北柴胡茎叶化学成分探究论文

【摘要】目的对中药北柴胡茎叶的化学成分进行分离和鉴定。方法用色谱法和波谱解 析方法对北柴胡茎叶的化学成分进行分离和结构鉴定。结果共得到 7 个化合物：香草酸①、 水杨酸②、咖啡酸乙酯③、原儿茶酸④、柴胡色原酮酸⑤、山萘酚⑥、芦丁⑦。结论化合 物②③④为柴胡属植物中首次分离得到。 【关键词】北柴胡化学成分结构鉴定 Abstract： ObjectiveTostudythechemicalconstituentsoftheaerialpartofBupleurumchinense DC..MethodsDriedaerialpartsofBupleurumchinenseDC.wereextractedwithEtOH andtheirchemicalconstituentswereisolatedandstructureswereconfirmedbyphys icalandchemicalpropertiesandspectralanalysis.ResultsSevencompoundswereo btainedandidentifiedasvanillicacid①,salicylicacid②,ethylcaffeate③,protocaech uicacid④,saikochromonicacid⑤,kaempferol⑥andrutin⑦.ConclusionCompound ②③④wereobtainedfromgenusBupleurumforthefirsttime. Keywords：BupleurumchinenseDC．；Chemicalconstituent； Structureidentification 柴胡为伞形科（Umbelliferae）柴胡属柴胡属 Bupleurum 植物。具疏散退热，舒肝升阳之 功效，主治感冒发热，寒热往来，疟疾，胸胁胀痛，月经不调及子宫脱垂等证。现代药理 研究证明柴胡具有解热、镇痛、镇静、抗炎、增强免疫、保肝利胆、抗菌、抗病毒及抗肿 瘤等作用。《中国药典》（2005 年版）柴胡属收载北柴胡 BupleurumchineseDC.和狭叶柴胡 B.scorzonerifoliumWilld.的干燥根为药用柴胡来源。作者对北柴胡茎叶的化学成分进行 了提取、分离和结构鉴定，从其乙醇提取物中分离得到了 7 个化合物，并通过理化性质分 析和波谱解析等手段确定了它们的结构为香草酸（vanillicacid，1）柴胡属、水杨酸 （salicylicacid，2）柴胡属、咖啡酸乙酯（ethylcaffeate，3）柴胡属、原儿茶酸 (protocaechuicacidprotocaechuicacid，4）柴胡属、柴胡色原酮酸（saikochromonicacid，5）柴胡属、山萘酚 （kaempferol，6）柴胡属、芦丁(protocaechuicacidrutin,7)。其中化合物 2，3，4 为首次从柴胡属植物中分离 得到。 1 仪器与试药 核磁共振光谱用 BrukerAV-300、AV-500 型核磁共振光谱仪测定（TMS 内标）柴胡属；红 外光谱用 ShimadzuIR-435 型红外分光光度计测定（KBr 压片）柴胡属；熔点用 X4 型数字显示 显微熔点测定仪（未校正）柴胡属测定；ESI-MS 在 Agilent1100LC/MSDSL 上测定； LABCONCO(protocaechuicacidfreezedrysystem/LYPHLOCK4.5)冷冻干燥仪。化合物纯度由 Agilent1100 高效液相色谱仪检测。柱色谱材料为 D101 型大孔吸附树脂、聚酰胺（100~200 目）柴胡属、硅胶(protocaechuicacid200~300 目)、RP-C18（YMC;12μmm）柴胡属及 SephadexLH20（AmershamBiosciences）柴胡属，柱色谱试剂均为分析纯，高效液相色谱试剂均为色谱 纯。 2 方法与结果 2.1 提取与分离北柴胡干燥茎叶 15kg，粉碎后用 80%乙醇冷浸提取 2 次，合并提取 液，减压浓缩至无醇味，得总浸膏。