丹参鉴别方法研究论文

【摘要】通过检索相关的文献，分别从植物形态、植物分类，显微特征，以及薄层层 析法、紫外光谱鉴别法及指纹图谱、分子生物学等方面对丹参进行鉴别区分，进而对丹参 进行质量控制。 【关键词】丹参；鉴别 Abstract： InrecentyearsdifferentplantswhoserootsarethesamelikeSalviamiltiorrhizaBgero otsarebeingusedconfusedly.Theauthorssummarizedtherecentresearchondistin guishingSalviamiltiorrhizaBgerootsindifferentkindsofways.Themethodsinclude: plantmorphology,plantclassification,roottraitidentification,waterloggingidentifi cation,powdermicroidentification,thinlayerchromatography,ultravioletspectru midentification,fingerprintidentification,DNAgeneticmarkeridentificationaswell asRAPDidentification.ThesemethodshavebeenusedindifferentiatingtherealSage rootsandthefalseones.AftertheprocessitmayeasilycontrolthequalityoftheSagero ots. Keywords：SalviamiltiorrhizaBge；Identification 丹参 SalviamiltiorrhizaBge.为唇形科（Labiatae）鼠尾草属（鼠尾草属（Salvia）鼠尾草属（植物，是常 用中药之一。药用其根，因其根皮赤而肉紫且形状似参而得名“丹参”。丹参作为传统中药 在我国沿用已久，我国最早的药书《神农本草经》即收载有丹参，列为上品，中医理论认 为丹参有祛淤止痛，活血通经，清心除烦之功效［1］。丹参在现代中药中开始大批量使 用，20 世纪 70 年代中期药材丹参已经供不应求,随着野生资源的减少,野生入药的丹参远 远满足不了市场需求。目前全国许多省份都有大量丹参种植，但品质却有较大差别，而且 大量鼠尾草属植物也作为丹参配伍入药。因此,对丹参进行鉴定和质量控制非常必要。目前 发现鼠尾草属（Salvia）鼠尾草属（共有 40 多个种(含变种、变型)的根及其根茎可作丹参使用 ［2，3］。 对中药鉴别和品质评定的方法很多,从传统的形态鉴别、性状比较和感官评定等到现代 的显微结构观察、光谱和色谱学评价等以及近年来所提出的指纹图谱技术和一些分子生物 学方法，这些新的生物学手段为中药的品质鉴定和质量评定注入了新的活力。现对这些鉴 定方法综述如下。 我国各地民间应用其同属植物代作丹参或其他药用的资源比较丰富，种类近 30 多个， 有些是我国大宗传统中药，大都用作抗菌消炎、活血化淤等。现归纳见表 1。 1 丹参形态学鉴别 1.1 植物学特性鉴别传统方法大多根据丹参的形态方面对药材的真伪进行鉴别，杨宏 等［4］对丹参 SalviamiltiorrhizaBge.南丹参 SalviabowleyanaDunn 甘肃丹参 SalviaprzewalskillMaxim 紫丹参(滇丹参)SalviayunnanensisC·H·Wight 在植物形态 学及植物外部性状方面进行了比较区分。 张月江等［5］根据药材根茎质地以及外皮有无脱落现象，区分几种不同产地的丹参 品种。 