豆叶霸王的化学成分研究论文

【摘要】目的研究豆叶霸王的化学成分，为完善和提高该常用中药的质量标准奠定良 好的物质基础。方法利用反复硅胶柱层析、SephadexLH-20 和制备 HPLC 等手段进行分 离，经光谱分析和理化常数进行鉴定。结果从该植物中分离鉴定了 7 种化学成分，其中 6 种首次从该植物分离得到。结论该研究结果具有一定的化学分类学意义，为进一步研究提 供了参考依据。 【关键词】豆叶霸王化学成分甾体皂苷黄酮 Abstract:ObjectiveTostudythechemicalconstituentsofZygophyllumfabagan ddevelopamoreefficientqualitycontrolproject.MethodsThechemicalconstituents fromzygophyllumfabagwereisolatedusingsilicalgelandSephedaxLH20colomnchromatographyandstructurallyidentifiedbymeansofvariousmoderns pectroscopictechnologiesbasedupontheirphysicalproperties.Results&Conclusio nSevencompoundswereisloatedandidentifiedfromZygolphylumfabag,inwhichsi xwereisolatedinZygolphylumfabagforthefirsttime. Keywords:Zygolphylumfabag;Chemicalconstituents;Steroidalsaponins;Flav onoids 豆叶霸王 Zygophyllumfabag 隶属于蒺藜科 Zygophyllaceae 驼蹄瓣属 ZygophyllumL.，具有祛热抗炎、降低血糖、抗高血压、止腹泻、抗菌等功效。文献调研 表明其化学成分研究未见报道，我们对其进行了较系统的化学成分研究。从该植物中低极 性分离鉴定了 7 种化学成分，它们分别是豆甾-4-烯-3-酮(stigmast-4-en-3-onestigmast-4-en-3-one）（Ⅰ)， 正二十八烷醇 n-noctacosanol(stigmast-4-en-3-oneⅡ)，正三十二烷醇(stigmast-4-en-3-oneⅢ))，胡萝卜苷（daucosterol） (stigmast-4-en-3-oneⅣ)，β-谷甾醇（β-sitosterol）(stigmast-4-en-3-oneⅤ)，紫云英苷（astragalin）(stigmast-4-en-3-oneⅥ)，3-O-［β-Dglucopyranosyl］-quinovicacid(stigmast-4-en-3-oneⅦ)。化合物Ⅰ,Ⅱ,Ⅲ),Ⅳ,Ⅴ,Ⅵ 为首次从该植物中获得。 1 仪器与试剂 Inova-600 型核磁共振仪（中国人民解放军军事医学科学院分析中心）；BrukerAM500 型核磁共振仪（微量化学研究所分析中心）ZabspecE 型质谱仪（军事医学科学院分 析中心）；BuchiR-200 型旋转蒸发仪；Buchi615 中压液相色谱仪；Waters515 型高压 液相色谱仪，Waters2996 检测器；Empower 工作站；YMCPackPh(stigmast-4-en-3-one5μmm，250mm×10mm，I．D．)半制备柱；柱层析用硅胶(stigmast-4-en-3-one100～200 与 200 ～300 目，硅胶 H)均为青岛海洋化工厂产品；聚酰胺 100～200 目为浙江省台州市路桥 三甲生化塑料厂产品。 实验所用材料豆叶霸王（全草）11.5kg 为李国强博士于 20040808 间采自我国新疆维 吾尔族自治区，全部实验材料均经李国强博士鉴定其学名，原植物或原生药凭证标本藏于 中国医学科学院药用植物标本馆（IMD），中国科学院新疆生物土壤地理研究所植物标本 馆（XJBI），新疆农业大学植物标本馆（XJA）。 2 方法与结果 2.1 提取与分离豆叶霸王 11.5kg，粉碎成粗粉，先用 95%乙醇浸泡 24h，然后用 10 倍量 95%乙醇加热回流提取 3 次，4h/次，然后再用 60%乙醇回流提取 3 次。滤过，减压 蒸干溶剂，分散于水中，分别用石油醚、氯仿、醋酸乙酯、正丁醇萃取。对低极性部分进 行了系统分离，得到了 7 个化合物。 2.2 结构鉴定 2.2.1 豆甾-4-烯-3-酮(stigmast-4-en-3-oneⅠ))白色粉末（CHCl3），mp95～96℃，分子式为 C29H48O。