总浸膏用正丁醇萃取，减压浓缩后得正丁醇部浸膏 320g，水溶解后上大孔吸附树脂换水洗脱后，分别用不同体积分数的 95%乙醇梯度 （φ=20%，30%，50%，70%）柴胡属洗脱，20%乙醇洗脱得流分Ⅰ，30%乙醇洗脱得流分 Ⅱ，50%乙醇洗脱得流分Ⅲ，70%乙醇洗脱得流分Ⅳ。流分Ⅰ经硅胶干柱色谱，以氯仿甲醇-水（体积比为 4∶1∶0.5）柴胡属洗脱得 15 个组分（Fr.1~Fr.15）柴胡属，其中，Fr.3 经 SephadexLH-20，甲醇洗脱得化合物 1（15mg）柴胡属；Fr.5 经 RP-C18 反相柱色谱，水-甲 醇（1∶1）柴胡属洗脱得化合物 2（12mg）柴胡属；Fr.7-12 经 RP-C18 反相柱色谱，水-甲醇（9∶1）柴胡属 洗脱得化合物 5（6mg）柴胡属。流分Ⅱ经硅胶干柱色谱，氯仿-甲醇溶剂系统（7∶3）柴胡属洗脱得化 合物 4(protocaechuicacid7mg)。流分Ⅲ经硅胶干柱色谱，石油醚-醋酸乙酯溶剂系统（体积比 100∶0，90∶10，80∶20…）柴胡属梯度洗脱，得 20 流分，流分 10 经反相柱色谱，水-甲醇（体 积比 3∶7）柴胡属洗脱得化合物 3(protocaechuicacid0.6g)。流分Ⅳ经聚酰胺色谱柱不同体积分数乙醇梯度洗脱， 得化合物 6(protocaechuicacid0.5g)和 7(protocaechuicacid3.0g)。 2.2 结构鉴定 2.2.1 化合物 1 无色针晶（醋酸乙酯）柴胡属，mp210~212℃，溴甲酚绿显色反应阳性 (protocaechuicacid示存在羧基)，三氯化铁-铁氰化钾反应阳性(protocaechuicacid示有酚羟基存在)， 1HNMR(protocaechuicacid300MHz，DMSO-d6)：δ12.46(protocaechuicacid1H，brs，COOH)，9.81(protocaechuicacid1H，brs，ArOH)，7.43(protocaechuicacid1H，d，J=2.0Hz,H2)，7.45(protocaechuicacid1H，dd，J=8.7，2.0Hz，H-6)，6.84(protocaechuicacid1H，d，J=8.7Hz，H5)，3.81(protocaechuicacid3H，s，OCH3)。NOESY 谱中，3.81(protocaechuicacid3H，s，OCH3)与 7.43(protocaechuicacid1H，d，J=2.0Hz,H-2)有 NOE 效应。经与文献［1］对照，确定化合物 1 为香草酸。 2.2.2 化合物 2 无色针状结晶（乙醇）柴胡属，mp151~154℃，溴甲酚绿显色反应阳性 (protocaechuicacid示存在羧基)，三氯化铁-铁氰化钾反应阳性(protocaechuicacid示有酚羟基存在)， 1HNMR(protocaechuicacid300MHz，DMSO-d6)：δ6.97(protocaechuicacid1H，d，J=7.9Hz，H3)，7.54(protocaechuicacid1H，dd，J=7.9，1.7Hz，H-4)，6.94(protocaechuicacid1H，t，J=7.9Hz，H5)，7．80(protocaechuicacid1H，dd，J=7.9，1.7Hz，H-6)，12.65（1H，s，OH）柴胡属，15.87（1H，s，-COOH）柴胡属。13CNMR(protocaechuicacid125MHz，DMSO-d6)：δ112.9(protocaechuicacidC1)，161.1(protocaechuicacidC-2)，117.0(protocaechuicacidC-3)，135.6(protocaechuicacidC-4)，119.1(protocaechuicacidC-5)，130.2(protocaechuicacidC-6)，171.8(protocaechuicacidC7)。以上氢谱与碳谱数据与文献［2］基本一致，确定化合物 2 为水杨酸。 