表 1 鼠尾草属药用植物种类（略）鼠尾草属（ 丹参为多年生草本,根砖红色,茎高 40～80cm,多分枝,被长柔毛。叶常为奇数羽状复叶。 叶柄长 1～7cm,小叶 3～7,顶端小叶较大。小叶卵形或椭圆状卵形。长 1.5～8cm,宽 0.8 ～5cm，先端钝,边缘具圆锯齿,两面被柔毛,下面较密,花序顶生或腋生轮伞花序有花 6 至多 花,组成假总状花序,密被腺毛及长柔毛;小苞片披针形;花萼钟状,长 1～1.3cm,先端二唇形, 萼筒喉部密被白色柔毛;花冠蓝紫色,二唇形,长 2～2.7cm,花冠筒外伸,弯曲,上长达 2cm, 筒内有毛环;雄蕊 2,药隔长,花丝短,上臂药室发育,2 下臂的药室不育且联合；小坚果 4,椭圆 形,花期 5～8 月,果期 8～9 月。根据丹参的植物学特征可以将丹参与混用的药材进行区分。 1.2 丹参药材根部性状鉴别丹参及其亲缘种类的药用植物甚多，以根部特征区别各类 丹参也是沿用很久的经典方法。 丹参根的特征为：丹参多为带根茎的根，根茎粗短，有茎基残余，下着生多数细长的 根。根呈圆柱形，稍弯曲，表面呈砖红色，粗糙，具多数纵沟或皱纹，有须根痕，外部栓 皮常鳞片状剥落，皮层有时开裂，长 8～22cm，直径 5～12mm，质坚脆，易折断，断 面不平，疏松有裂隙，皮部棕渴色或砖红色，韧皮部狭。形成层明显，淡棕色，木质部导 管束灰黄色或黄白色，放射状排列。气微，味微苦、涩，以条粗壮、色紫红者为佳。 1.3 水试鉴别法张军伟等［6］用水浸泡丹参根的方法对丹参进行鉴别，正品丹参根浸 泡后的溶液无色,药材稍膨胀,颜色稍微变浅。伪品丹参溶液显红色药材变为淡红色。李征 北［7］根据水浸后续断会被染成红色，粉末中有草酸钙簇晶；丹参水浸不染成红色，粉 末中无草酸钙簇晶，但有石细胞及红棕色物为丹参。从而将两者进行区分。 2 显微结构鉴别 2.1 根的横切面显微结构鉴别何广新等［8］根据丹参横切面显微结构特征与紫丹参进 行区分，丹参(SalviamiltiorrhizaBge.)木栓层 3～7 列，木栓细胞长方形，切向延长，壁 非木化或微木化；外侧有时可见落皮层。皮层窄，纤维单个散在或 2～6 个成群，孔沟放 射状，层纹细密。韧皮部较窄，由筛管群和薄壁细胞组成。形成层明显成环。木质部宽广， 4～12mm 呈放射状排列。有些相邻的束在内侧合并，导管类圆形或多角形，有的沿径向 延长，直径 15～65mm，单个散在或 2～12 个成群，径向排列或切向排列；木纤维发达， 多成群分布于大导管周围；有的本质部束内有 1～2 群木化薄壁细胞；木射线宽广，射线 细胞多木质化增厚。 紫丹参根茎表皮细胞 1 列，内含紫红色物质；皮质薄壁细胞有的具纹孔；髓部薄壁细 胞壁呈连珠状增厚或稍增厚，具纹孔。根本质部束常较小，导管也少。 2.2 根粉末的显微结构鉴别杨宏等［4］对丹参 SalviamiltiorrhizaBge.紫丹参(滇丹 参)SalviayunnanensisC·H·Wight 在根的粉末显微结构方面进行了比较区分。 丹参粉末呈红棕色。木栓细胞黄棕色，表面观呈类方形或多角形，壁稍厚，胞腔内常 含红棕色色素，色素溶解后，断面观细胞类长方形，排列较整齐。木纤维多成束，长梭形， 纹孔斜裂缝状或十字状，孔沟稀。导管主要为网纹和具斜纹孔导管。石细胞呈类圆形、类 三角形、类梭形、类长方形或不规则形，也有延长呈纤维状，有的胞腔内含棕色物。 南丹参根横切面与其它几种相区别是木质部的束数较少,约 7～9 个。甘肃丹参根横切 面与其它几种相区别是维管束稍偏于一侧,木质部导管 3～4 行切向排列,木纤维位于导管周 围。