Libermann-Burchard 反应阳性；EIMSm/z（%）： 412（M+，21），271（11），229（32），124（100）； 1HNMR(stigmast-4-en-3-one600MHz，CDCl3)δ:5.72(stigmast-4-en-3-one1H，s，H-4)，1.18(stigmast-4-en-3-one3H，s，Me19)，0.93(stigmast-4-en-3-one3H，d，J=6.0Hz，Me-21)，0.86(stigmast-4-en-3-one3H，t，J=7.2Hz，Me29)，0.84(stigmast-4-en-3-one3H，d，J=7.8Hz，Me-26)，0.82(stigmast-4-en-3-one3H，d，J=7.8Hz，Me27)，0.73(stigmast-4-en-3-one3H，s，Me-18)；13CNMR(stigmast-4-en-3-one150MHz，CDCl3)δ:35.7(stigmast-4-en-3-oneC-1)，34.0(stigmast-4-en-3-oneC2)，199.7(stigmast-4-en-3-oneC-3)，123.7(stigmast-4-en-3-oneC-4)，171.7(stigmast-4-en-3-oneC-5)，32.9(stigmast-4-en-3-oneC-6)，32.0(stigmast-4-en-3-oneC-7)，35.6(stigmast-4-en-3-oneC8)，53.8(stigmast-4-en-3-oneC-9)，38.6(stigmast-4-en-3-oneC-10)，21.0(stigmast-4-en-3-oneC-11)，39.6(stigmast-4-en-3-oneC-12)，42.4(stigmast-4-en-3-oneC-13)，55.9(stigmast-4-en-3-oneC14)，24.2(stigmast-4-en-3-oneC-15)，28.2(stigmast-4-en-3-oneC-16)，56.0(stigmast-4-en-3-oneC-17)，12.0(stigmast-4-en-3-oneC-18)，17.4(stigmast-4-en-3-oneC-19)，36.1(stigmast-4-en-3-oneC20)，18.7(stigmast-4-en-3-oneC-21)，33.9(stigmast-4-en-3-oneC-22)，26.1(stigmast-4-en-3-oneC-23)，45.8(stigmast-4-en-3-oneC-24)，29.1(stigmast-4-en-3-oneC-25)，19.8(stigmast-4-en-3-oneC26)，19.0(stigmast-4-en-3-oneC-27)，23.1(stigmast-4-en-3-oneC-28)，11.9(stigmast-4-en-3-oneC-29)。以上数据与文献报道的豆甾-4-烯-3-酮 ［1］一致，故鉴定为豆甾-4-烯-3-酮。 2.2.2 正二十八烷醇(stigmast-4-en-3-oneⅡ)白色粉末（CHCl3），mp82～83℃，分子式为 C28H58O； EIMSm/z（%）：392（M－ H2O，1），364（1），139（8），125（15），111（28），97（55），83（57） ，69（42），57(stigmast-4-en-3-one100)，55（42）； 1HNMR(stigmast-4-en-3-one600MHz，CHCl3)δ:3.64(stigmast-4-en-3-one2H，t，J=6.6Hz，H-1)，1.57(stigmast-4-en-3-one2H，m，H2)，1.25(stigmast-4-en-3-one50H，brs，H-3～H-27)，0.88(stigmast-4-en-3-one3H，t，J=7.2Hz，H-28)； 13CNMR(stigmast-4-en-3-one150MHz，CDCl3)δ:63.1(stigmast-4-en-3-oneC-1)，31.9(stigmast-4-en-3-oneC-2)，29.7，29.6，29.5，29.4(stigmast-4-en-3-oneC-4 ～C-26)，25.7(stigmast-4-en-3-oneC-3)，22.7(stigmast-4-en-3-oneC-27)，14.1(stigmast-4-en-3-oneC-28)。以上数据与文献报道的正二十八烷醇 ［2］一致，故鉴定为正二十八烷醇。 