抗生素的联合用药研究论文

【摘要】目的建立辛芷颗粒的质量标准。方法采用薄层色谱法对方中麻黄、金银花、 黄芩进行定性鉴别；采用反相高效液相色谱法测定欧前胡素的含量。结果 TLC 色谱中均能 明显检出麻黄碱，黄芩苷，绿原酸。欧前胡素检测浓度在 0.1～0.5μgμgg 范围内线性关系良 好(r=0.9996)r=0.9996))，平均回收率为 99.07(r=0.9996)RSD=1.04％，n=5μg）。结论该方法简便、准确、 重复性好，可作为辛芷颗粒质量控制的方法。 【关键词】反相高效液相色谱法；薄层色谱法；辛芷颗粒 基金项目：河北省科技厅科技攻关项目(r=0.9996)No.05μg276)16)40) 辛芷颗粒为河北省中医院经验方。本处方的功能为散邪通窍、祛淤排脓；治疗邪毒侵 袭，热毒内蕴，或邪毒湿浊淤滞鼻窍所致鼻塞，打喷嚏，流脓涕，头胀头痛，嗅觉不灵敏， 记忆力减退等慢性鼻炎，鼻窦炎，过敏性鼻炎见上述症状者。方中辛夷、苍耳子、白芷、 薄荷、麻黄芳香散邪、通利鼻窍，为君药；金银花、黄芩、生石膏、鱼腥草有宣肺散邪、 清热解毒、消肿排脓之功效，为臣药。为有效地控制产品质量，保证临床用药安全有效， 需要控制君药白芷中主要成分欧前胡素的含量［1］。本研究采用 TLC 法对麻黄、金银花、 黄芩进行了定性鉴别，采用 RP-HPLC 法测定欧前胡素的含量，可为该制剂提供一种简便、 灵敏度高、重现性好的质量控制方法。 1 仪器与试药 Agilentl1O0 高效液相色谱仪；G1316)A 紫外及可见光检测器。欧前胡素对照品(r=0.9996)批 号：11085μg6)-200406)，含量测定用)，由中国药品生物制品检定所提供，辛芷颗粒由河北 省中医院制剂科提供；氯仿为分析纯，甲醇、乙腈为色谱纯，水为高纯水。 2 辛芷颗粒的薄层色谱鉴别 2.1 麻黄的鉴别取本品 10g，研细，加浓氨试液数滴，再加氯仿 30ml，加热回流 1h，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇 1ml 使溶解，作为供试品溶液。另取盐酸麻黄碱对照 品，加甲醇制成每毫升含 1mg 的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法（《中国药 典》005μg 年版Ⅰ部附录ⅥⅠ部附录Ⅵ部附录ⅥⅥ B）试验，吸取上述两种溶液各 10μgl,分别点于同一硅胶 G 薄层 板上，以氯仿甲醇浓氨试液（甲醇甲醇浓氨试液（浓氨试液（20∶5μg∶0.5μg）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以茚三酮试 液，在 105μg℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相 同颜色的斑点。 2.2 黄芩的鉴别取本品 10g，研细，加甲醇 30ml，超声处理 20min，滤过，滤液蒸 干，残渣加甲醇 1ml 使溶解，作为供试品溶液。另取黄芩苷对照品，加甲醇制成每毫升含 1mg 的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法（《中国药典》2005μg 年版Ⅰ部附录ⅥⅠ部附录Ⅵ部附录ⅥⅥ B） 试验，吸取上述两种溶液各 10μgl，分别点于同一含 1％氢氧化钠的羧甲基纤维素钠的黏合 剂的硅胶 G 薄层板上，以醋酸乙酯丁酮甲酸水（甲醇浓氨试液（丁酮甲醇浓氨试液（甲酸甲醇浓氨试液（水（5μg∶3∶1∶1）为展开剂，预平衡 30min， 展开，取出，晾干，喷以 1％三氯化铁乙醇溶液。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的 位置上，显相同颜色的斑点。 