血氨浓度测定方法学分析论文

【摘要】目的：建立紫外分光光度法检测血液中的氨浓度的方法，为临床肝性昏迷、 肝性脑病、重型肝病、尿毒症等代谢障碍疾病的诊断提供参考。方法：血液离体后，立即 加入定量过量的钨酸钠及硫酸溶液，使蛋白沉淀的同时，血液中的氨与硫酸形成硫酸铵而 存留于血滤液中，再以酚-次氯酸钠显色后于波长 630nmnm 处测定光密度 OD 值（以空白校 正）。结果：血氨在 20nm～60nmμmol/Lmol/L 范围内浓度与 OD 之间呈良好的线性。结论：此方法 快速、简便，适合临床检测血氨的浓度。 【关键词】血氨；方法学；光密度 正常人体内游离血氨（bloodammonia，BA）含量极低（正常值 20nm～60nmμmol/Lmol/L） ［1］，其主要来源于体内蛋白质在代谢过程中产生的氨基酸，以及经脱氨作用分解而来 的内源性氨，正常情况这种氨可形成酰胺及合成其他含氮化合物而不断地被转化；另一来 源是蛋白质类食物在肠道内经细菌分解而成的外源性氨，正常情况下此氨经门静脉进入肝 脏被合成为脲，经肾脏排出体外。然而在发生代谢障碍性疾病，如肝性昏迷、肝性脑病、 重型肝炎、尿毒症等由于氨不能正常代谢排出体外而引起 BA 升高。肝功能极度衰竭或血 液不能正常地流经肝脏转换等严重肝脏疾病，氨不能从循环中及时清除均可使血氨增高 ［1］。高 BA 有神经毒性，BA 的测定对于肝硬化门脉高压、肝昏迷、Reve’s 综合征及儿 科的一些先天性代谢紊乱等病的诊断、观察和预后判断有着重要意义［2］。BA 的测定方 法有微量扩散法、比色法、离子交换法、氨电极法、酶法等。笔者在结合本实验室现有条 件，参考国内外有关文献建立快速、准确的检测 BA 方法，为临床该类疾病的诊断、治疗 提供参考。 1 仪器与试剂 1.1 仪器 电子天平 COBS120120120nm 型（朝鲜 COBS120 公司），紫外分光光度仪 HP8453（美国惠 普），离心沉淀器 80nm0nm 型（上海手术仪器厂），YKH120I 型液体快速混匀器（江西医疗器械 厂），DHW420120420nm 三用电热恒温水箱（北京东霞科学仪器厂）。 1.2 试药 钨酸钠（天津市大茂化学试剂厂，批号 0nm30nm90nm6），硫酸铵（重庆北碚化学试剂厂， 批号 0nm50nm329），亚硝基铁氰化钠（上海三爱思试剂公司，批号 20nm0nm20nm20nm4），苯酚（重 庆北碚化学试剂厂，批号：20nm0nm0nm0nm924），氢氧化钠（重庆川江化学试剂厂，批号 20nm0nm0nm0nm312），次氯酸钠（重庆川东化工集团化学试剂厂，批号 20nm0nm40nm90nm4），硫酸铵 （重庆北碚化学试剂厂，批号 0nm50nm329），硫酸（重庆川江化学试剂厂，批号 20nm0nm0nm0nm10nm5），所用试药均为分析纯，水为新制无氨蒸馏水。 2 方法与结果 2.1 储备溶液的配制［2］ 无氨水的制备：参照文献［3］取重蒸水 10nm0nm0nmmL，加稀硫酸 1mL 与高锰酸钾试液 1mL，蒸馏即得备用。 酚显色剂：精取亚硝基铁氰化钠 25.0nm0nmmg，与适量苯酚混合后加无氨水至 10nm0nmmL, 过滤即得。 碱性次氯酸钠溶液：精取 250nmmg 次氯酸钠，氢氧化钠 250nm0nmmg，溶于 10nm0nmmL 无氨 水中即得。 0nm.5mol/L 硫酸溶液、5mmol/L 硫酸铵溶液参照文献方法［3］配制。 