2.2.3 正三十二烷醇(stigmast-4-en-3-oneⅢ))白色粉末（CHCl3），mp88～89℃，分子式为 C32H66O； EIMSm/z（%）：448（M－ H2O，28），420（10），392（15），364（7），139（15），125（25），111 （50），97（88），83（100），69（65），55（95）； 1HNMR(stigmast-4-en-3-one600MHz，CHCl3)δ:3.64(stigmast-4-en-3-one2H，t，J=6.6Hz，H-1)，1.57(stigmast-4-en-3-one2H，m，H2)，1.26(stigmast-4-en-3-one58H，brs，H-3～H-31)，0.88(stigmast-4-en-3-one3H，t，J=6.6Hz，H-32)； 13CNMR(stigmast-4-en-3-one150MHz，CDCl3)δ:63.1(stigmast-4-en-3-oneC-1)，31.9(stigmast-4-en-3-oneC-2)，29.7，29.6，29.5，29.4(stigmast-4-en-3-oneC-4 ～C-30)，25.7(stigmast-4-en-3-oneC-3)，22.7(stigmast-4-en-3-oneC-31)，14.1(stigmast-4-en-3-oneC-32)。以上数据与文献报道的正三十二烷醇 ［3］一致，故鉴定为正三十二烷醇。 2.2.4 胡萝卜苷（Ⅳ）白色无定形粉末，mp295～297℃，难溶于氯仿、甲醇， Liebermann-Burchard 反应和 Molish 反应均为阳性；EI-MS（m/z）：414（M+，Mglc，13），396（100），397(stigmast-4-en-3-one85)，381（17），329（8），303（10），255（2 0），213（18），145（25），81（22），69（20）。与胡萝卜苷对照品混合熔点不 下降，薄层层析 Rf 值。 2.2.5β-谷甾醇（Ⅴ）白色针状结晶，mp140～141℃，Liebermann-Burchard 反 应为阳性；EI-MS（m/z）： 414（M+，100），396（50），381（38），329（40），303（55），255（40） ，213（43），145（45），81（45），69（35）。与 β-谷甾醇对照品混合熔点不下 降，薄层层析 Rf 值与 β-谷甾醇一致。 2.2.6 紫云英苷(stigmast-4-en-3-oneⅥ)黄色针状结晶，mp170～171℃，盐酸镁粉反应阳性； 1HNMR(stigmast-4-en-3-one400MHz，MeOD)δ:8.00(stigmast-4-en-3-one2H，d，J=8.8Hz，H2′，6′)，6.83(stigmast-4-en-3-one2H，d，J=8.8Hz，H-3′，6′)，6.56(stigmast-4-en-3-one1H，d，J=1.2Hz，H8)，6.29(stigmast-4-en-3-one1H，d，J=1.2Hz，H-6)，5.20(stigmast-4-en-3-one1H，d，J=6.8Hz，H-1"))，3.16～ 3.71(stigmast-4-en-3-one6H，m，H-2")～6"))；13CNMR(stigmast-4-en-3-one100MHz，MeOD)δ:156.9(stigmast-4-en-3-oneC-2)，133.9(stigmast-4-en-3-oneC3)，177.9(stigmast-4-en-3-oneC-4)，161.5(stigmast-4-en-3-oneC-5)，98.4(stigmast-4-en-3-oneC-6)，164.6(stigmast-4-en-3-oneC-7)，93.3(stigmast-4-en-3-oneC-8)，157.5(stigmast-4-en-3-oneC9)，104.1(stigmast-4-en-3-oneC-10)，121.2(stigmast-4-en-3-oneC-1′)，130.7(stigmast-4-en-3-oneC-2′，6′)，160.0(stigmast-4-en-3-oneC-4′)，114.4(stigmast-4-en-3-oneC3′，5′)，102.6(stigmast-4-en-3-oneC-1"))，74.2(stigmast-4-en-3-oneC-2"))，76.5(stigmast-4-en-3-oneC-3"))，69.8(stigmast-4-en-3-oneC-4"))，76.9(stigmast-4-en-3-oneC-5"))，61.1(stigmast-4-en-3-oneC6"))。