黄褐毛忍冬与红腺忍冬品质对比研究论文

［摘要］目的贵州黄褐毛忍冬与不同产地红腺忍冬总黄酮含量比较研究。方法采用紫 外分光光度法。结果贵州黄褐毛忍冬与不同产地红腺忍冬中总黄酮含量差异较大。结论贵 州各产地黄褐毛忍冬总黄酮含量均高于红腺忍冬的含量。 ［关键词］黄褐毛忍冬；红腺忍冬；芦丁；紫外分光光度法 ComparativestudyonthequalitybetweenLonicerafulvotomentosainGuizhou andLonicerahypoglaucainothermainplacesofproductioninChina ZENGZhen-xing，YANGYu-qin，ZHANGLi-yan，etal. GuiyangCollegeofTraditionalChineseMedicine，Guiyang550002，China ［Abstract］ObjectiveComparativeresearchofLonicerafulvotomentosaHsue tS.CChengfromGuizhouanddifferentcontentofLonicerahypoglaucaMiqofproduci ngarea.MethodsUVspectrophotometricwereusedintheexperiment.ResultsLonicerafulvotomentosa HsuetS.CChengfromGuizhouanddifferentcontentofLonicerahypoglaucaMiqofpr oducingareatotalflavonescontentdifferencerelativelysignificant.ConclusionThe contentoftotalyellowflavonesofLonicerafulvotomentosaHsuetS.CChenginevery producingareaofGuizhouishigherthantheLonicerahypoglaucaMiqofotherproduci ngregions. ［Keywords］Lonicerafulvotomentosa;Lonicerahypoglauca;rutin；UVspectrophotometric 黄褐毛忍冬为忍冬科植物黄褐毛忍冬（LonicerafulvotomentosaHsuetS.CCheng) 的干燥花蕾，贵州是主产区之一，资源丰富，被贵州省中药材、民族药材质量标准收载 ［1］。红腺忍冬为忍冬科植物红腺忍冬（LonicerahypoglaucaMiq）的干燥花蕾的干燥花蕾 ［2］，主产于河南、山东、云南等地。所含有效成分为黄酮类化合物、绿原酸等。本实 验采用紫外分光光度法，对贵州不同产地栽培黄褐毛忍冬及红腺忍冬的总黄酮含量进行对 比分析，为贵州黄褐毛忍冬收入为药典品种提供理论依据［3，4］。本实验以忍冬科植物 中总黄酮为指标，对贵州不同产地黄褐毛忍冬及红腺忍冬中总黄酮进行含量比较分析。为 贵州黄褐毛忍冬收入为药典品种提供理论依据。 1 仪器、试剂及材料 1.1 仪器 UV-2501 紫外分光光度计（日本岛津）的干燥花蕾，电子天平（梅特勒-托利多）的干燥花蕾，超声波清洗 器（北京医疗设备厂）的干燥花蕾。 1.2 试剂 芦丁对照品（中国药品生物制品检定所，供含量测定用；编号：0080-9504）的干燥花蕾，其他 试剂均为分析纯。 1.3 样品 黄褐毛忍冬采于贵州栽培地安龙、贞丰、兴义；河南、山东、云南红腺忍冬为市售。 经贵阳中医学院何顺志研究员鉴定为黄褐毛忍冬 （LonicerafulvotomentosaHsuetS.CCheng）的干燥花蕾的干燥花蕾，红腺忍冬 （LonicerahypoglaucaMiq）的干燥花蕾的干燥花蕾。 2 实验部分 2.1 对照品溶液的制备 精密称取芦丁对照品 7.68mg，置 50ml 容量瓶中，加 60%乙醇溶液，并稀释至刻度， 即得浓度为 0.1536mg/ml 的对照品溶液。 2.2 供试品溶液制备 精密称取各样品粉末（过 60 目筛）的干燥花蕾约 0.2g，置于 100ml 圆底烧瓶中，精密加入 60%乙醇 50ml，称定重量，水浴加热回流提取 1h，放冷，称重，用 60%乙醇补足重量， 摇匀，滤过。滤液作为供试品溶液。 2.3 检测波长的选择 取对照品溶液 1ml 置于 10ml 容量瓶中，加入 0.5%亚硝酸钠 1.0ml，10%硝酸铝 1.0ml，10%氢氧化钠 1.0ml，加入 60%乙醇稀释至刻度，摇匀，放置 15min；于 400~600nm 波长处扫描，结果表明，在 494nm 波长处有最大吸收，故选择 494nm 为 测定波长。 2.4 线性关系的考察 精密吸取对照品溶液 0、0.5、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0ml 分别置于 10ml 量瓶中， 分别加入 5%亚硝酸钠 1.0ml、10%硝酸铝 1.0ml、10%氢氧化钠 1.0ml，并加入 60% 乙醇稀释至刻度，摇匀，放置 15min，在 494nm 波长处测定。以浓度为横坐标，吸光度 为纵坐标，绘制标准曲线，得回归方程为：A=0.0107C-0.0115，r=0.9999。