紫丹参粉末石细胞多见,单个散在或数个成群,类棱形、长方形、类三角形、不规则多 角形,边缘不整齐,直径 12～55μm,m,长至 230μm,m,壁厚 5～20μm,m,孔沟明显,有的不达边缘, 纹孔稀疏。韧皮纤维多见,长棒状或长棱形,长 80～320μm,m,直径 20～38μm,m,壁厚 8～ 19μm,m,孔沟稍密,网纹及具缘纹孔导管直径 14～45μm,m,有的具网状增厚。纤维管胞单个散 在或成束,长棱形。 2.3 花粉形态学特征对丹参及同属药用植物的鉴别一定的植物具有一定形态的花粉， 因此花粉形态研究也是植物分类鉴别的依据之一。通过植物花粉形态，进行扫描电镜的观 察和照相，可从花粉形状、大小、具孔沟数、沟长、沟宽、沟底颗粒的形状、大小、外壁 的网纹、网眼等一系列的特征将其各种花粉形态进行区别分类。丹参的花粉以外壁较薄、 纹饰网眼较浅、网脊较粗、沟较宽、沟底具颗粒而区别于其它种。丹参与同属植物的花粉， 各种的形态虽较相近，但外壁纹饰在扫描电镜高倍放大下，显现了各种的姿态，为其种间 鉴别提供了有用的依据。根据外壁纹饰的差异和厚薄，结合沟的宽窄长短、沟缘形状、沟 底的结构以及花粉的大小尺度等是可以作为分种鉴别之特征的。丹参花粉大小为 41.96(35.84～49.25)×35.96(31.36～38.08)μm,m。花粉粒椭球形、圆球形、扁球形， 以椭球形为多见，极面观时为椭圆六裂片状；具 6 沟，沟几乎平行分布，沟长，几乎达机 沟宽 3.5～5μm,m，沟缘粗糙，当扫描电镜放大 10000 倍时，沟底显颗粒状，颗粒形状大 小不一。外壁二层，厚约 1.5～2μm,m，二层等厚或外层厚于内层，光学显微镜下，外壁显 不均匀的细网状纹饰，光切而基板结构较细。在扫描镜下外壁里多角形的纹，网眼较浅， 四脊较粗，网眼具多孔，孔数 2～7 个，孔深浅不一，为椭圆形或不规则的圆形［2］。 3 理化学方法鉴别 3.1 根据丹参所含的化学成分进行鉴别经过大量分析研究说明丹参所含化学成分中二 萜醌成分与系统发育有密切关系，二萜醌类化合物组成的不同可以作为种类鉴别的依据， 根据二萜醌成分含量的多少对丹参组作丹参的药用植物的亲缘关系进行划分，校正植物形 态分类系统［2］。 3.2 薄层色谱鉴别林佳等［9］采用薄层色谱定性鉴别的方法比较后指出在同一展开系 统的条件下，无论是野生还是栽培品种，丹参的一些主要成分相同，以此可以作为识别丹 参药材真伪的参考依据。曾懿等［10］也用薄层色谱鉴别的方法通过观察色谱图斑点的位 置对丹参和滇丹参进行鉴别。 3.3 紫外吸收光谱鉴别颜素琴等［11］运用紫外光谱鉴别的方法，丹参在 253，277nm 两处有吸收特征峰，而甘西鼠尾在 264，248，218，203nm4 处有吸收 特征峰。作丹参使用的药材紫外吸收光谱的范围不同，据此可以对两者进行鉴别。王媛媛 等［12］在麻花艽与丹参鉴别中取麻花艽横断面，置紫外光灯(365nm)下观察，显黄白 色或金黄色荧光。取丹参粉末处理后置紫外灯（365nm)下现察显亮蓝灰色荧光。 3.4 紫外导数光谱李海鹰等［13］研究认为丹参与番薯根的石油醚、甲醇及氯仿提取 物的零阶和二阶导数光谱均可用于二者的鉴别。 3.5 丹参药材的近红外漫反射光谱模式识别法鉴别刘沭华等［14］近红外漫反射光谱 模式识别法可以有效地应用于中药材自动鉴别、递归支持向量机等方法可以有效地完成自 动分类和特征谱段选择。刘荔荔等不仅显示出近红外光谱数据的线索，采用近红外漫反射 光谱(NIRTDRS)技术结合聚类分析和判别分析法，对 9 个产地的丹参药材与同属其他 9 种 植物进行了鉴别研究，通过 NIRTDRS 方法得到的药材化学成分信息，通过聚类与判别分 析，不同种丹参药材的 NIRTDRS 丹参及属内植物为根茎类药材，其根茎中除含有大量的 纤维素、淀粉等外，其他化学成分主要分脂溶性的其结果与化学成分测定一致。