以上数据与文献报道的紫云英苷［4］一致，故鉴定为紫云英苷。 2.2.73-O-［β-D-glucopyranosyl］-quinovicacid(stigmast-4-en-3-oneⅦ)白色粉末，mp266～ 268℃，分子式：C36H56O10，Liebermann-Burchard 反应和 Molish 反应均为阳性， 薄层酸水解检测含有葡萄糖；FAB-MSm/z：649［M+1］+，671［M+Na］+； 1HNMR(stigmast-4-en-3-one400MHz，pyridine-d5)δ:5.99(stigmast-4-en-3-one1H，m，H-12)，1.12(stigmast-4-en-3-one3H，s，H23)，0.94(stigmast-4-en-3-one3H，s，H-24)，0.83(stigmast-4-en-3-one3H，s，H-25)，1.08(stigmast-4-en-3-one3H，s，H26)，1.21(stigmast-4-en-3-one3H，d，J=6Hz，H-29)，0.79(stigmast-4-en-3-one3H，d，J=6.4Hz，H30)，4.77(stigmast-4-en-3-one1H，d，J=7.6Hz，H-1′)；13CNMR(stigmast-4-en-3-one100MHz，pyridine-d5)δ:40.6(stigmast-4-en-3-oneC1)，28.0(stigmast-4-en-3-oneC-2)，90.0(stigmast-4-en-3-oneC-3)，41.3(stigmast-4-en-3-oneC-4)，57.0(stigmast-4-en-3-oneC-5)，19.9(stigmast-4-en-3-oneC-6)，38.2(stigmast-4-en-3-oneC7)，40.7(stigmast-4-en-3-oneC-8)，48.4(stigmast-4-en-3-oneC-9)，38.8(stigmast-4-en-3-oneC-10)，24.6(stigmast-4-en-3-oneC-11)，130.2(stigmast-4-en-3-oneC-12)，135.4(stigmast-4-en-3-oneC13)，58.1(stigmast-4-en-3-oneC-14)，27.7(stigmast-4-en-3-oneC-15)，26.8(stigmast-4-en-3-oneC-16)，50.0(stigmast-4-en-3-oneC-17)，56.2(stigmast-4-en-3-oneC-18)，39.0(stigmast-4-en-3-oneC19)，40.3(stigmast-4-en-3-oneC-20)，31.9(stigmast-4-en-3-oneC-21)，38.4(stigmast-4-en-3-oneC-22)，29.3(stigmast-4-en-3-oneC-23)，18.4(stigmast-4-en-3-oneC-24)，17.8(stigmast-4-en-3-oneC25)，20.2(stigmast-4-en-3-oneC-26)，181.3(stigmast-4-en-3-oneC-27)，179.3(stigmast-4-en-3-oneC-28)，19.5(stigmast-4-en-3-oneC-29)，22.6(stigmast-4-en-3-oneC30)，108.2(stigmast-4-en-3-oneC-1′)，77.0(stigmast-4-en-3-oneC-2′)，79.5(stigmast-4-en-3-oneC-3′)，73.1(stigmast-4-en-3-oneC-4′)，80.0(stigmast-4-en-3-oneC-5′)，64.4(stigmast-4-en-3-oneC-6′)。 以上数据与文献报道的 3-O-［β-D-glucopyranosyl］quinovicacid［5］一致，故鉴定 为 3-O-［β-D-glucopyranosyl］-quinovicacid。 3 讨论 前期的文献工作表明皂苷类和黄酮类化合物是驼蹄瓣属植物特征化学成分，我们的研 究结果也表明了这一点，具有一定的化学分类学意义，为将来进一步的研究该类植物提供 了一定参考价值。 