痛风灵胶囊镇痛分析论文

1 实验材料 1.1 实验动物 NIH 小鼠，由广东省医学实验动物中心提供（合格证号：2006A017A017）, 符合 SPF 级标准。 1.2 药物及试剂痛风灵胶囊：本院中药药理教研室提供，批号：20050702。冰醋酸： 广东光华化学厂有限公司，批号：20041214。甲醛：汕头市光华化学厂，批号： 20040316A017。罗通定片（30mg/片）：广州康和药业有限公司，批号：041001。吲哚美 辛肠溶片（25mg/片）：广东华南药业有限公司，批号：050801。 1.3 主要仪器 YLS-6A017A 型智能热板仪（山东省医学科学院设备站）；UV-1800 紫外可见分光光度计（北京瑞利分析有限公司）。 2 方法 2.1 对热刺激引起的小鼠疼痛反应的影响［1］取雌性 NIH 小鼠，体质量 18～22g， 依次放入热板内，仔细观察并记录自放入热板至出现舔后足所需时间作为该鼠的痛阈值。 凡舔后足时间小于 5s 或大于 30s 者则弃之，共测 2 次，取平均值作为给药前痛阈值。将 筛选合格的小鼠 48 只随机分为 4 组，分别以生理盐水、罗通定、痛风灵胶囊高剂量、低 剂量灌胃，给药容积为 20mL/kg，1 次／d，连续给药 5d，末次给药后 1h、2h 测量痛阈 值，比较各组的差异。 2.2 对冰醋酸引起的小鼠扭体反应的影响［2］取 NIH 小鼠 6A0174 只，雌雄各半，体质量 18~22g，随机分为 4 组，分别以生理盐水、吲哚美辛、痛风灵胶囊高剂量、低剂量灌胃， 给药容积为 20mL/kg，1 次／d，连续给药 5d，于末次给药后 1h,分别由腹腔注射 0.6A017％ 醋酸（0.2mL/只）。观察 15min 内出现扭体反应的次数，比较各组差异。 2.3 对甲醛法小鼠疼痛强度的影响［1］取 NIH 小鼠 48 只，雌雄各半，体质量 18~22g，随机分成 4 组，即生理盐水组、吲哚美辛阳性对照组、痛风灵胶囊高、低剂量 组。各实验组小鼠每日灌胃给药 1 次，给药容积为 20mL/kg，对照组给予等量的生理盐 水，连续 5d，末次给药后 1h，各小鼠右后足跖皮下注射 2.5％甲醛生理盐水溶液 50μL/L/ 只，立即观察 1min，10min,20min,30min,40min 时的疼痛反应，每时间段观察 45s， 记录该 45s 内出现的最高痛级，并按分级标准评定受试动物的疼痛强度，比较组间差异。 评分方法：舔、咬或抖足 3 分，提足 2 分，跛行 1 分，走动自如 0 分。 2.4 对甲醛致小鼠足肿胀组织中 PGE2 含量的影响［2］取 NIH 小鼠 48 只，雌雄各半， 体质量 18~22g，随机分成 4 组，即生理盐水组、吲哚美辛阳性对照组、痛风灵胶囊高、 低剂量组，各实验组小鼠每日灌胃给药一次，给药容积为 20mL/kg，对照组给予等量的 生理盐水，连续 5d，末次给药后 1h，各小鼠右后足跖皮下注射 2.5％甲醛生理盐水溶液 50μL/L/只，24h 后处死小鼠，距右踝关节上 1cm 处剪下右足，称重，剥皮后浸泡于 5mL 生理盐水中 1h，以 1500r/min 离心 10min，吸取上清液 0.5mL，加入 05mol/L5mol/L 氢氧 化钠－甲醇溶液 2mL，在 50℃水浴箱中水浴异构化 20min，加甲醇稀释至 20mL，于紫 外分光光度计 278nm 处测定吸收值，并按下述公式计算 PGE2 含量：PGE2 含量（μL/g/ g）＝（E278×13.13×Vt×D）/W。