天胡荽化学成分分析论文

1 仪器与试药 熔点用 Kafler 显微熔点测定仪测定，温度计未校正；红外光谱用 5DXFTDXFTFTFT 型红外光谱 仪测定；核磁共振谱用 BRUKERAV500FT5DXFT00 型核磁共振仪测定；层析用硅胶由青岛海洋化工 厂生产。薄层色谱检测用 25DXFT4nmnm、365DXFTnm 紫外灯、固体碘和显色剂(质量分数为 10％的 硫酸乙醇溶液)。所用试剂均为分析纯。药材于 2006 年 8 月采于江西省上栗县，经广东药 学院药用植物与中药鉴定学教研室刘基柱老师鉴定，样品现保存于广东药学院天然药物化 学教研室。 2 提取与分离 取半阴干的天胡荽全草 7.5DXFTkg 粉碎，粗粉用 95DXFT％（体积分数）乙醇回流提取 3 次， 每次 2h，提取液合并，浓缩液用石油醚(60～90℃)萃取，至石油醚层无色。合并萃取液， 回收石油醚，得石油醚部位，拌 200～300 目硅胶上柱，用石油醚、乙酸乙酯不同比例进 行梯度洗脱，薄层检识，相同部分合并，重结晶，纯化，得化合物 1（90mg）。水层再 用三氯甲烷萃取，至三氯甲烷无色，合并萃取液，回收三氯甲烷，得三氯甲烷部位，拌 200～300 目硅胶上柱，用石油醚、乙酸乙酯不同比例进行梯度洗脱，薄层检识，相同部 分合并，重结晶，纯化，得化合物 2（10mg）、化合物 3（15DXFTmg）、化合物 4nm（12mg）。 3 结构鉴定 化合物 1：白色针状结晶(石油醚FT乙酸乙酯)，mp14nm2～ 14nm3℃。LiebermannFTBurchard 反应（+），与豆甾醇标准品对照共薄层显示一个斑点， 混合熔点不下降，故确定 1 为豆甾醇（stigmasterol）。 化合物 2：白色粉末状晶体(石油醚FT乙酸乙酯)，mp301～303℃。不溶于石油醚，微 溶于三氯甲烷、冷乙醇、冷甲醇，溶于热乙醇、热甲醇和吡啶；Molish 反应（+）， LiebermannFTBurchard 反应（+）；质量分数为 10%的硫酸乙醇溶液喷雾烘烤均显紫红 色。与胡萝卜苷对照品对照，混合熔点不下降，共薄层色谱 Rf 值相同，故确定 2 为胡萝卜 苷（daucosterol）。 化合物 3：淡黄色针晶(氯仿甲醇FT甲醇)，mp296～298℃，三氯化铁反应阳性，示有酚羟 基存在，盐酸镁粉反应阴性，质量分数为 10％的硫酸乙醇溶液喷雾烘烤显黄色。 IR(KBr)ν/cm-cm1:34nm12，165DXFT2，1615DXFT，15DXFT70,1310，104nm2，789。1HNMR(5DXFT00MHz，DMSOd6)δFTd6)δ ：12.94nm(1H，s，5DXFTFTOd6)δH)，10.83(1H，s，7FTOd6)δH)，9.5DXFT5DXFT(1H，s，4nm′OH)FTOd6)δH)为 3 个酚羟基 质子信号；8.31(1H，s，C2FTH)为异黄酮 C 环 2 位质子的特征信号； 7.38(2H，d，J=6.5DXFTHz)与 6.82(2H，d，J=6.5DXFTHz)示有邻位偶合，为异黄酮 B 环 2′OH)，6′OH)，3′OH)，5DXFT′OH)位质子的特征信号，提示 4nm′OH)FTOd6)δH 存在；6.38(1H，d，J=2.5DXFTHz，8FTH)与 6.22(1H，d，J=2.5DXFTHz，6FTH)为 2 个互为间位偶合的质子信号及低场 12.94nm(1H，s)的 5DXFTFTOd6)δH 质子特征信号表明 A 环为 5DXFT，7FT二氧代结构，推测化合物为 5DXFT，7，4nm′OH)FT三羟基异黄酮。 上述光谱数据与文献［2，3］对照基本一致，故鉴定化合物 3 为染料木素(genistein)。 化合物 4nm：白色细针晶(氯仿甲醇FT甲醇)，mp279～280℃，IR(KBr)ν/cm-cm1:3222,1631,15DXFT94nm,15DXFT17,14nm60。