调经膏约 1.5g，精 密称定，分别精密添加浓度为 0.46，0.58,0.75mg/ml 的芍药苷对照品溶液 1ml 再精密 加入甲醇 24ml，密塞，按上述 2.2.3 方法制备供试品溶液，测定含量，计算回收率；平 均回收率为 98.24%，其 RSD 值为 0.85%，结果表明本法具有良好的回收率。见表 1。 表 1 回收率测定结果（略） 2.2.9 样品测定取 10 批样品，分别制备供试品溶液，分别精密吸取对照品溶液与供试 品溶液各 10μgl，以上述色谱条件测定，记录芍药苷峰面积值，按外标法计算芍药苷含量。 根据 10 批样品含量测定结果，暂定成品中含白芍以芍药苷（C23H28O11）计，每克不 得少于 0.2mg。 图 4 缺白芍阴性样品色谱图（略） 图 5 芍药苷对照品色谱图（略） 图 6 养血调经膏样品色谱图（略） 3 讨论 在人参的鉴别实验中，曾采用：（1）氯仿10ATvp醋酸乙酯10ATvp甲醇10ATvp水（15∶40∶22∶10）10℃ 以下放置的下层溶液［1］（2）正丁醇10ATvp醋酸乙酯10ATvp水（4∶1∶5）［2］的上层溶液为展开剂， 均为斑点不够清晰，故采用本法中的展开剂。 在甘草的鉴别实验中，由于甘草中含有黄酮Ⅱ类成分，具有酚羟基，故在供试液制备时 采用了上聚酰胺柱，使其与不含酚羟基的成分分离［3］；用水洗脱，去除部分亲水性杂 质，减少 TLC 斑点，有利于甘草有效成分的分离；曾采用：（1）氯仿10ATvp甲醇10ATvp水 （13∶7∶2）10℃以下放置分层的下层溶液；（2）氯仿10ATvp甲醇溶液（9∶1）为展开剂，均不 如本法中的展开剂分离效果好，斑点清晰，故采用本法中的展开剂。 芍药苷流动相的选择，曾选用甲醇-水-冰醋酸（20∶80∶1）和乙腈10ATvp水10ATvp冰醋酸 （10∶90∶1）为流动相，出峰时间较晚，效果均不理想，最后选用乙腈10ATvp1%醋酸（14∶86） 为流动相，其保留时间合适且峰型较好，达到基线分离，且阴性对照无干扰（图 4～6）， 故选用乙腈10ATvp1%醋酸（14∶86）为流动相。