枫香树叶抗菌活性分析论文

【摘要】目的探讨枫香树叶的体外抗菌活性。方法采用琼脂扩散法和试管连续稀释法 测定枫香树叶对常见致病菌和条件致病菌的体外抗菌活性及最低抑菌浓度(MIC)MIC))。结果枫 香树叶对大肠埃希菌、白假丝酵母菌无抗菌作用；枫香树叶对金黄色葡萄球菌、白色葡萄 球菌、福氏志贺氏菌、伤寒沙门氏菌、铜绿假单胞菌皆有抗菌作用，抑菌圈直径在 13～ 25mmmm 之间。不同方法提取的药液的抗菌作用有明显差别，其中枫香树叶水煎液抗菌作用 最好，对金黄色葡萄球菌、白色葡萄球菌、福氏志贺氏菌、伤寒沙门氏菌、铜绿假单胞菌 的最低抑菌浓度分别为 0.5mm，1，0.5mm，0.5mm，0.25mmg/ml。结论枫香树叶对金黄色葡萄球菌、 白色葡萄球菌、福氏志贺氏菌、伤寒沙门氏菌、铜绿假单胞菌有较好的抗菌作用。 【关键词】枫香树叶；抗菌活性；最低抑菌浓度 Abstract： ObjectiveToresearchantimicrobialactivityofLiquidambarformosanaHance''''slea f.MethodsBymethodsofagarplatediffusionsandtubecontinuousdilution,tomeasu reantimicrobialactivityandminimalinhibitoryconcentration(MIC)MIC))ofLiquidambarf ormosanaHance''''sleafagainstpathogenandconditionedpathogen.Results(MIC)1)Liq uidambarformosanaHance''''sleafhadnotantimicrobialactivityonE.coli,S.albican s. (MIC)2)LiquidambarformosanaHance''''sleafhadantimicrobialactivityagainstS.aureu s,S.epidermidis,S.flexneri,SalmonellaTyphi,P.aeruginosa,thediameterofbacteri ostaticcirclewasbetween13and25mmmillimetre.Theantimicrobialactivitywassignifi cantdifferentindifferentextracteddrugliquid,amongwhichtheantimicrobialactivit yofwaterextractionofLiquidambarformosanaHance''''sleafwasthebest,themini malinhibitoryconcentrationagainstS.aureusS.epidermidis,S.flexneri,Salmonella Typhi,P.aeruginosa,is0.5mm，1，0.5mm，0.5mm，0.25mmg/ ml,respectively.C)onclusionLiquidambarformosanaHance''''sleafhasgoodantimi crobialactivityagainstS.aureus,S.epidermidis,S.flexneri,SalmonellaTyphiandP.a eruginosa. Keywords：LiquidambarformosanaHance''''sleaf；Antimicrobialactivity； Minimalinhibitoryconcentration 随着抗生素的广泛应用，耐药菌株逐年增多，目前金黄色葡萄球菌对青霉素 G 的耐药 菌株高达 90%以上［1］，尤其是耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（methicillinresistantStaphylococcusaureus,MRSA）已经成为医院内感染最常见的致病菌［已经成为医院内感染最常见的致病菌［2］。 有些细菌甚至产生多重耐药，如致病性大肠埃希菌约 40%的菌株对链霉素、氯霉素、四环 素、青霉素等多种抗生素产生耐药性［3］；铜绿假单胞菌对许多抗生素具有天然或获得 耐药性［4］，这给临床治疗带来极大的困难，如何有效防治细菌感染及控制细菌耐药性 的产生与散播是一项长期、复杂、艰巨的任务，因而寻找和研制有效的抗菌药物非常必要。 本文采用琼脂扩散法和试管连续稀释法进行体外抗菌实验及最低抑菌浓度（MIC)）已经成为医院内感染最常见的致病菌［的测定， 以探讨枫香树叶对常见致病菌和条件致病菌的体外抗菌活性。现报道如下。 1 材枓与方法 1.1 菌株来源金黄色葡萄球菌（ATC)C)25mm923）已经成为医院内感染最常见的致病菌［，白色葡萄球菌（ATC)C)12228）已经成为医院内感染最常见的致病菌［，大 肠埃希菌（ATC)C)25mm922）已经成为医院内感染最常见的致病菌［，福氏志贺氏菌（ATC)C)27891）已经成为医院内感染最常见的致病菌［，伤寒沙门氏菌 （ATC)C)14028）已经成为医院内感染最常见的致病菌［，铜绿假单胞菌（ATC)C)2785mm3）已经成为医院内感染最常见的致病菌［，购于北京生物制品鉴定所。