【摘要】介绍了近十年来，卷丹和百合化学成分和提取方法方面的研究进展，主要集 中在甾体皂苷、多糖和秋水仙碱；甾体皂苷的提取方法有醇提—大孔树脂吸附法、醇提— 正丁醇萃取法；多糖的提取方法有水提醇沉法和复合酶法；秋水仙碱的提取方法有有机溶 剂提取法和超临界二氧化碳流体萃取法。 【关键词】卷丹百合成分提取 Abstract： ThisarticleintroducedtheresearchadvancementofLiliumlancifoliumThunb.andL. browniiF.E.BrownVar.viridulumBakerchemicalcompositionsandtheextractionm ethodinrecenttenyears,mainlyconcentratedinthesteroidsaponin,thepolysaccha rideandthecolchicine,thesteroidsaponinextractionhasethanolextract- thepocketresinabsorptionlawandethanolextractionthenormalbutylalcoholextractionmethod;thepolysaccharideextractionhaswater extractandethanoltosink,thecompoundenzymelaw;thecolchicineextractionhast heorganicsolventextractionprocessandthesupercriticalcarbondioxidefluidextra ctionmethod. Keywords： LiliumlancifoliumThunb.;L.browniiF.E.BrownVar.viridulumBaker;Ingredient;Extr action 中药百合来源于植物卷丹 LiliumlancifoliumThunb.百合 L.browniiF.E.BrownVar.viridulumBaker 和细叶百合 L.pumilumDC.的干燥肉质鳞叶， 最早记载于《神农本草经》，细叶百合主要分布于东北，野生为主，市场少见。卷丹和百 合在全国分布较广，在长江流域广为栽培，为百合药材的主要来源。其主要成分有皂苷类、 多糖、生物碱、微量元素及蛋白质、磷脂、无机元素等。研究表明，百合在止咳化痰、抗 疲劳与耐缺氧、升高外周白细胞、降血糖及抑制迟发过敏性反应、催眠安神等方面均具有 显著效果。 1 化学成分 1.1 皂苷类 近几年来百合皂苷的研究主要集中于甾体皂苷，侯秀云等［1］从百合中分离得到 β谷甾醇(stigmast-4-en-3-oneⅠ))、胡萝卜苷(stigmast-4-en-3-oneⅡ)、正丁基-β-D-吡喃果苷(stigmast-4-en-3-oneⅢ))、26-O-β-D-吡喃葡萄糖 3β，26-二羟 基-5-胆甾烯-l6，22-二氧 3-O-α-L-吡喃鼠李糖-(stigmast-4-en-3-one1→2)-β-D-吡喃葡萄糖苷(stigmast-4-en-3-oneⅣ)、26-O-βD-吡喃葡萄糖 3β，26-二羟基胆甾烷-16，22-二氧-3-O-α-L-吡喃鼠李糖-(stigmast-4-en-3-one1→2)-β-D-吡 喃葡萄糖苷(stigmast-4-en-3-oneⅤ)［2］。其中Ⅳ和Ⅴ为新化台物，初步药理实验证明，这两种皂苷对二氧化 硫引起的小鼠咳嗽有镇咳作用［2］。Ⅰ，Ⅱ和Ⅲ为首次从该植物中分得。吉宏武等和Ⅲ为首次从该植物中分得。吉宏武等为首次从该植物中分得。吉宏武等 ［3,4］以卷丹鳞茎为原料，通过光谱与 HPLC 等手段鉴定百合皂苷有两种，一种为含有 提果皂苷元与 3 个糖基的甾体皂苷，一种为含有薯蓣皂苷元与 3 个糖基的甾体皂苷。吴晓 斌等［5］以龙山百合为原料，发现百合皂苷与薯蓣皂苷有相同的薯蓣皂苷元。百合总皂 苷提取物对自由基的清除作用比人参皂苷强［6］。杨秀伟等［7］分离并鉴定卷丹中两种 甾体皂苷，麦冬皂苷 D(stigmast-4-en-3-oneophipogoninD)，其结构为薯蓣皂苷元-3-O-﹛O-α-L-O-α-L-鼠李糖基(stigmast-4-en-3-one1→2)-O-［β-D-木糖基(stigmast-4-en-3-one1→3)］-β-D-葡萄糖苷﹜，另一化合物为薯蓣皂苷元-3-O-﹛O-α-L-Oα-L-鼠李糖基-(stigmast-4-en-3-one1→2)-O-［α-L-阿拉伯糖基(stigmast-4-en-3-one1→3)］-β-D-葡萄糖苷﹜，经鉴定是一种新的 化合物，定名为卷丹皂苷 A(stigmast-4-en-3-one1ililancifolosideA)。 