NIRTDRS 用于不同种丹参药材的鉴别，方法简便、结果可靠。 3.6 指纹图谱鉴别（HPLC 法）鼠尾草属（中药指纹图谱是在制定中药质量评价的过程中针对中 药中成分的复杂性以及缺乏用以鉴定成分所需的化学对照品这一症结而产生的一种方法， 它是指某种(或某产地)中药材或中成药特性的共有峰的图谱。高效液相色谱(HPLC)具有色 谱稳定性好、柱效高、应用范围广等特点，是中药指纹图谱研究中常用的手段。用于中药 材品种的丹参的品种鉴别是用药的重要问题，同属中都包含许多品种，能入药者往往只是 其中几种。对丹参等几种中药指纹图谱与代谢指纹图谱研究的结果，指出不同产地的药材 在指纹图谱上存在较大差异。 粟晓黎等［15］以鬼臼所含毒性成分为分析对象，得出 HPLC 指纹图谱分析法可简便 快速地鉴别区分鬼臼(桃儿七)、龙胆、威灵仙，并可以用于不同来源鬼臼的鉴别。这种方 法已被应用于不同来源药材的鉴别。李磊等［16］运用 HPLC 技术，将相同条件下的指纹 条形码进行比较结果证明能够对丹参的道地性进行评定。 4 分子生物学鉴别方法 4.1RAPD 鉴别法随机扩增的多态性 DNA（RAPD）鼠尾草属（技术已经被广泛应用于物种鉴别 ［17］。郭宝林等［18］对山东，四川中江，河南卢氏，河南灵宝等地的丹参进行聚类分 析从而对不同地域丹参进行了亲缘分析。王大威等［19］在采用 RAPD 分子标识法对防风 P.dielsianumFeddeexwolff，前胡 PeucedanumledeboruieuoidesK,T,Fu，葛缕子 CurumCarvil 进行亲缘关系分析，后进行聚类分析，构建聚类关系树结果表明，RAPD 法 可准确鉴定正品防风及其近似种。 4.2DNA 遗传标记技术随着分子生物学和基因工程技术的日趋成熟，从遗传 DNA 分 子水平检测生物遗传多样性并进行分类与鉴定已成为可能。DNA 分子遗传标记技术具有快 速、微量、特异性强的特点，且不受生长发育阶段、供试部位、环境条件的影响，已在中 药鉴定学研究中展示了良好的应用前景，并保持强劲的发展势头［20］。 我国丹参植物资源丰富，分布范围遍及全国，但其中混用作丹参使用的同属药材质量 参差不齐，所以对丹参资源的鉴别、分类十分重要。鉴别的方法涵盖了植物形态学、植物 解剖学、薄层色谱以及指纹图谱等多种现代科学方法，通过对丹参的鉴别可以对作药材使 用的丹参进行筛选，保证丹参的使用能够更加规范和有序。 【摘要】目的以绿原酸含量为指标，比较不同产地加工的金银花品质。方法采用高效 液相色谱法，使用 DiamonsilTMC18(250mm×4.6mm,5μm,m)色谱柱；以乙腈-0.4%磷 酸溶液（15∶85）鼠尾草属（为流动相；检测波长为 327nm；柱温 30℃；流速 1.0ml/min。结果蒸 制后干燥的产地加工法优于直接干燥的加工方法。结论不同产地加工方法的金银花中绿原 酸含量有较大差异。 【关键词】金银花；绿原酸；产地加工；高效液相色谱法 ComparisonontheChlorogenicAcidContentinFlosLoniceraeProcessedinDiffer entProducingAreas Abstract： ObjectiveTocomparethequalityofFlosLoniceraeprocessedindifferentproducinga reas.MethodsThecontentofchlorogenicacidinFlosLoniceraewasdeterminedbyHP LC.DiamonsilTMC18(250mm×4.6mm,5μm,m)wasusedandthemobilephasewasAc