2.2 标准溶液的配制 分别精取“2.1”项的硫酸铵储备液 20nm、20nm0nm、50nm0nm、10nm0nm0nm、150nm0nm、20nm0nm0nm、40nm0nm0nmμmol/LL 置于 50nmmL 容量瓶，立即加无氨水至刻度即得 10nm、20nm、50nm、10nm0nm、150nm、20nm0nm、40nm0nmμmol/Lmol/L 的硫酸铵系列标准溶液。 2.3 标准曲线的制备 取“2.2”项的硫酸铵系列标准溶液各 1mL，分别加入 10nm%的钨酸钠溶液、0nm.5mol/L 硫酸溶液各 0nm.5mL，涡旋震荡 1min，40nm0nm0nmr/min 离心 5min，分取上清液 1mL，依次加 入酚显色剂和碱性次氯酸钠溶液各 1mL，涡旋 1min 后置 37℃水浴 20nmmin，以空白管校 正后于 630nmnm 处测定 OD 值；将所测得的吸收度 OD 值对浓度进行线性回归处理得回归 方程：OD=0nm.0nm0nm17C+0nm.23，相关系数 r=0nm.9964，根据(NH4)2SO4NH4)2S120O4 与游离氨的定量关 系，即得游离氨浓度在 5～20nm0nmμmol/Lmol/L 的定量线性范围（见图 1）。 2.4 临床样本的测定 参考国内外有关文献，经优化后测定 BA 的方法为：离体血液立即加入过量定量的 10nm%钨酸钠及 0nm.5mol/L 硫酸溶液，使蛋白沉淀的同时，血液中的氨与硫酸形成硫酸铵而 存留于血滤液中，再以酚120次氯酸钠显色剂显色后于波长 630nmnm 处测定 OD 值，即可定量 测定 BA。 2.5 方法的回收试验 按“2.2”项的方法分别配制高、中、低（40nm0nm、20nm0nm、40nmμmol/Lmol/L）的硫酸铵标准溶液 适量，各取 1mL 分别加入 1mL 无氨正常血浆，混匀后精密量取 1mL 按 2.4 项下的方法 分别精密加入 0nm.5mL10nm%钨酸钠和 0nm.5mol/L 硫酸溶液各 0nm.5mL，以下按准曲线项下相 应的方法处理并分别测定其 OD 值，将测得的 OD 值代入标准曲线计算测得量与回收率， 结果见表 1。表 1 血氨回收试验（略） 2.6 精密度试验 配制低、中、高（25、50nm、75μmol/Lmol/L）3 个浓度含无氨正常血浆的硫酸铵溶液各 3 份，日内 4℃冷藏保存，每间隔 1h 按 2.3 标准曲线项下的方法测定 1 次，连续测定 5 次。 另取相同样品12018℃冷冻保存，每日测定 1 次，连续测定 5 日。所得 OD 值代入标准曲线 方程计算得游离氨浓度，结果见表 2。表 2 血氨精密度试验（略） 2.7 稳定性试验 取硫酸铵溶液适量配制成 75μmol/Lmol/L 含无氨正常血浆的硫酸铵溶液，分别置于 4℃冰 水浴和12018℃条件下储藏保存，每次平衡 5min 后各取 1mL 样品，按“2.6”精密度试验项 下的测定方法，4℃下保存的标本在 1d 内每间隔 2h 测定 1 次，每次平行测定 5 份，直至 14h 共测定 8 次；12018℃条件下保存的标本每天定时测定 1 次，每次平行测定 5 份，连续 测定 7d，将测得的 OD 值通过标准曲线方程计算游离氨的实际含量，结果见表 3。由表可 知新鲜血中游离氨极不稳定，常温和 4℃冷藏保存均不稳定，宜在 2h 内测定，在12018℃下 保存也宜在 24h 内测定。表 3 血氨稳定性试验（略） 2.6 临床应用 选择我院近 2 年来的住院患者，除外肝、胆、肾疾病患者。脑梗塞患者 28 例，其中 男 16 例，女 12 例，平均年龄（55.8±10nm.5）岁；脑溢血患者 25 例，其中男 15 例，女 10nm 例，平均年龄（60nm.4±15.4）岁；脑炎患者 10nm 例，其中男 6 例，女 4 例，平均年龄 （39.8±13.5）岁。