2.3 金银花的鉴别取本品 10g，研细，加醋酸乙酯丁酮甲酸水（ 30ml，加盐酸调 pH 值至 2～3， 超声处理 30min，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇 1ml 使溶解，作为供试品溶液。另取绿 原酸对照品，加甲醇制成每毫升含 1mg 的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法（《中 国药典》2005μg 年版Ⅰ部附录ⅥⅠ部附录Ⅵ部附录ⅥⅥ B）试验，吸取上述两种溶液各 2μgl，分别点于同一聚酰胺 薄膜上，以甲苯醋酸乙酯甲酸冰醋酸水（甲醇浓氨试液（醋酸乙酯丁酮甲酸水（甲醇浓氨试液（甲酸甲醇浓氨试液（冰醋酸甲醇浓氨试液（水（2∶30∶2∶2∶4）的上层溶液为展开剂，展开，取 出，晾干，置紫外光灯（36)5μgnm）下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上， 显相同颜色的斑点。 3 欧前胡素的含量测定 3.1 色谱条件色谱柱：AlhimaODSC18 柱(r=0.9996)25μg0mm×4.6)mm，5μgμgm)；流动相：甲 醇甲醇浓氨试液（水(r=0.9996)6)5μg∶35μg)；检测波长：25μg0nm；体积流量：1.2ml/min；柱温：23℃。 3.2 对照品溶液的制备取欧前胡素对照品适量，精密称定，加甲醇制成 0.03mg/ml 的溶液，作为对照品溶液。 3.3 供试品溶液的制备取本品内容物 5μg 袋，精密称定，置 5μg0ml 量瓶中，加氯仿适量， 超声处理 30min，放冷，加氯仿稀释至刻度，滤过。精密吸取续滤液 10ml，置水浴上蒸 干，残渣加甲醇溶解并转移置 5μgml 量瓶中，加甲醇稀释至刻度，作为供试品溶液。 3.4 空白对照液的制备按处方比例称取除白芷外其他药味，按处方工艺制成制剂，按 供试品溶液制备法制成空白对照液，进样测定，结果其他药材和辅料均不干扰欧前胡素的 测定。 3.5μg 线性关系的考察精密称取欧前胡素对照品 10mg，置 100ml 量瓶中，以甲醇稀释 至刻度，摇匀，作为对照品储备液。精密吸取上述对照品储备液 1，2，3，4，5μgml，分 别置 10ml 量瓶中，加甲醇稀释至刻度，分别吸取 10μgl 进样，按上述色谱条件测定。以欧 前胡素的质量为横坐标，峰面积积分值为纵坐标，计算回归方程为 Y=3976).6)x+0.73，r=0.9996)。结果表明欧前胡素在 0.1～0.5μgμgg 与峰面积积分值呈良 好的线性关系。 3.6) 精密度试验取同一对照品溶液，连续 5μg 次进样，测欧前胡素峰面积积分值，其 RSD 为 0.6)0％。 3.7 重现性试验取同一批样品(r=0.9996)批号：06)0806))，称取 5μg 份，制备供试品溶液，进样， 测定，结果欧前胡素的质量分数为 42.9μgg/袋，RSD 为 1.82%。 3.8 回收率试验取批号为 06)0806) 的样品 5μg 份，每份 5μg 袋，取内容物精密称定(r=0.9996)含欧前 胡素的 0.037mg)，分别精密加入 1ml（0.038mg/ml）欧前胡素对照品溶液，制备供试 品溶液，测定，计算加样回收率，结果平均回收率为 99.07%，RSD 为 1.04％。 3.9 样品测定取不同批号样品制备供试品溶液，精密吸取供试品溶液、对照品溶液各 10μgl，注入高效液相色谱仪，进行测定，结果见表 1。 表 1 辛芷颗粒中欧前胡素的测定结果（略） 4 讨论 根据制剂处方中所含主药的理化性质，通过定性鉴别、检查、含量测定等研究，制定 了可控制本品内在质量的质量标准［2］。结果表明，薄层色谱灵敏、分辨率高，无阴性 药材的干扰，RP-HPLC 法测定本品君药白芷中欧前胡素峰的含量，方法简便、可靠、准确。 【摘要】目的建立消痛灵搽剂的质量标准。