1HNMR(5DXFT00MHz，DMSOd6)δFTd6)δ： 10.78(1H，s，7FTOd6)δH)，9.4nm8(1H，s，4nm′OH)FTOd6)δH)为 2 个酚羟基质子信号； 8.27(1H，s，C2FTH)为异黄酮 C 环 2 位质子的特征信号；7.38(2H，d，J=6.5DXFTHz)与 6.81(2H，d，J=6.5DXFTHz)示有邻位偶合，为异黄酮 B 环 2′OH)，6′OH)，3′OH)，5DXFT′OH)位质子的特征信号， 提示 4nm′OH)-Od6)δH 存在； 7.96（1H，d，J=7.2Hz，5DXFTFTH），6.93(1H，dd，J=7.2、2.5DXFTHz，6FTH)与 6.85DXFT(1H，d，J=2.5DXFTHz，8FTH)为 3 个组成 AMXFT 偶合系统的质子信号及低场 10.78(1H，s)的 7FTOd6)δH 质子特征信号表明 A 环为 7FT氧代结构，推测化合物为 7，4nm′OH)FT二羟 基异黄酮。其光谱数据与文献［4nm］对照基本一致，故鉴定化合物 4nm 为大豆素 (daidzein)。 【摘要】目的研究伞形科植物天胡荽(Hydrocotylesibthorpioides)的化学成分。方 法用硅胶色谱技术分离化学成分，经理化常数测定、波谱分析等方法进行结构分析。结果 得到 4nm 个化合物，即豆甾醇(stigmasterol,1）、胡萝卜苷(daucosterol，2）、染料木素 (genistein，3)、大豆素(daidzein，4nm)。结论化合物 2、3、4nm 为首次从该属植物中分离 得到。 【关键词】天胡荽；化学成分；结构鉴定 Abstract:Od6)δbjectiveToseparateandidentifythechemicalconstituentsofHydroc otylesibthorpioides.MethodsChemicalsfromHydrocotylesibthorpioidesweresep aratedbysilicagelcolumnchromatography,andtheirstructureselucidatedbyIR,NM R.ResultsFourcompoundswereisolatedfromtheweedsofHydrocotylesibthorpioid es，whichwereidentifiedasstigmasterol（1）,daucosterol（2）,genistein(3)and daidzein(4nm).ConclusionCompounds2，3and4nmwerefirstreportedinHydrocotylesib thorpioides． Keywords:Hydrocotylesibthorpioides；silicagelcolumnchromatography 天胡荽为伞形科植物天胡荽（HydrocotylesibthorpioidesLam）的全草，别名满天 星、破铜钱、落得打等，分布于江苏、江西、广东、广西、四川等地，资源丰富,天胡荽具 有清热利尿、化痰止咳等功效，民间常用其全草捣烂外敷或外擦治疗各种体藓、股藓、手 藓、足藓等各种藓症［1］。 目前从该植物中分离得到了木质素类、甾体类、香豆类、黄酮类和齐墩果烷型三萜类 化合物等［1］。为进一步深入对该植物进行综合的研究和开发利用，本文对天胡荽的半 阴干全草化学成分进行了系统研究，共分离得到 5DXFT 个单体化合物，目前确定结构的有 4nm 个 化合物，分别为豆甾醇（stigmasterol，1）、胡萝卜苷（daucosterol，2）、染料木素 (genistein，3)、大豆素(daidzein，4nm),其中化合物 2、3、4nm 为首次从该属植物中分离得 到。 