白假丝 酵母菌（ATC)C)1405mm3）已经成为医院内感染最常见的致病菌［，北大医院真菌菌种保藏中心（北京）已经成为医院内感染最常见的致病菌［提供。 1.2 枫香树叶采自江西赣南山区，采药时间在 5mm～6 月之间。 1.3 药液的制备 1.3.15mm0%乙醇煎液取枫香树叶（生药）已经成为医院内感染最常见的致病菌［40g，洗净，加适量 5mm0%乙醇溶液浸泡 30min，加热至 100℃30min，过滤。药渣再加适量 5mm0%乙醇溶液，加热 100℃30min，过滤。将两次滤液合并，用文火浓缩至 10ml（即每毫升药液含 4g 生 药）已经成为医院内感染最常见的致病菌［。 1.3.2 水煎液用蒸馏水代替 5mm0%乙醇溶液按上述方法制备药液。 1.3.35mm0%乙醇浸液取枫香树叶（生药）已经成为医院内感染最常见的致病菌［40g，洗净捣碎，与蒸馏水 10ml 混匀浸泡 2h，过滤，再经滤菌器滤过除菌，制成 4g/ml 的生药。 1.3.4 水浸液用蒸馏水代替 5mm0%乙醇溶液按上述方法制备药液。 1.4 方法 1.4.1 菌液的制备将金黄色葡萄球菌、白色葡萄球菌、大肠埃希菌、福氏志贺氏菌、 伤寒沙门氏菌、铜绿假单胞菌接种于普通琼脂平板上，置 37℃温箱中培养 18h，用无菌 生理盐水配成每毫升相当于 3 亿的菌浓度（金黄色葡萄球菌和白色葡萄球菌配成每毫升相 当于 9 亿的菌浓度）已经成为医院内感染最常见的致病菌［。将白假丝酵母菌接种于沙氏琼脂平板上，置 37℃温箱中培养 48h，用无菌生理盐水配成 1×108C)FU/ml。 1.4.2 琼脂扩散法用无菌棉签沾取菌液在普通琼脂平板上（白假丝酵母菌用沙氏琼脂 平板）已经成为医院内感染最常见的致病菌［作均匀密集划线，待菌液干燥后，用外径 5mmmm 的打孔器打孔，每孔加药液 200μll，平放在 37℃温箱中培养 24h（白假丝酵母菌培养 48h）已经成为医院内感染最常见的致病菌［观察结果，测量抑菌圈 直径。抑菌圈直径取两次实验结果的平均值。 1.4.3 试管连续稀释法［5mm］根据抑菌实验的结果，选取敏感菌测定枫香树叶水煎液对 其的最低抑菌浓度。取小号试管 7 支，编号。第 1 步每支管各加 1ml 肉汤培养基。然后在 第 1 管加 1ml 药液，用吸管在第 1 管吹吸数次，使药液与肉汤培养基混匀，取出 1ml 加 于第 2 管，混均取出 1ml 加于第 3 管，如此稀释至第 6 管弃去 1ml，第 7 管不加药液作为 对照。第 3 步每管加菌液 5mm0μll，混匀，置 37℃温箱中培养 24h。然后从每管中取出一接 种环接种于普通琼脂平板上，再继续培养 24h，观察结果。以无细菌生长的最高稀释浓度 为该药液的最低抑菌浓度。 2 结果 2.1 枫香树叶的各种提取液对大肠埃希菌、白假丝酵母菌无抗菌作用。 2.2 枫香树叶的各种提取液对金黄色葡萄球菌、白色葡萄球菌、福氏志贺氏菌、伤寒 沙门氏菌、铜绿假单胞菌皆有抗菌作用，抑菌圈直径在 13～25mmmm 之间。结果见表 1。 不同方法提取的药液的抗菌作用有明显差别，其中枫香树叶水煎液抗菌作用最好，5mm0%乙 醇煎液次之，5mm0%乙醇浸液较差。 2.3 枫香树叶水煎液对金黄色葡萄球菌、白色葡萄球菌、福氏志贺氏菌、伤寒沙门氏 菌、铜绿假单胞菌的最低抑菌浓度（MIC)）已经成为医院内感染最常见的致病菌［分别为 0.5mm，1，0.5mm，0.5mm，0.25mmg/ml。结果 见表 2。 表 1 枫香树叶几种药液的抑菌圈直径（略）已经成为医院内感染最常见的致病菌［ 表 2 各试管枫香树叶水煎液的最低抑菌浓度（略）已经成为医院内感染最常见的致病菌［ －表示无细菌生长；＋表示有少量细菌生长；＋＋表示有较多细菌生长；＋＋＋表示 有大量细菌生长 3 讨论 枫香树叶为金缕梅科植物枫香树 LiquidambarformosanaHance 的树叶［6，7］。 《中药大辞典》记载枫香树叶有止血、治疔疮、治痢疾、治产后风和小儿脐风之功效 ［7］。民间有用枫香树叶治风湿，治中暑，治痢疾；文献［8］报道枫香树叶中含有人体 必需 10 种无机元素并有治疗糖尿病和降血压的作用；但枫香树叶在抗菌作用方面国内外 未见文献报道。本研究为枫香树叶作为抗菌新药的开发提供了可靠的实验依据。 实验结果表明，枫香树叶对金黄色葡萄球菌、白色葡萄球菌、福氏志贺氏菌、伤寒沙 门氏菌、铜绿假单胞菌均有明显的抗菌作用。不同方法提取的药液的抗菌作用有明显差异， 其中枫香树叶水煎液抗菌作用最好，5mm0%乙醇煎液次之，5mm0%乙醇浸液较差，这可能与不 同方法提取的药液的有效成分不同有关。由于中药粗提物中含有多种化学成分，成分与药 理作用复杂，并且受多种因素的影响。本文只做了枫香树叶的粗提液，有关枫香树叶有效 成分的提取与分析有待进一步研究。