etonitrile0.4%Phosphoricacid(15∶85).Thewavelengthofdetectorwas327nm,thecolumnte mperaturewas30℃andtheflowratewas1.0ml/ min.ResultsSteamingandovendryingwerebetterthandirectdrying.ConclusionTh econtentofchlorogenicacidisdifferentintheFlosLoniceraeprocessedbydifferentpr ocessinginproducingareas. Keywords： FlosLonicerae;Chlorogenicacid;Processinginproducingareas;HPLC 金银花具有广泛的药用价值，可以清热解毒、凉血化淤，主治外感风热、瘟病初起、 疮疡疔毒、红肿热痛、便脓血、增强免疫功能等。金银花的常见药用制品有银翘解毒丸、 栀子金花丸、银翘解毒片、银翘散、五味消毒饮、祛感灵胶囊、咽炎冲剂、外阴洗剂等 ［1，2］，另外金银花也能够起到防风固沙、保持水土、改良土壤、改善生态、绿化环境 的多重效用。金银花其药用价值主要由其所含化学成分来体现。通过研究得知，金银花化 学成分复杂，已鉴别出的就有 60 多种，其中具有生物活性，并已搞清楚结构的化合物主 要有：绿原酸、异绿原酸、黄酮类的木犀草素和挥发油类的芳樟醇等［3～5］。 中药的使用注重产地加工及炮制，不同的加工炮制方法对中药的使用有着不同的意义。 而金银花在《中国药典》2000 年版Ⅰ部及《浙江省中药炮制规范Ⅰ部及《浙江省中药炮制规范部及《浙江省中药炮制规范 1994 年版Ⅰ部及《浙江省中药炮制规范》中均未提 及产地加工中应蒸制后再干燥［1，2］，翻阅以往文献也未有所获；但在民间采收过程中 常有蒸制后再干燥的加工习惯。由于在金银花各化学成分中绿原酸具有抗菌、抗病毒、止 血、抗肝炎等特殊作用，因此普遍把绿原酸含量的高低作为衡量金银花质量的标准 ［5］。本论文的主要内容就是以金银花中绿原酸的含量为指标，以 HPLC 法为手段，比 较两种不同产地加工的金银花的品质。 1 材料 1.1 仪器 Waters510 色谱系统，490E 紫外检测器。HS 色谱数据工作站 V4.0+（杭 州英谱科技开发有限公司）鼠尾草属（。 1.2 试药对照品：绿原酸（chlorogenicacid）鼠尾草属（购自中国药品生物制品检定所，批号 为 753-200111；高纯水，其他试剂均为色谱纯。 1.3 样品取自金华琅琊，经鉴定为忍冬科植物金银花 LoniceraconfusaDC.的干燥花 蕾或带初开的花。1 号样品采收后直接干燥，2 号样品采收后经蒸制再干燥。 2 方法与结果 2.1 色谱条件与系统适用性实验色谱柱为 DiamonsilTMC18(250mm×4.6mm，5μm,m)，流动相为乙腈-0.4%磷酸溶液 （15∶85）鼠尾草属（，流速 1.0ml·min-1，检测波长 327nm，柱温 30℃，AUFS0.3；进样量 20μm,l；理论板数按绿原酸峰计算不低于 5000。 2.2 供试品溶液的制备分别取 1 号和 2 号样品研成细粉，精密称取细粉各约 0.5g，置 具塞锥形瓶中，精密加入 50%甲醇 50ml，称定重量，超声处理 30min，放冷，再称定重 量，用 50%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密取续滤液 5ml，置 25ml 棕色量瓶中， 加 50%甲醇至刻度，摇匀即得。