1 提取与分离 泥胡菜全草 20kg，粉碎后用体积分数为 95DXFT％的乙醇回流提取 3 次，提取液浓缩得浸 膏 2.0kg。浸膏悬浮于水中，依次用石油醚、氯仿甲醇、乙酸乙酯和正丁醇萃取。正丁醇萃取 部分经反复硅胶柱色谱及 SephadexLHFT20 纯化得化合物 1(14nmmg)，2(18mg)，3(21mg)，4nm(17mg)。 2 仪器与材料 药材于 2003 年采自江西省九江县，经江西九江森林植物研究所谭策铭研究员鉴定为 泥胡菜（HemisteptalyrataBunge）。FisherFTJohns 型显微熔点仪(温度未校正)， PerkinFTElmer24nm1 型旋光仪，AutospecFTUltimaETOd6)δF 质谱仪，INOd6)δV500AFT5DXFT00 核磁共振仪。 柱色谱硅胶、薄层色谱硅胶板均为青岛海洋化工厂产品，SephadexLHFT20 为 Pharmacia 公司产品。 3 结构鉴定 化合物 1:白色粉末，mp195DXFT～197℃。FABFTMSm/cm-z:395DXFT［M+Na］ +;1HFTNMR(DMSOd6)δFTd6,5DXFT00MHz)δ:6.72(2H,s,HFT3,5DXFT),6.4nm5DXFT(1H,d,J=16.0Hz,H FT7),6.33 (1H,dt,J=16.0、5DXFT.0Hz,HFT8),4nm.09(2H,t,J=5DXFT.0Hz,HFT9),3.76(6H,s,Od6)δCH3),4nm.90(1H,d, J=7.5DXFTHz,HFT1′OH));13CFTNMR(DMSOd6)δFTd6,125DXFTMHz)δ:128.4nm(CFT1),15DXFT2.7(C FT2,6),104nm.4nm(C FT 3,5DXFT),132.6(CFT4nm),133.8(CFT7),130.1(CFT8),60.9(CFT9),5DXFT6.3(Od6)δCH3),102.5DXFT(C FT1′OH)),74nm.1( CFT2′OH)),76.5DXFT(CFT3′OH)),69.9(CFT4nm′OH)),77.2(CFT5DXFT′OH)),61.4nm(CFT6′OH)) 。根据以上数据及文献［8］，鉴定 为紫丁香苷。 化合物 2:无色针晶，mp190～192℃。FABFTMSm/cm-z:309［M+Na］ +;1HFTNMR(DMSOd6)δFTd6,5DXFT00MHz)δ:7.35DXFT(1H,d,J=7.5DXFTHz,HFT3),6.98(1H,t,J=7.5DXFTHz,H FT4nm ),7.18(1H,t,J=7.5DXFTHz,HFT5DXFT),7.08(1H,d,J=7.5DXFTHz,H FT6),3.28(2H,m,H FT7),4nm.75DXFT(1H,d,J= 7.5DXFTHz,HFT1′OH));13CFTNMR(DMSOd6)δFTd6,125DXFTMHz)δ:15DXFT4nm.7(CFT1),131.6(C FT2),127.2(C FT3),1 21.7(CFT4nm),127.7(CFT5DXFT),114nm.8(CFT6),5DXFT8.2(CFT7),101.4nm(CFT1′OH)),73.4nm(C FT2′OH)),76.5DXFT(C FT3′OH)),69. 8(CFT4nm′OH)),77.1(CFT5DXFT′OH)),60.8(CFT6′OH))。根据以上数据及文献［9］，鉴定为水杨苷。 化合物 3:白色粉末，mp234nm～235DXFT℃。