1.2 多糖类姜茹等［8］ 从百合鳞叶中首次分离出一种水溶性多糖 BHP，酸水解，薄层展开进行多糖组分分析， 呈现 D-半乳糖、L-阿拉伯糖、D-甘露糖、D-葡萄糖、L-鼠李糖等斑点。该多糖作用于机体 免疫系统，对小鼠免疫功能有明显的调理作用。刘成梅等［9，10］从新鲜百合的鳞叶中， 分离得到 LP1，LP2 两种多糖，在多糖的组分分析中 LP1 由葡萄糖、甘露糖组成，比例为 1∶2.46，LP2 由葡萄糖、甘露糖、阿拉伯糖、半乳糖醛酸组成，比例为 1∶0.73： 2.61∶1.8∶0.84。这两种多糖单体对四氧嘧啶引起的高血糖小鼠有明显的降血糖功能，并 且与浓度呈正相关。百合多糖 LP2 降血糖作用强于百合多糖 LP1。赵国华等［11］从百合 块茎中分离得到 LBPS-I 多糖，是一种纯粹的非淀粉类葡聚糖，是由 α-D-(stigmast-4-en-3-one1,4)-Glcp 和 α- D-(stigmast-4-en-3-one1,3)-Glcp 以 2∶1 的比例交替形成主链，并有 α-D-(stigmast-4-en-3-one1,6)-Glcp 侧链的葡聚糖。该多糖 单体对移植性黑色素 B16 和 Lewis 肺癌有较强的抑制作用。ManalMShehata 等［12］ 从百合中分离得到百合水溶性非淀粉多糖(stigmast-4-en-3-oneWSNSP)。体外实验结果表明，百合球茎中 WSNSP 组分 B 可以直接抑制肿瘤细胞的生长；体内实验结果表明，WSNSP 组分 B 具有 抗癌功效，可以抑制小鼠 S180 肉瘤增殖，抑瘤率在 45.68%以上。 1.3 生物碱类百合中生物碱研究早在 20 世纪 60 年代就有报道，主要集中在秋水仙碱。 贺世洪等［13］利用极谱法，采用二阶导数直接测定其中秋水仙碱的含量，达 0.0064%。何纯莲、李新社等［14，15］采用超临界萃取法和高效液相测得湖南龙山产 卷丹鳞片中秋水仙碱含量。百合中秋水仙碱，能抑制癌细胞的增殖，尤其对乳癌的抑制效 果比较好［16］。 2 提取 2.1 皂苷及其苷元类 2.1.1 皂苷类甾体皂苷的提取分离有 3 种方法：醇提—大孔树脂吸附法、醇提—正丁 醇萃取法和色谱法。吴晓斌、任凤莲等［5，17］分别讨论了温度、乙醇用量、回流时间 和提取次数对百合总皂苷提取率的影响。采用正交实验法得出了百合总皂苷的最佳提取条 件为：用 80%乙醇(stigmast-4-en-3-one其体积为百合质量的 6 倍)，在 70℃回流提取 3 次，3h/次。吴晓斌等 ［5］考虑百合总皂苷的含量和工业中的实际生产情况，确定最佳提取条件为 6 倍于药材 量的乙醇（浓度为 70%），在 60℃提取 3 次，3h/次。用 AB-8 大孔吸附树脂柱分离，无 水乙醇、丙酮-乙醚混合液沉淀干燥得百合皂苷，得率为 0.253%。吉宏武等［18］采用 微波处理卷丹百合，烘至含水量 6%左右粉成 80 目。选用甲醇为提取剂，采用超声波提取 和水饱和正丁醇萃取百合中总皂苷，所建立的方法具有干扰小、准确度高、分析速度快等 优点，抽提皂苷完全、适合于大量试样的分析。 2.1.2 皂苷元甾体皂苷元的提取有醇提酸水解—有机溶剂提取法、酸或酶水解—有机 溶剂提取法。百合中甾体皂苷元的提取采用的是前者，百合皂苷经酸水解，乙醚萃取，氮 气吹干，即得甾体皂苷元［3，4，19］。 2.2 百合多糖 2.2.1 水提醇沉法刘成梅等［20］以浸提温度、固液比、浸提时间为考察对象，进行 正交实验，发现对百合多糖提取率影响程度为：温度>时间>固液比，确定百合多糖浸提 最佳工艺参数：浸提温度 95℃，时间 2h，固液比 1：5。去蛋白采用酶-Seveag 联用法， 沉淀多糖。滕利荣等［21］分别就提取时间、溶剂体积、浸提温度进行单因素实验，发现 热水提取百合多糖的最佳条件为：加水比 70：1，浸提时间 6h，浸提温度 60℃，在此条 件下提取率可达 10.87%。Sevag 试剂离心除蛋白质，测定多糖含量。杨林莎等 ［22，23］讨论提取时间、提取次数、溶剂体积、浸提温度等因素对多糖得率的影响，采 用正交实验法进行优选。影响百合多糖提取的主次顺序为温度>溶剂体积>浸提次数>浸提 时间，最佳工艺为温浸温度 80℃，但考虑到多糖解聚及淀粉糊化、变性，浸提温度设为 65℃，溶剂体积 l5 倍量，浸提 3 次，浸提时间 4h。Sevag 法除蛋白，以多糖得率为指标， 采取正交实验法探讨 Sevag 法中的氯仿与正丁醇的配比及与样品体积的比例关系，最佳工 艺为氯仿-正丁醇体积比为 3：1，样品-氯仿正丁醇体积比为 5：2，振摇时间 10min。测 定多糖得率为 5.2%。杨华等［24］用三氯三氟乙烷与 seveage 法联用脱蛋白，得百合