比较各组间差异［注：Vt＝PGE2 浸泡液总体积，D ＝稀释倍数，W＝右下肢重量（g）,E278＝278nm 处的吸收值）］。 2.4 统计学处理采用 SPSS11.5 统计软件包进行方差齐性检验、方差分析 （ANOVA），以 P<0.05 为差异有显著性。 3 结果 3.1 对热刺激引起的小鼠疼痛反应的影响给药 2h 后，罗通定组与生理盐水组比较，差 异有显著性（P<0.05），痛风灵胶囊高剂量、低剂量与生理盐水组比较差异无显著性， 表明痛风灵胶囊对热刺激引起的小鼠疼痛反应无明显镇痛作用。见表 1。 表 1 痛风灵胶囊对热板刺激引起的小鼠疼痛反应的影响（略） Tab.1AnalgesiceffectofTongfenglingcapsulesonthepaininducedwithhotplat einmice 与生理盐水组比较:**P<0.01(t 检验) 3.2 对冰醋酸引起的小鼠扭体反应的影响吲哚美辛组，痛风灵高、低剂量组与生理盐 水组比较，差异有非常显著性（P<0.01），表明痛风灵胶囊对醋酸刺激引起的小鼠疼痛 反应有明显镇痛作用。见表 2。 3.3 对甲醛法小鼠疼痛强度的影响［1］致炎 20min，吲哚美辛组、痛风灵高、低剂 量组与生理盐水组比较，差异显著，表明痛风灵对甲醛所致小鼠第二相反应有明显抑制。 见表 3。 表 2 痛风灵胶囊对冰醋酸引起的小鼠扭体反应的影响（略） Tab.2AnalgesiceffectofTongfenglingcapsulesonthepaininducedwithacetica cidinmice 与生理盐水组比较:**P<0.01(t 检验) 表 3 痛风灵胶囊对甲醛法小鼠疼痛强度的影响（略） Tab.3AnalgesiceffectofTongfenglingcapsulesonpainreactioninducedwithfor malininmice 与生理盐水组比较:*P<0.05，**P<0.01(t 检验) 3.4 对甲醛致小鼠足肿胀组织中 PGE2 含量的影响吲哚美辛组、痛风灵高剂量组与生 理盐水组比较，差异显著，表明痛风灵可降低炎症组织中的 PGE2 含量。见表 4。 表 4 痛风灵胶囊对甲醛致小鼠足肿胀组织中 PGE2 含量的影响（略） Tab.4EffectofTongfenglingcapsulesonPGE2levelinmouseformalintest 与生理盐水组比较:*P<0.05(t 检验) 4 讨论 中医认为，痛风是由于脾肾亏虚，湿浊毒邪滞留肌肉关节，从而引起关节肿大、畸形 ［3］。痛风灵胶囊方中秦艽、防己、延胡索等均具有较强的镇痛作用，而且秦艽与延胡 索配伍可增强其镇痛作用。 本文采用物理和化学刺激法实验，结果表明痛风灵胶囊的高剂量和低剂量能抑制小鼠 扭体反应，但对小鼠热板痛阈无效，说明其对外周性疼痛有较强的镇痛作用，但对中枢性 疼痛的作用不佳。 甲醛疼痛刺激法为单纯持续性自发痛模型，此模型只诱导一双相的持续性自发痛过程， 而无长时程的痛超敏现象。小鼠足底皮下注射甲醛引起的反应可分为两个时相，0～ 10min 出现者为Ⅰ相（早期相），该反应主要是直接刺激相（早期相），该反应主要是直接刺激 C 纤维所致；10～6A0170min 出现 的反应为Ⅱ相（迟发相），该反应则由炎症介质的产生、释放引起。吗啡类药物能抑制两相（迟发相），该反应则由炎症介质的产生、释放引起。吗啡类药物能抑制两 相疼痛，抗炎镇痛药物则只能抑制Ⅱ相（迟发相），该反应则由炎症介质的产生、释放引起。