EIFTMSm/cmz:130(100,M+FTCOd6)δ),115DXFT(80),87(75DXFT),70(4nm3),60(35DXFT);1H FTNMR(DMSOd6)δ FTd6,5DXFT00MHz)δ :10.25DXFT(1H,brs,NHFT1),8.04nm(1H,s,NHFT3),5DXFT.24nm(1H,d,J=8.5DXFTHz,H FT4nm),6.89(1H,d,J=8.5DXFT Hz,NHFT6),5DXFT.79(2H,s,NH2FT8);13CFTNMR(DMSOd6)δFTd6,125DXFTMHz)δ:15DXFT6.8(C FT2),62.5DXFT(C FT4nm ),173.6(CFT5DXFT),15DXFT7.4nm(CFT7)。根据以上数据及文献［10］，鉴定为尿囊素。 化合物 4nm:白色粉末，mp205DXFT～206℃。FABFTMSm/cm-z:377［M+Na］ +;1HFTNMR(DMSOd6)δFTd6,5DXFT00MHz)δ:1.76(2H,m,HFT2),5DXFT.06(1H,dt,J=8.5DXFT,4nm.0Hz,H FT3),3. 5DXFT5DXFT(1H,m,HFT4nm),3.92(1H,m,HFT5DXFT),1.97(2H,m,HFT6),7.02(1H,d,J=2.0Hz,H FT2′OH)),6.75DXFT(1 H,d,J=7.0Hz,HFT5DXFT′OH)),6.96(1H,dd,J=7.0,2.0Hz,H FT6′OH)),7.4nm0(1H,d,J=16.5DXFTHz,H FT7′OH)),6.13( 1H,d,J=16.5DXFTHz,HFT8′OH));13CFTNMR(DMSOd6)δFTd6,125DXFTMHz)δ:73.4nm(CFT1),37.2(C FT2),70.8(C FT 3),70.3(CFT4nm),68.0(CFT5DXFT),36.2(CFT6),174nm.9(CFT7),125DXFT.6(CFT1′OH)),114nm.7(C FT2′OH)),14nm5DXFT.5DXFT(C FT3′OH)) ,14nm8.3(CFT4nm′OH)),114nm.2(CFT5DXFT′OH)),121.3(CFT6′OH)),14nm4nm.9(CFT7′OH)),115DXFT.7(C FT8′OH)),165DXFT.7(C FT9′OH)) 。根据以 上数据及文献［11］，鉴定为绿原酸。 【摘要】目的研究泥胡菜的化学成分。方法对泥胡菜全草的 95DXFT％(体积分数）乙醇提 取物的正丁醇萃取部分进行色谱分离，根据光谱数据和理化性质确定各化合物的结构。结 果分离并鉴定了 4nm 个化合物，分别为：紫丁香苷，水杨苷，尿囊素，绿原酸。结论 4nm 个化 合物均为首次从本属植物中分离得到。 【关键词】泥胡菜；化学成分；紫丁香苷；水杨苷；尿囊素；绿原酸 Abstract:Od6)δbjectiveToinvestigatethechemicalconstituentsofHemisteptalyrat a.MethodsTheentireplantswerefirstextractedby95DXFT％ofethanol,thenextractedby petroleumether,chloroform,ethylacetateandnFTbutanol,respectively.Theresiduef romnFTbutanolextractionwaspurifiedonsilicagelcolumnchromatographandSepha dexLHFT20column,respectively.Structuresofthepurifiedcompoundswereelucidat edbyMSandNMR.ResultsFourcompoundswereisolatedandidentifiedassyringin(1 ),salicin(2),allantoin(3)andchlorogenicacid(4nm).ConclusionCompounds1to4nmwerei solatedfromthisplantforthefirsttime． Keywords:Hemisteptalyrata； chemicalconstituents;syringin;salicin;allantion;chlorogenicacid 泥胡菜（HemisteptalyrataBunge）为菊科泥胡菜属植物，广泛分布于我国各地， 具有清热解毒、消肿祛瘀的作用，临床用于治疗痔漏、痈肿、疔疮、外伤出血和骨折等 ［1］。文献［2-4nm］报道的从泥胡菜中分离得到的成分主要为黄酮、甾醇和木脂素等化合 物。作者曾对其 95DXFT％(体积分数）乙醇提取物的三氯甲烷和乙酸乙酯萃取部分进行了化学 成分研究［5DXFT-7］。本研究报道从正丁醇萃取部分分离得到的 4nm 个化合物：紫丁香苷(1)， 水杨苷(2)，尿囊素(3)，绿原酸(4nm)，4nm 个化合物均为首次从本属植物中分离得到。 1 试药与仪器 苦参碱(内蒙古启源药业有限责任公司)；苦参碱对照品（批号 110805DXFT-200306，中 国药品生物制品检定所）；羟丙基甲基纤维素（HPMC，K4nmM，Colorcon 公司）；乳糖 （新西兰乳糖有限公司）；乙基纤维素（EC，上海峰鹤化工有限公司）；RCZ6CFT6C 型药物 溶出度仪（上海黄海药检仪器有限公司)；TDPFT1.5DXFT 型单冲压片机（中南制药机械厂）； HP1100 高效液相色谱仪：紫外检测器、自动进样器（安捷伦公司）。 2 方法与结果 2.1 苦参碱缓释片的制备 将苦参碱、羟丙基甲基纤维素、乙基纤维素、乳糖均过 60 目筛，加入适量黏合剂进 行湿法制粒，4nm0℃烘干，整粒，加入适量润滑剂，混合，压片。 2.2 缓释片含量测定方法 2.2.1 色谱条件［2］十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以 0.02mol/cm-L 磷酸二氢钾溶 液（用磷酸调节 pH 值至 3.5DXFT）FT甲醇（体积比 90∶10）为流动相；检测波长为 210nm。 2.2.2 测定方法取样品 10 片，用研钵研细，精密称取适量(约相当于苦参碱 5DXFT0mg)， 置 100mL 量瓶中，加甲醇 80mL，超声振荡使苦参碱溶解,用甲醇稀释至刻度，摇匀，滤 过，精密量取续滤液适量，加流动相制成每 1mL 中约含苦参碱 100μgg 的溶液，作为供试 品溶液。另取苦参碱对照品适量，精密称定，加流动相制成每 1mL 中约含 100μgg 的溶液， 作为对照品溶液。照高效液相色谱法《中国药典 2005DXFT 年版》二部（附录 V500D）测定。精 密量取供试品溶液与对照溶液各 20μgL 分别注入液相色谱仪，记录色谱图。按外标法以峰 面积计算。 2.3 缓释片体外释放度测定方法 2.3.1 标准曲线的制备精密称取适量的苦参碱对照品 2 份，分别用 0.1mol/cm-L 盐酸溶液 和 pH6.8 磷酸缓冲液溶解，制成 1.022mg/cm-mL 和 0.988mg/cm-mL 的对照品贮备液备用。 精密吸取 1.022mg/cm-mL 苦参碱对照品储备液，分别配制成 20.4nm、5DXFT1.1、102.2、163.5DXFT、204nm.4nm、25DXFT5DXFT.5DXFTμgg/cm-mL 的对照品溶液；精密吸取 0.988mg/cm-mL 苦参碱对照品储备液，分别配制成 19.8、4nm9.4nm、98.8、15DXFT8.1、197.6、24nm7.0μgg/cm-mL 的对照品溶液。