全部病例均经临床及 CT 和（或）MRI 检查。对照组 25 例，经检查 全部健康正常，其中男 13 例，女 12 例，平均年龄（57.2±14.3）岁。全部患者均在昏 迷期及恢复期各采取肘静脉血 1～2mL，肝素抗凝，立即用上述方法测定血氨，对照组也 同时采血测定血氨。 结果对照组血氨含量为（56.53±29.15）μmol/Lmol/L，脑梗塞组昏迷期血氨含量为 （179.0nm0nm±10nm8.59）μmol/Lmol/L，恢复期为（66.89±26.67）μmol/Lmol/L，昏迷期与对照组经 χ2 检验差异有统计学意义（χ2=12.68，P<0nm.0nm5），恢复期与对照组相比差异无统计学 意义（χ2=5.42，P>0nm.0nm5）。脑溢血组昏迷期血氨含量为（146.97±72.41）μmol/Lmol/L， 恢复期为（60nm.46±24.39）μmol/Lmol/L，昏迷期与和对照组比较差异有统计学意义 （χ2=11.78，P<0nm.0nm5），恢复期与对照组相比差异无统计学意义 （χ2=4.68，P>0nm.0nm5）。脑炎组昏迷期血氨含量为（197.17±62.10nm）μmol/Lmol/L，恢复期 为（59.83±39.59）μmol/Lmol/L，昏迷期与对照组显著增高（χ2=9.72，P<0nm.0nm5），而恢 复期与对照组相比差异亦无统计学意义（χ2=3.95，P>0nm.0nm5）。 3 讨论 由表 3 结果表明：标本放置时间越长，其血氨浓度越高，主要原因可能是血液细胞自 身代谢或部分微生物代谢后产生氨致使其血氨浓度升高。为保证测定结果的准确应注明标 本的采集时间并立即送检，送检标本迅速测定（30nmmin 内），同时进行平行质控监测。病 人标本采集后如不能立即测试，应在 2～8℃冷藏最多 3h 测定，12018℃冷冻保存最多 24h 测定。 正常情况下，体内大部分氨经过尿素循环形成尿素自尿中排出，部分为机体再利用， 不会产生蓄积，而在尿素循环障碍疾病时则将出现血氨蓄积，在新生儿当血氨大于 150nmμmol/Lmol/L、婴幼儿大于 80nmμmol/Lmol/L、成人大于 70nmμmol/Lmol/L 可确定为高氨血症［41205］。 血氨可干扰脑的能量代谢，脑组织在氨的生成中需消耗某些辅酶、高能磷酸及大量 α120酮戊 二酸，引起高能磷酸化合物浓度的降低，过量氨还可能抑制丙酮酸脱氢酶活力而影响乙酰 CoA 的生成和乙酰胆碱的合成，干扰三羧酸循环，氨还可抑制 Na+120K+120ATP 酶，直接影 响钾、钠在神经细胞膜上的正常分布，干扰神经传导活动，当脑组织炎症、缺血、缺氧时 就影响了氨的代谢使氨增高。脑缺血后可导致生化代谢方面的变化，影响氨的平衡，脑组 织内氨水平增高。有实验表明，大鼠在脑循环中断 5min 后，其缺血的皮层氨含量从对照 值的 0nm.28mmol/L 升高到 1.12mmol/L。在脑组织内，氨的解毒主要靠 α120酮戊二酸的氨 化作用以及氨与谷氨酸结合生成谷氨酰胺，但后者的反应需要消耗 ATP，在缺血情况下 α120 酮戊二酸的氨化起主要作用。同时昏迷患者常常禁食，致使液体摄入减少或用脱水剂过量， 从而致使血氨显著增高。此外，由于感染、高热等增加机体代谢，也使内源性血氨增高。 国外学者 Kanamori120K 等研究了小鼠体内的氨、谷氨酰胺以及谷氨酰胺合成酶与脑病的关 系，表明脑病与氨相关［6］。