2.2.3 化合物 3 无色针晶(protocaechuicacid甲醇)，mp142~143℃，IRcm-1：3430(protocaechuicacidOH)，1660(protocaechuicacidC=O)，1622(protocaechuicacidC=C)，1602，1590(protocaechuicacidAr)，1042(protocaechuicacidCO-)。1HNMR(protocaechuicacid500MHz，DMSO-d6)：δ7.04(protocaechuicacid1H，d，J=2.1Hz，H2)，6.75(protocaechuicacid1H，d，J=8.2Hz，H-5)，7.00(protocaechuicacid1H，dd，J=8.2，2.1Hz，H6)，6.25(protocaechuicacid1H，d，J=15.9Hz，=C-H)，7.46(protocaechuicacid1H，d，J=15.9Hz，=CH)，4.15(protocaechuicacid2H，q，-CH2)，1.24(protocaechuicacid3H，t，CH3-)，9.09(protocaechuicacid1H，s，-OH)，9.54(protocaechuicacid1H，s，OH)。ESI-MS(protocaechuicacidm／z)：208(protocaechuicacidM+)，180(protocaechuicacidM+-CH2CH3+H)，163(protocaechuicacidM+OCH2CH3)。13CNMR(protocaechuicacid125MHz，DMSO-d6)：125.5（C-1）柴胡属，114.8（C2）柴胡属，145.5（C-3）柴胡属，144.9（C-4）柴胡属，115.7（C-5）柴胡属，121.2（C6）柴胡属，114.0（=C）柴胡属，148.3（=C）柴胡属，166.4（-C=O）柴胡属，59.6（CH2）柴胡属，14.2（CH3-）柴胡属。以上氢谱与碳谱数据与文献［3］基本一致，确定化合物 3 为咖 啡酸乙酯。 2.2.4 化合物 4 无色针晶（甲醇）柴胡属，mp204~206℃，溴甲酚绿显色反应阳性(protocaechuicacid示存 在羧基)，三氯化铁-铁氰化钾反应阳性(protocaechuicacid示有酚羟基存在)，1HNMR(protocaechuicacid500MHz，DMSOd6)：δ7.35（1H，d，J=2.0Hz，H-2）柴胡属，6.79(protocaechuicacid1H，d，J=8.2Hz，H- 5)，7.30(protocaechuicacid1H，dd，J=8.2，2.0Hz，H-6)，9.26(protocaechuicacid1H，s，-OH)，9.63(protocaechuicacid1H，s，OH)，12.27(protocaechuicacid1H，s，-COOH)。13CNMR(protocaechuicacid125MHz，DMSO-d6)：δ121.7(protocaechuicacidC1)，116.6(protocaechuicacidC-2)，144.9(protocaechuicacidC-3)，150.0(protocaechuicacidC-4)，115.1(protocaechuicacidC-5)，121.9(protocaechuicacidC-6)，167.3(protocaechuicacidCOOH)。以上氢谱与碳谱数据与文献［4］基本一致，确定化合物 4 为原儿茶酸。 2.2.5 化合物 5 淡黄色针晶(protocaechuicacid甲醇)，三氯化铁-铁氰化钾反应阳性(protocaechuicacid示有酚羟基存在)， 溴甲酚绿显色反应阳性(protocaechuicacid示存在羧基)。