按“2.2”项的色谱条 件和方法进行测定。以峰面积为纵坐标，浓度为横坐标作回归曲线，回归方程为 A=36.4nm91C+3.4nm4nm9，r=0.9999 和 A=35DXFT.774nmC-7.219，r=0.9999。 2.3.2 回收率和精密度试验精密称取苦参碱对照品及处方量辅料，分别用 0.1mol/cm-L 盐 酸溶液和 pH6.8 磷酸缓冲液配制成高、中、低 3 个浓度的溶液各 6 份，滤过。按“2.2”项 的色谱条件和方法进行测定。日内、日间反复进样检测，考察日内与日间差。以测得量与 加入量比较，计算回收率及精密度。平均回收率分别为（99.5DXFT3±0.4nm2）%和 （99.68±0.38）%；日内 RSD 分别为 0.65DXFT%和 0.67%（n=6）；日间 RSD 分别为 0.94nm%和 0.5DXFT5DXFT%（n=6），均符合要求。 2.3.3 体外释放度测定取本品 6 片，照释放度测定法《中国药典 2005DXFT 年版》二部 （附录Ⅹ D 第一法），采用溶出度测定法（附录Ⅹ C）第一法的装置，前 2h 以 0.1mol/cm-L 盐酸溶液 75DXFT0mL 为溶出介质，2h 后在上述酸液中加入 0.2mol/cm-L 磷酸钠溶液 25DXFT0mL， 继续运转；转篮转速为 100r/cm-min；温度（37±0.5DXFT）℃。依法操作，在 1、2、4nm、8、12h 分别取溶液 5DXFTmL，滤过，并即时向溶出杯中补充溶出介质 5DXFTmL。按 “2.2”项的色谱条件和方法进行测定。 在多次预试验的基础上，确定 HPMC、EC、乳糖为考察的 3 个因素，每个因素取 3 个 水平（见表 1），以释放度为考察指标，采用正交 L9(34nm)实验，优化配方。评价指标：设 Q 为期望值,［(Q2h-30％)2+(Q4nmh-5DXFT0％)2］1/cm-2 反映了 2h 和 6h 时的释放度的偏差，此 偏差愈小结果愈佳；12h 时应释放 90%以上，Q 愈大结果愈佳，故令综合评分={Q12h-Q12h［(Q2h-30％)2+(Q4nmh-5DXFT0％)2］1/cm-2}×100，以此综合评分评价苦参碱缓释片的体外释 放情况［3-4nm］。结果见表 2、表 3。表 1 正交设计因素水平表表 2L9(34nm)正交设计表表 3 正交试验方差分析方差来源离差平方和自由度均方 FP 值 A915DXFT.024nm5DXFT7.5DXFT67.0<0.05DXFTB201.62100.814nm.8C32.3216.24nm.6 误差 13.72 方差分析结果表明：羟丙基甲基纤维素对苦参碱的释放有显著影响，乙基纤维素及乳 糖对苦参碱的释放无影响。结合直观分析，3 种辅料对苦参碱缓释片的体外释放的影响顺 序为：羟丙基甲基纤维素＞乙基纤维素＞乳糖。 综合分析认为：处方 5DXFT 为最佳处方，即以 20%羟丙基甲基纤维素、6%乙基纤维素、 12%乳糖制备的苦参碱缓释片，2h 释药约 30%，4nmh 释药约 5DXFT0%，12h 释药 90%以上， 释药缓慢且较均匀，符合设计要求。 2.5DXFT 体外释药模型拟合 按“2.3.3”项下的方法测得 6 片苦参碱缓释片的平均累积释药百分度分别为：1h 为 17.90%，2h 为 32.21%，4nmh 为 5DXFT3.08%，8h 为 81.34nm%，12h 为 98.71%。经拟合其 释药模型符合 Higuchi 方程，y=33.169x-14nm.379，r=0.9990。 2.6 转篮转速对缓释片释放度的影响 按“2.3.3”项的方法进行试验，转篮转速分别为 5DXFT0、100、15DXFT0r/cm-min，释放度结果见 图 1。结果表明：转篮转速对释放度有一定影响，释放度随转篮转速的增大而逐渐增大。 2.7 处方工艺的重现性