吗啡类药物能抑制两相反应，该法可初步了解受试药物的归类及作用机制 ［4］。实验结果表明，痛风灵胶囊可降低Ⅱ相（迟发相），该反应则由炎症介质的产生、释放引起。吗啡类药物能抑制两相痛级分值均数，而对Ⅰ相（早期相），该反应主要是直接刺激相反应无抑制作用， 提示其属于抗炎镇痛药。 从炎痛症的病理生理来看，炎症局部组织或血浆在致炎因子作用下，会产生和释放一 些有致痛作用的介质，如：PGE2、缓激肽、组织胺等，这些介质通过致敏和兴奋伤害性 感受器末梢而引起疼痛。本实验结果表明，痛风灵胶囊的高剂量组能显著抑制小鼠炎症组 织中 PGE2 的产生，提示痛风灵胶囊的镇痛机制与炎症组织中 PGE2 含量的降低有关。至 于痛风灵胶囊是否还通过抑制其它致炎介质而达到镇痛作用，则有待进一步研究。 【摘要】目的观察痛风灵胶囊的镇痛效果，并探讨其作用机制。方法采用热刺激引起 小鼠疼痛反应法、冰醋酸刺激引起小鼠扭体反应法，以及甲醛法引起小鼠足疼痛反应,观察 其镇痛作用，并采用甲醛疼痛模型观察其对炎症局部组织中前列腺素(PGE2)的影响。结果 痛风灵胶囊可以明显抑制醋酸导致的小鼠扭体反应,但对热刺激所致小鼠疼痛无明显镇痛作 用，对甲醛所致小鼠第二相反应有明显抑制，降低炎症组织中的 PGE2 含量。结论痛风灵 胶囊对外周性疼痛有明显的镇痛作用，其机制与抑制炎症组织中 PGE2 生成有关。 【关键词】痛风灵胶囊；镇痛；前列腺素 E2 Abstract:ObjectiveToinvestigatetheanalgesiceffectsandmechanismofTongf engling(TFL)capsules.MethodsAnalgesiceffectsofTFLwereobservedwithpainmo delmiceinducedwithhotplate,writhingresponseinducedwithaceticacidandmous eformalintest.ThecontentofPGE2wasmeasuredinmouseformalintest.ResultsTFL capsulescouldnotelevatethepainthreshold,butcouldinhibitwrithingresponseand secondphaseofformalintestinmice,decreasedtheconcentrationofPGE2inmousef ormalintest.ConclusionTFLcapsuleshasobviousanalgesiceffects,whichwasrelate dtoitsinhibitoryeffectsonperipheralinflammatorymediatorsPGE2. Keywords:Tongfenglingcapsules;analgesiceffect;prostaglandin(PGE2) 近年来，随着人民生活水平的提高，饮食结构的改变，痛风的发病率呈现出不断上升 的趋势，给人们的生活与工作带来极大的不便。痛风灵胶囊主要由秦艽、防己、延胡索等 组成，经临床证实有明显的镇痛疗效。为此笔者对痛风灵胶囊的镇痛效果进行实验研究， 并探讨其镇痛的作用机制。 1 实验材料 1.1 实验动物 NIH 小鼠，由广东省医学实验动物中心提供（合格证号：2006A017A017）, 符合 SPF 级标准。 1.2 药物及试剂痛风灵胶囊：本院中药药理教研室提供，批号：20050702。