1HNMR(protocaechuicacid500MHz，DMSOd6):δ6.67(1Hδ6.67(protocaechuicacid1H，s，H-3)，6.19(protocaechuicacid1H，d，H-6)，6.46(protocaechuicacid1H，d，H8)。13CNMR(protocaechuicacid125MHz，DMSO-d6)：δ160.7(protocaechuicacidC-2)，109.0(protocaechuicacidC-3)，183.2（C4）柴胡属，161.4（C-5）柴胡属，98.8（C-6）柴胡属，161.6（C-7）柴胡属，93.99（C-8）柴胡属，157.6（C9）柴胡属，104.5（C-10）柴胡属，164.6（-COOH）柴胡属。以上氢谱与碳谱数据与文献［5］基本一致， 确定化合物 5 为柴胡色原酮酸。 2.2.6 化合物 6 淡黄色针晶(protocaechuicacid甲醇)，mp275~276℃，三氯化铁-铁氰化钾反应阳性 (protocaechuicacid示有酚羟基存在)，盐酸-镁粉反应阳性，Molish 反应阴性。与山萘酚标准品共薄层，Rf 值一致。与标准品混合后熔点不下降。1HNMR(protocaechuicacid500MHz,DMSOd6):δ6.67(1Hδ12.47,10.75,10.07,9.35(protocaechuicacid 各 1H,s,D2O 可交换,5-OH,7-OH,3-OH,4′OH),8.04(protocaechuicacid2H,d,J=8.7Hz,H-2′,H-6′),6.93(protocaechuicacid2H,d,J=8.7Hz,H-3′,H5′),6.44(protocaechuicacid1H,d,J=2.0Hz,H-8),6.19(protocaechuicacid1H,d,J=2.0Hz,H-6)。以上氢谱数据与文献［6］基 本一致，确定化合物 6 为山萘酚。 2.2.7 化合物 7 淡黄色针晶(protocaechuicacid甲醇)，mp185~186℃，三氯化铁-铁氰化钾反应阳性 (protocaechuicacid示有酚羟基存在)，盐酸-镁粉反应及 Molish 反应阳性，与芦丁标准品共薄层，Rf 值一致。 高效液相检测与芦丁标准品保留时间相同（液相色谱条件：AgilentEclipseCDB-C18 色 谱柱，4.6mm×250mm，5μmm；柱温：30℃；流动相：20％甲醇；流速：1.0ml/ min；检测波长：365nm）柴胡属。1HNMR(protocaechuicacid500MHz，DMSOd6):δ6.67(1Hδ12.59,10.79,9.62,9.14(protocaechuicacid各 1H,s,D2O 可交换,5-OH,7-OH,3′-OH,4′OH),7.55（1H,d,J=2.0Hz,H-2′）柴胡属,7.53(protocaechuicacid1H,dd,J=2.0,8.2Hz,H6′),6.84(protocaechuicacid1H,d,J=8.1Hz,H-5′),6.38(protocaechuicacid1H,d,J=2.0Hz,H-8),6.19(protocaechuicacid1H,d,J=2.0Hz,H6),5.33(protocaechuicacid1H,d,J=7.4Hz,GlcH-1),5.06(protocaechuicacid1H,brs,rhaH-1)。以上氢谱数据与文献［5］基 本一致，确定化合物 7 为芦丁。 3 讨论 本实验从北柴胡茎叶中分离鉴定了 7 个化合物，其中黄酮类 3 个，分别为柴胡色原酮 酸⑤、山萘酚⑥、芦丁⑦；酚酸类 4 个，分别为香草酸①、水杨酸②、咖啡酸乙酯③、原 儿茶酸④。化合物②③④为首次从柴胡属植物中分离得到，这对阐明北柴胡茎叶解热抗炎 作用的药效物质基础有一定的意义。 【关键词】闭合性直肠损伤 闭合性直肠损伤在外科中并非少见［１，２］。近期由于医源性损伤，变态性行为和 自虐等因素导致闭合性直肠损伤发病率增高［３］。此类患者易发生感染性并发症，致残 率、致死率高。在诊治上有一定的特殊性，应予以充分重视。