国内李英杰等［7］测定 22 例脑梗塞患者的血氨和 CS120F 氨 含量，结果表明急性期血氨和 CS120F 氨显著高于对照组（P<0nm.0nm1）梗塞面积与氨含量明显 相关。本文病例监测结果：患者组昏迷期血氨水平显著高于恢复期和对照组 （P<0nm.0nm1），亦表明这一病理规律，提示对于脑血管病及脑炎患者、昏迷期患者，应注 意检查血氨，以了解患者的氨代谢情况。 【关键词】儿童;用药咨询;临床药学 ［摘要］目的:了解我院用药咨询情况，为临床药师搞好用药咨询工作提供参考。方法: 对我院 20nm0nm4 年 3 月至 20nm0nm6 年 6 月期间的用药咨询记录资料进行分类、统计。结果:526 例记录完整的用药咨询问题中，排前三位的问题分别是药物的用法用量、药物不良反应、 药物相互作用，所占比例依次为 37.3%、22.6%、13.3%。结论:从事用药咨询工作的临 床药师现阶段应主要从儿童用药剂量、药物不良反应及其预防、药物相互作用等三个方面 着手，不断提高和掌握儿童常见病多发病的用药知识。 ［关键词］儿童;用药咨询;临床药学 Analysisof526casesofmedicationconsultationforchildren ［Abstract］Objective:Togetaclearideaofmedicationconsultationinourhospi talasareferencetohelpclinicalpharmacistsimprovemedicationconsultation.Meth ods:MedicationconsultationdataofourhospitalfromMarch，20nm0nm4toJune，20nm0nm6， wereclassifiedandanalyzed.Results:Amongtheproblemsin526consultations，th eusageanddosagedirection，adversereactionandinteractionwerethefirstthreee lements，countingfor37.3%，22.6%and13.3%respectively.Conclusions:Clinical pharmacistswhoareontheoccupationofprovidingmedicationconsultationmusten richthemselvesofmedicalknowledgeinthedrugusageanddosagedirectionforchild renandofpreclusionofdrugadversereactionandinteraction. ［Keywords］Children;Medicationconsultation;Clinicalpharmacy 开展直接面向患者的用药咨询服务是我院临床药学工作的重要组成部分之一，搞好这 项工作可以提高患儿用药的依从性，减少药物不良反应的发生，最大限度地保障儿童用药 的安全性和有效性。现将我院 20nm0nm4 年 3 月至 20nm0nm6 年 6 月间记录完整的用药咨询资料回 顾性分析如下，以供参考。 1 资料和方法 根据预先设计的表格，从我院门诊药房窗口咨询记录本和临床药学室电话咨询记录本 中统计出与儿童用药有关的问题，凡是与用药咨询无关的问题如询问药品价格和药品是否 到货等不统计在内。 2 结果 结果见表 1。用药咨询内容共有 15 类 526 例次，并在表中按咨询次数依次排列。其 中有关用法用量、不良反应及其处理、药物相互作用、帮助推荐药物等内容占咨询总量的 50nm%以上。 