冰醋酸： 广东光华化学厂有限公司，批号：20041214。甲醛：汕头市光华化学厂，批号： 20040316A017。罗通定片（30mg/片）：广州康和药业有限公司，批号：041001。吲哚美 辛肠溶片（25mg/片）：广东华南药业有限公司，批号：050801。 1.3 主要仪器 YLS-6A017A 型智能热板仪（山东省医学科学院设备站）；UV-1800 紫外可见分光光度计（北京瑞利分析有限公司）。 2 方法 2.1 对热刺激引起的小鼠疼痛反应的影响［1］取雌性 NIH 小鼠，体质量 18～22g， 依次放入热板内，仔细观察并记录自放入热板至出现舔后足所需时间作为该鼠的痛阈值。 凡舔后足时间小于 5s 或大于 30s 者则弃之，共测 2 次，取平均值作为给药前痛阈值。将 筛选合格的小鼠 48 只随机分为 4 组，分别以生理盐水、罗通定、痛风灵胶囊高剂量、低 剂量灌胃，给药容积为 20mL/kg，1 次／d，连续给药 5d，末次给药后 1h、2h 测量痛阈 值，比较各组的差异。 2.2 对冰醋酸引起的小鼠扭体反应的影响［2］取 NIH 小鼠 6A0174 只，雌雄各半，体质量 18~22g，随机分为 4 组，分别以生理盐水、吲哚美辛、痛风灵胶囊高剂量、低剂量灌胃， 给药容积为 20mL/kg，1 次／d，连续给药 5d，于末次给药后 1h,分别由腹腔注射 0.6A017％ 醋酸（0.2mL/只）。观察 15min 内出现扭体反应的次数，比较各组差异。 2.3 对甲醛法小鼠疼痛强度的影响［1］取 NIH 小鼠 48 只，雌雄各半，体质量 18~22g，随机分成 4 组，即生理盐水组、吲哚美辛阳性对照组、痛风灵胶囊高、低剂量 组。各实验组小鼠每日灌胃给药 1 次，给药容积为 20mL/kg，对照组给予等量的生理盐 水，连续 5d，末次给药后 1h，各小鼠右后足跖皮下注射 2.5％甲醛生理盐水溶液 50μL/L/ 只，立即观察 1min，10min,20min,30min,40min 时的疼痛反应，每时间段观察 45s， 记录该 45s 内出现的最高痛级，并按分级标准评定受试动物的疼痛强度，比较组间差异。 评分方法：舔、咬或抖足 3 分，提足 2 分，跛行 1 分，走动自如 0 分。 2.4 对甲醛致小鼠足肿胀组织中 PGE2 含量的影响［2］取 NIH 小鼠 48 只，雌雄各半， 体质量 18~22g，随机分成 4 组，即生理盐水组、吲哚美辛阳性对照组、痛风灵胶囊高、 低剂量组，各实验组小鼠每日灌胃给药一次，给药容积为 20mL/kg，对照组给予等量的 生理盐水，连续 5d，末次给药后 1h，各小鼠右后足跖皮下注射 2.5％甲醛生理盐水溶液 50μL/L/只，24h 后处死小鼠，距右踝关节上 1cm 处剪下右足，称重，剥皮后浸泡于 5mL 生理盐水中 1h，以 1500r/min 离心 10min，吸取上清液 0.5mL，加入 05mol/L5mol/L 氢氧 化钠－甲醇溶液 2mL，在 50℃水浴箱中水浴异构化 20min，加甲醇稀释至 20mL，于紫 外分光光度计 278nm 处测定吸收值，并按下述公式计算 PGE2 含量：PGE2 含量（μL/g/ g）＝（E278×13.13×Vt×D）/W。比较各组间差异［注：Vt＝PGE2 浸泡液总体积，D ＝稀释倍数，W＝右下肢重量（g）,E278＝278nm 处的吸收值）］。 2.4 统计学处理采用 SPSS11.5 统计软件包进行方差齐性检验、方差分析 （ANOVA），以 P<0.05 为差异有显著性。 