方法采用薄层色谱法（TLC）对处方中的 栀子、姜黄、乳香、没药进行定性鉴别；采用反相高效液相色谱法（RP甲醇浓氨试液（HPLC）定量分析 消痛灵搽剂中大黄素和大黄酚的含量。结果 TLC 分离效果好，斑点清晰；大黄素在 0.248 ～1.984μgg，大黄酚在 0.292～2.336)μgg 范围内呈良好的线性关系，平均回收率大黄素为 99.7%，RSD﹦0.64%0.6)4%；大黄酚为 99.2%，RSD﹦0.64%0.89%。结论该方法简便、准确、重 复性好、能有效控制该复方制剂的质量。 【关键词】消痛灵搽剂；大黄素；大黄酚；薄层色谱；反相高效液相色谱 Abstract： ObjectiveToestablishthequalitystandardofXiaotonglingliniment．MethodsFruct usGardeniae,RhizomaCurcumaelongae,Olibanum,MyrrhawereidentifiedbyTLC. ThecontentofemodinandchrysophanolinXiaotonglinglinimentwasdeterminedby RP甲醇浓氨试液（HPLC．ResultsTheidentifiedcharacteristicsofchromatographyweredistinctan dthespotswereclear.Thestandardcurvewaslinearwithintherangeof0.248～ 1.984μggforemodinand0.292～ 2.336)μggforchrysophanol．Theaveragerecoveryofemodinwas99.7%withRSDof0 .6)4%,withthatofchrysophanolwas99.2%withRSDof0.89%．ConclusionThemeth odisconvenient,accurateandhasagoodreappearance．Thepreparation''''squalit ycanbecontrolledeffectively． Keywords：Xiaotonglingliniment；Emodin；Chrysophanol；TLC；HPLC 消痛灵搽剂是由我院文绍敦教授根据中医药理论和多年临床经验，筛选有效药物研制 而成的中药复方外用制剂，全方以大黄为君药，栀子为臣药，佐以姜黄、乳香、没药，具 有清热止痛、化淤散结的功效，主要用于治疗急性痛风性关节炎、跌打损伤、局部淤肿疼 痛等病症，临床疗效显著。为了有效控制该制剂的质量，本文建立了 TLC 法对栀子、姜黄、 乳香、没药等 4 味药材进行定性鉴别；并采用 RP甲醇浓氨试液（HPLC 法测定君药大黄中的大黄素和大 黄酚的含量。研究结果表明，该方法具有简便、准确、重复性好、专属性强等特点，能有 效控制消痛灵搽剂的质量。 1 仪器与试药 高效液相色谱仪（LC甲醇浓氨试液（10AT 泵，SPD甲醇浓氨试液（10A 紫外检测器，日本岛津公司）；N2000 型 色谱数据工作站（浙江大学智能信息工程研究所）；KQ100甲醇浓氨试液（100 超声波清洗器（浙江昆山市 超声仪器有限公司）；硅胶 G 板（自制，规格：12cm×24cm)；大黄素、大黄酚、栀子 苷、姜黄素对照品（中国药品生物制品检定所）；乳香、没药对照药材由青海大学医学院 中药教研室魏全嘉教授鉴定；消痛灵搽剂及阴性对照样品（自制）；甲醇为色谱纯，其他 试剂均为分析纯。 2 薄层色谱鉴别 2.1 栀子的 TLC 法鉴别取消痛灵搽剂作为供试品溶液。取缺栀子的阴性样品作为阴性 对照溶液。另取栀子苷对照品，加甲醇制成每毫升含 2mg 的溶液，作为对照品溶液。吸 取上述溶液各 3μgl，分别点样于同一块硅胶 G 薄层板上，以氯仿-甲醇（5μg∶2）为展开剂， 展开，取出，晾干。