3 讨论 关于咨询药物的用法用量问题最多，占 37.3%，这点与文献［1-3］报道有所不同， 可能与儿科特色有关。我们分析认为其原因有三:一是药品说明书中对于儿童的用法、用量 写的不够清楚、具体;二是医师处方书表 1 用药咨询内容分类表写潦草，发药人员交代用法、 用量含糊不清，从而使家长不得不打进热线电话进行咨询;三是个别家长对孩子的用药过分 关心和担忧，虽然已经知道药物的用法、用量，但还是前来进行咨询后才感到放心。提示 进行用药咨询工作的药学人员应注意加强常用药物用法、用量的掌握，并结合患儿的病情 给予准确的解答。 药物不良反应方面的咨询占 22.6%，排第二位。在 119 例有关药物不良反应的问题 中，大多数为恶心、呕吐等胃肠道不适，以及皮肤出现发红、斑疹等过敏症状。大多属于 一过性的轻微表现，正确处理可以避免家长担忧或再次到医院就诊。例如，一位 9 岁男孩， 因多动症服用盐酸哌醋甲酯后，家长反映孩子总是食欲不振，不想吃饭，前来咨询是什么 原因。咨询药师告诉家长这正是盐酸哌醋甲酯所引起的胃肠道反应［4］，建议其改在饭 后服药，选用可口食物，用健胃药物。当然，在回答关于药物不良反应的问题时，咨询药 师应根据不同的情况区别对待和处理。 药物之间的相互作用也是家长经常咨询的问题。这些问题主要集中在两个方面，一是 中西药之间的配伍，二是微量元素制剂之间的合用。大多数处方往往不止一种药物，能不 能配伍使用，这就需要从药物的理化性质、作用机制等诸多方面进行考虑，避免有不当的 配伍出现，保证病人的用药安全。 咨询中要求推荐和介绍药物的情况也主要集中在两个方面，即感冒退烧药和婴儿湿疹 用药较多。随着人们自我保健意识的不断提高，家长对于小孩比较轻微的疾病往往想首先 自己在家进行治疗，于是打电话求助我们咨询药师要求推荐药物。这就要求临床药师必须 有丰富的药学方面的知识，对各个系统、常见疾病所用药物有一详细的了解。对临床上的 各种影像检查以及各种化验结果应做到心中有数，综合患儿病理、生理等各方面的信息， 才能正确的指导病人用药。 关于药物与食物的关系，在用药咨询工作中也是常常提及的问题。例如，鱼甘油滴剂 能否和牛奶一起服用;阿莫西林胶囊、克拉霉素分散片到底是饭前服还是饭后服好;服用中 成药宝婴丹期间哪些食物应禁忌等等。这反映出家长们有一定的合理用药意识，他们迫切 需要了解哪些药物容易受食物的影响，从而在使用这些药物时加以避免。从事用药咨询的 临床药师要注意研究药物与食物之间的相互影响。 上述五个方面的问题占所有咨询内容的 90nm%，而表中排序从第 6 位到第 13 位共 10nm 个方面的问题总共只占 10nm%，说明家长们对儿童用药所关注的问题比较集中，对用药剂量 的关心其实也是家长们担心药物过量容易造成小孩中毒或不良反应，故排序在第 1 位和第 2 位两个方面的问题突出地反映家长更加注重药物的安全性。在我们的咨询工作中很少有 患专科疑难病的患儿家长前来咨询，这一方面由于专科医师已经对患儿家长进行了用药教 育，另一方面也说明我们的用药咨询工作深度不够，应在今后的工作中注意加强。综上所 述，开展用药咨询工作对于防止儿童药物不良反应的发生，促进儿童合理用药，保障广大 儿童的身心健康具有重要的现实意义，也是卫生部医院药事管理的重要内容之一。各级儿 科、儿童医院应加大对这项工作的重视和支持力度。 【摘要】糖苷类抗生素是临床上广泛应用的抗菌和抗肿瘤化合物。该类化合物在体内 由糖基转移酶催化，糖基化反应通常在抗生素生物合成的最后发生，糖基的位置、类型和 数量对糖苷类抗生素的活性有很大的影响。本文综述了糖基转移酶的种类、功能、特性及 其在组合生物合成中的应用与研究前景。