3 结果 3.1 对热刺激引起的小鼠疼痛反应的影响给药 2h 后，罗通定组与生理盐水组比较，差 异有显著性（P<0.05），痛风灵胶囊高剂量、低剂量与生理盐水组比较差异无显著性， 表明痛风灵胶囊对热刺激引起的小鼠疼痛反应无明显镇痛作用。见表 1。 表 1 痛风灵胶囊对热板刺激引起的小鼠疼痛反应的影响（略） Tab.1AnalgesiceffectofTongfenglingcapsulesonthepaininducedwithhotplat einmice 与生理盐水组比较:**P<0.01(t 检验) 3.2 对冰醋酸引起的小鼠扭体反应的影响吲哚美辛组，痛风灵高、低剂量组与生理盐 水组比较，差异有非常显著性（P<0.01），表明痛风灵胶囊对醋酸刺激引起的小鼠疼痛 反应有明显镇痛作用。见表 2。 3.3 对甲醛法小鼠疼痛强度的影响［1］致炎 20min，吲哚美辛组、痛风灵高、低剂 量组与生理盐水组比较，差异显著，表明痛风灵对甲醛所致小鼠第二相反应有明显抑制。 见表 3。 表 2 痛风灵胶囊对冰醋酸引起的小鼠扭体反应的影响（略） Tab.2AnalgesiceffectofTongfenglingcapsulesonthepaininducedwithacetica cidinmice 与生理盐水组比较:**P<0.01(t 检验) 表 3 痛风灵胶囊对甲醛法小鼠疼痛强度的影响（略） Tab.3AnalgesiceffectofTongfenglingcapsulesonpainreactioninducedwithfor malininmice 与生理盐水组比较:*P<0.05，**P<0.01(t 检验) 3.4 对甲醛致小鼠足肿胀组织中 PGE2 含量的影响吲哚美辛组、痛风灵高剂量组与生 理盐水组比较，差异显著，表明痛风灵可降低炎症组织中的 PGE2 含量。见表 4。 表 4 痛风灵胶囊对甲醛致小鼠足肿胀组织中 PGE2 含量的影响（略） Tab.4EffectofTongfenglingcapsulesonPGE2levelinmouseformalintest 与生理盐水组比较:*P<0.05(t 检验) 4 讨论 中医认为，痛风是由于脾肾亏虚，湿浊毒邪滞留肌肉关节，从而引起关节肿大、畸形 ［3］。痛风灵胶囊方中秦艽、防己、延胡索等均具有较强的镇痛作用，而且秦艽与延胡 索配伍可增强其镇痛作用。 本文采用物理和化学刺激法实验，结果表明痛风灵胶囊的高剂量和低剂量能抑制小鼠 扭体反应，但对小鼠热板痛阈无效，说明其对外周性疼痛有较强的镇痛作用，但对中枢性 疼痛的作用不佳。 甲醛疼痛刺激法为单纯持续性自发痛模型，此模型只诱导一双相的持续性自发痛过程， 而无长时程的痛超敏现象。小鼠足底皮下注射甲醛引起的反应可分为两个时相，0～ 10min 出现者为Ⅰ相（早期相），该反应主要是直接刺激相（早期相），该反应主要是直接刺激 C 纤维所致；10～6A0170min 出现 的反应为Ⅱ相（迟发相），该反应则由炎症介质的产生、释放引起。吗啡类药物能抑制两相（迟发相），该反应则由炎症介质的产生、释放引起。吗啡类药物能抑制两 相疼痛，抗炎镇痛药物则只能抑制Ⅱ相（迟发相），该反应则由炎症介质的产生、释放引起。吗啡类药物能抑制两相反应，该法可初步了解受试药物的归类及作用机制 ［4］。实验结果表明，痛风灵胶囊可降低Ⅱ相（迟发相），该反应则由炎症介质的产生、释放引起。吗啡类药物能抑制两相痛级分值均数，而对Ⅰ相（早期相），该反应主要是直接刺激相反应无抑制作用， 提示其属于抗炎镇痛药。