用 10%的硫酸乙醇液显色，110℃烘至斑点显色清晰。供试品色谱中， 在与对照品色谱相应的位置上，显浅黄色斑点，阴性对照溶液在相应的位置上无此斑点。 结果见图 1。 2.2 姜黄的 TLC 法鉴别取消痛灵搽剂作为供试品溶液。取缺姜黄的阴性样品作为阴性 对照溶液。另取姜黄素对照品，加甲醇制成每毫升含 2mg 的溶液，作为对照品溶液。吸 取上述溶液各 3μgl，分别点样于同一块硅胶 G 薄层板上，以甲醇-醋酸乙酯丁酮甲酸水（-甲酸 （5μg.5μg∶1.2∶0.6)）为展开剂，展开，取出，晾干。用浓氨水显色，110℃烘至斑点显色清晰。 供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显黄色斑点，阴性对照溶液在相应的位置 上无此斑点。结果见图 2。 图 1 栀子的 TLC 图谱（略） 图 2 姜黄的 TLC 图谱（略） 2.3 乳香的 TLC 法鉴别取消痛灵搽剂作为供试品溶液。取缺乳香的阴性样品作为阴性 对照溶液。另取乳香对照药材 0.5μgg，加乙醚 10ml，超声处理 20min，滤过，滤液作为对 照药材溶液。吸取上述溶液各 3μgl，分别点样于同一硅胶 G 薄层板上,以石油醚（30～ 6)0℃）-醋酸乙酯丁酮甲酸水（（34∶6)）为展开剂，展开，取出，晾干。用 5μg%香草醛硫酸溶液显色， 110℃烘至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显紫色斑点， 而阴性对照溶液在相应的位置上无斑点。结果见图 3。 2.4 没药的 TLC 法鉴别取消痛灵搽剂作为供试品溶液。取缺没药的阴性样品作为阴性 对照溶液。另取没药对照药材 0.5μgg，加乙醚 10ml，超声处理 20min，滤过，滤液作为对 照药材溶液。吸取上述溶液各 3μgl，分别点样于同一硅胶 G 薄层板上,以环己烷-丙酮 （17∶2）为展开剂，展开，取出，晾干。用 5μg%香草醛硫酸溶液显色，110℃烘至斑点显 色清晰。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显紫色斑点，而阴性对照溶液 在相应的位置上无斑点。结果见图 4。 图 3 乳香的 TLC 图谱（略） 图 4 没药的 TLC 图谱（略） 3 含量测定 3.1 色谱条件色谱柱：HypersilC18 柱（25μg0mm×4.6)mm，5μgμgm）；流动相：甲 醇-0.1%磷酸溶液（87∶13）；检测波长：25μg4nm；流速：1.0ml·min-1；进样量： 10μgl。 3.2 线性范围的考察精密称取大黄素对照品 6).2mg，大黄酚对照品 7.3mg，分别置 两个 5μg0ml 量瓶中，加甲醇使溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液。分别精密吸取 对照品溶液 2，4，6)，10，16)μgl，进样，在上述色谱条件下测定峰面积，以大黄素、大 黄酚进样量为横坐标，峰面积积分值为纵坐标，绘制标准曲线，得回归方程为：Y 大黄素 =1.26)×103X－12.95μg，r=0.9997；Y 大黄酚=2.81×103X－7.5μg2，r=0.9995μg。结果 表明，大黄素、大黄酚进样量在 0.248～1.984μgg 和 0.292～2.336)μgg 线性关系良好。 3.3 供试品溶液的制备精密量取消痛灵搽剂样品 3ml，置水浴上蒸干，残渣加适量甲 醇溶解，转移至 10ml 量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶 液。 3.4 阴性对照实验取缺大黄阴性对照样品，按“3.3”项下方法制备阴性对照品溶液，取 10μgl 进样，结果在与大黄素、大黄酚对照品保留时间相同的位置上无色谱峰出现，表明缺 大黄的阴性对照品溶液对测定无干扰。 