本文回顾分析 1998 年 1 月 至 2007 年 9 月收治的 58 例闭合性直肠损伤患者临床资料报告如下。 1 临床资料 1.1 一般资料 本组 58 例中男 43 例，女 15 例；年龄 18～76 岁，平均 32 岁；受伤至接受治疗时 间 30min～20h。致伤原因见表 1。表 158 例闭合性直肠损伤致伤原因（略）柴胡属 1.2 临床表现及诊断 患者伤后出现便血或滴血，肛门下坠感，会阴部胀痛，腹膜炎体征，腹痛进行性加重， 肝浊音界消失，移动性浊音阳性者均应怀疑有直肠损伤可能。直肠指检不一定能触及裂口， 指套可有血迹［４］。辅助检查可采用腹穿，超声,X 线摄片，CT，纤维结肠镜，肛门镜， 诊断性腹腔灌洗，剖腹探查，腹腔镜探查。包括一系列的化验也有助于诊断。本组直肠下 段损伤 22 例，直肠上段损伤 36 例，直肠全层破裂 41 例，复合伤 19 例。合并膀胱损伤 7 例，小肠损伤 5 例，颅脑外伤 5 例，骨盆骨折 12 例，肝破裂 3 例，脾破裂 7 例，休克 13 例。 1.3 治疗 本组 10 例患者直肠出血量少，无腹部症状及体征，X 线摄片无膈下游离气体，腹穿 阴性，无休克表现，考虑无直肠全层破裂予非手术治疗，禁食，胃肠减压，应用抗生素和 营养支持，密切观察病情变化，其中 1 例因病情加重转手术治疗。5 例肛门镜下发现破口， 出血量大，探查破口未穿透直肠全层，即行经肛直肠修补术。急诊剖腹探查 43 例，27 例 直肠破裂行Ⅰ期缝合修补术、5 例部分肠管切除Ⅰ期结肠Ⅰ期结肠-直肠吻合、4 例部分肠管切除Ⅰ期结肠加 乙状结肠造瘘Ⅱ期吻合［５，６］，Ⅱ期吻合［５，６］，1 例直肠癌术中见肿瘤无法切除Ⅰ期结肠乙状结肠永久造瘘Ⅱ期吻合［５，６］，、6 例修补加乙状结肠造瘘Ⅱ期吻合［５，６］，Ⅱ期吻合。 2 结果 56 例治愈，2 例死于严重复合伤。 3 讨论 近期闭合性直肠损伤患者增多，重要因素是医源性损伤，变态性行为和自虐致伤。直 肠有其特殊的解剖和生理特点，局部血供丰富，损伤引起出血量大，不易控制。直肠内容 物含大量细菌，一旦污染可致严重感染。直肠有其重要的生理功能，处理不当会给患者带 来终生的痛苦。故必须足够的重视，尽快明确诊断、及时处理。详尽的病史采集和细致的 体检以及严密的不间断的临床观察是获得准确诊断的根本保证。腹穿，超声,X 线摄片， CT，纤维结肠镜，肛门镜，诊断性腹腔灌洗有助于明确诊断。治疗方法的选择因人而异， 综合评估致伤原因、损伤程度、复合伤、基础疾病等多方面因素，在治疗过程中仍须不间 断的密切观察［７，８］，及时更正治疗方案，原则是生命第一，尽量减少患者痛苦。 某些闭合性直肠损伤是可以避免的，特别是医源性损伤［９］。在肠镜下直肠息肉摘 除Ⅰ期结肠术前，作完善的肠道准备。本组 3 例均发生于处理宽蒂息肉时，套扎太深引起肠壁穿孔， 因此在处理宽蒂息肉时不宜套扎过深、过大，避免将肠壁当成息肉蒂。术后应严密观察。 灌肠时亦可能引起直肠损伤，一个病例是由于抗生素过敏引起直肠黏膜水肿，灌肠管壁质 地较硬，插入肛门后即有少量出血，未停止操作继续灌肠引起直肠穿孔。中药灌肠减肥曾 一度较为流行，由于操作人员不够专业，灌肠液量大、压力高、反复多次也能引起直肠损 伤，建议肥胖患者避免采用这种减肥方式。消痔灵注射治疗痔疮，应采用正确的方法，适 当的浓度、剂量、准确的部位和解剖层面。一旦发现破裂迅速修补，切不可延误时机带来 更严重后果。医源性直肠损伤是操作不当、术前评估不足引起。必须充分了解患者的基础 疾病，直肠黏膜本身的病变，既往的手术史和机体的状态、耐受性。将医源性损伤的可能 性降低到最低程度。本组 4 例筷子刺入肛门致伤是由于便秘，大便干结排便困难，自己或 指使他人用筷子插入肛门企图掏出大便以致直肠损伤。各种异物刺入肛门致伤，多见于同 性恋、性虐待行为、自虐行为。遇到可疑为吸毒者，同性恋者或有自伤倾向者，询问病史 时应回避家属和其他人员，与患者单独交流，说明配合治疗的重要性和不配合的严重后果。 并且进行仔细的体检和辅助检查，尽量找出详细直接的病因。总之，闭合性直肠损伤的病 因多种多样，处理较为困难且并发症多，操作时应保持足够的谨慎。