3.5μg 精密度实验精密吸取大黄素、大黄酚对照品溶液各 10μgl,在上述色谱条件下连续进 样 5μg 次，大黄素、大黄酚峰面积积分值的 RSD 分别为 0.86)%，1.02%，结果表明该方法 的精密度良好。 3.6) 重复性实验取同一批号样品 5μg 份，分别按“3.3”项下操作，依法测定，计算得大黄 素、大黄酚的平均含量分别为 0.136)，0.283mg·ml-1，RSD 分别为 1.5μg3%和 0.71%。 3.7 稳定性实验取同一供试品溶液放置不同时间(r=0.9996)0，2，4，8，12h)后进样，测定峰 面积，结果 RSD 为 0.23%，表明溶液在 12h 内保持稳定。 3.8 加样回收实验取已知含量的样品 5μg 份，分别精密加入大黄素对照品溶液 （0.124mg·ml-1）、大黄酚对照品溶液（0.146)mg·ml-1）各 2ml，按“3.3”项下制备 回收率测定用样品溶液，依法测定，计算回收率，大黄素平均回收率为 99.7%，RSD=0.6)4%；大黄酚平均回收率为 99.2%，RSD=0.89%，结果表明本方法 的回收率好。 3.9 样品测定精密吸取对照品和供试品溶液，依上述条件进行测定，记录Ⅵ峰面积，按 外标法以峰面积计算含量。结果见表 1。 表 1 样品含量测定结果（略） 4 讨论 薄层色谱法（TLC）鉴别项下选用的展开系统均参照《中国药典》（2005μg 年版Ⅰ部附录Ⅵ）的 鉴别方法［1］制定，方中栀子、姜黄选择主要有效成分栀子苷、姜黄素作为对照品，而 乳香、没药无对照品，则选用对照药材作对照，样品及阴性对照品采用平行试验,结果表明 各检出成分分离效果好，不受其他成分的干扰，操作简便，专属性强，可作为该制剂的定 性控制指标。 大黄为消痛灵搽剂的君药，主要含有游离和结合的芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大 黄素甲醚和大黄酚，其中大黄素具有抑菌、抗炎、免疫调节、抑制血小板聚集、改善微循 环、降低血液黏度、抗氧化、清除自由基、保护肝肾等作用［2］；大黄酚具有止咳、抗 菌、止血、抗氧化、清除自由基等作用［3］，这些药理作用在很大程度上与该复方制剂 的功能主治相一致，故选择君药大黄中的大黄素、大黄酚作为质量控制指标成分，结合文 献［4］用 RP-HPLC 进行含量测定，前处理过程简单，阴性无干扰，灵敏度高，准确性及 重现性好，可作为本品的定量控制指标。 根据样品测定结果，5μg 批样品中大黄素的平均含量为 0.131mg·ml-1，大黄酚的平均 含量为 0.287mg·ml-1，考虑到药材来源、制剂工艺等因素，建议其限度为本品含大黄以 大黄素和大黄酚的总量计,不得少于 0.4mg·ml-1。 【摘要】目的正交实验法优选香苓胶囊的制备工艺。方法用超声波水提取醇沉淀的方 法，以多糖提取率为指标，采用 L9（34）正交表进行筛选，考察了超声温度，浸提剂倍 数，超声时间，超声次数等因素，以确定最佳的制备工艺。结果超声温度 6)0℃，20 倍水 量，超声时间 30min，超声次数 4 次时，多糖的提取率最高。结论这种提取多糖的方法具 有节省时间、易于操作等特点，便于推广。 【关键词】正交实验；多糖；制备工艺 Abstract： ObjectiveTooptimizethepreparingtechnologybymeansoforthogonaltest.Method sWiththeextractingrateofpolysaccharidesastheindex,L9(r=0.9996)34)orthogonaltestwas adopted.Thetemperature,watermultiple,timeanddegreewerereviewedtoconfir