结果表明， 芦丁在 7.68~76.8μg/mlg/ml 范围内呈良好线性关系。 2.5 重现性实验 精密称取同一批号样品 5 份，分别按“供试品溶液制备”项下操作，按“样品测定”项下测 定，结果总黄酮的平均含量为：10.49%，RSD 为 1.01%。 2.6 稳定性实验 取供试品溶液按“样品测定”项下，分别放置 0、1、2、3h 测定，RSD 为 1.67%，结 果表明在 3h 内稳定。 2.7 回收率实验 取已知含量的样品 5 份，每份约 0.1g，精密称定，分别精密加入对照品溶液 4.0ml， 按“供试品溶液制备”项下操作，按“样品测定”项下测定，计算得平均回收率为 98.71%，RSD 为 0.52%，结果见表 1。表 1 回收率实验（略）的干燥花蕾注：对照品加入量为 0.3088mg 2.8 样品测定 精密吸取供试品溶液 1ml 置于 10ml 容量瓶中，加入 5%亚硝酸钠 1.0ml、10%硝酸 钠 1.0ml、10%氢氧化钠 1.0ml，用 60%乙醇稀释至刻度，摇匀，放置 15min，在 494nm 波长处测定，按回归方程计算含量，结果见表 2。表 2 不同产地总黄酮含量测定 结果（略）的干燥花蕾 3 讨论 实验结果表明：总黄酮含量分别是：安龙>贞丰（烘干）的干燥花蕾>兴义>河南>贞丰（叶：晒 干）的干燥花蕾>山东>贞丰（晒干）的干燥花蕾。河南、山东是红腺忍冬的主产区，属正品忍冬；贵州是黄褐 毛忍冬的主产区，资源丰富，现已有大面积栽种，经分析比较贵州黄褐毛忍冬的总黄酮含 量均高于红腺忍冬的总黄酮含量［5］。 【关键词】靶向给药；药剂学；药物载体 0 引言 常规剂型的药物经静脉、口服或局部注射后，药物分布于全身，真正到达治疗靶区的 药物量仅为给药量的小部分，而大部分药物在非靶区的分布不仅无治疗作用，还会带来毒 副作用.因此，药物新剂型的开发已成为现代药剂学发展的一个方向，其中靶向给药系统 （Targeteddrugdeliverysystem,TDDS）的干燥花蕾的研究已经成为药剂学研究热点［1］.TDDS 指一类能使药物浓集定位于病变组织、器官、细胞或细胞内的新型给药系统.靶向制剂具有 疗效高、药物用量少.毒副作用小等优点.理想的 TDDS 应在靶器官或作用部位释药，同时 全身摄取很少，这样，既可提高疗效，又可降低药物的毒副作用.TDDS 要求药物能到达靶 器官、靶细胞，甚至细胞内的结构，并要求有一定浓度的药物停留相当长的时间，以便发 挥药效.成功的 TDDS 应具备 3 个要素：定位蓄积、控制释药、无毒可生物降解.靶向制剂 包括被动靶向制剂、主动靶向制剂和物理化学靶向制剂 3 大类.目前，实现靶向给药的主要 方法有载体介导、受体介导、前药、化学传递系统等.现就靶向给药方法研究进展作一介绍. 1 载体介导的靶向给药 常用的靶向给药载体是各种微粒.微粒给药系统具有被动靶向的性能.有机药物经微粒 化可提高其生物利用度及制剂的均匀性、分散性和吸收性，改变其体内分布.微粒给药系统 包括脂质体(LS)LS)，纳米粒(LS)NP))或纳米囊(LS)NC)，微球(LS)MS)或微囊(LS)MC)，细胞和乳剂等.微粒 靶向于各器官的机制在于网状内皮系统(LS)RES)具有丰富的吞噬细胞，可将一定大小的微粒 (LS)0.1~3.0μg/mlm)作为异物摄取于肝、脾；较大的微粒(LS)7~30μg/mlm)不能滤过毛细血管床，被机 械截留于肺部；而小于 50nm 的微粒可通过毛细血管末梢进入骨髓. 肝癌、肝炎等肝脏疾病是常见病和多发病，但目前药物治疗效果很不理想，其原因除 药物本身药理作用尚不够理想外，不能将药物有效地输送至肝脏的病变部位也是一重要原 因.将一些抗肿瘤、抗肝炎药物制备成微粒，给药后可增加药物的肝靶向性.米托蒽醌白蛋 白微球（DHAQBSAMS）的干燥花蕾的体内分布研究发现，给药 20min 时，DHAQBSAMS 和米托 蒽醌（DHAQ）的干燥花蕾在小鼠体内分布有显著差异，DHAQBSAMS 约有 80%的药物集中在肝脏， 而 85.9%以上的 DHAQ 存在于血液中［2］.张莉等［3］考察去甲斑蝥素（NCTD）的干燥花蕾微乳 的形态、粒径分布及生物安全性，研究 NCTD 微乳及其注射液在小鼠体内的组织分布，结 果表明，NCTD 微乳较 NCTD 注射液增强了药物的肝靶向性，降低了肾脏分布，在一定程 度上延长药物在小鼠体内的循环时间.纳米粒和纳米囊肝靶向制剂的研究报道较多，如氟尿 嘧啶、阿霉素、羟基喜树碱、狼毒乙素、环孢素等抗癌药物都被制成了纳米靶向制剂 ［4］.王剑红等［5］采用二步法制备米托蒽醌明胶微球，粒径在 5.1~25.0μg/mlm 范围的占 总数 87.36%，体外释药与原药相比延长了 4 倍.经小鼠体内分布试验表明具有明显的肺靶 向性，靶向效率增加了 3~35 倍，肺中药代动力学行为可用一室开放模型描述，平均滞留 时间延长 10h.在纳米粒表面上包封亲水性表面活性剂，或通过化学方法连接上聚乙二醇或 其衍生物，可以减少与网状内皮细胞膜的亲和性，从而避免网状内皮细胞的吞噬，提高毫 微粒对脑组织的靶向性.Gulyaev 等［6］以生物降解材料聚氰基丙烯酸丁酯为载体，以吐 温 80 为包封材料制备了阿霉素毫微粒，研究结果表明脑中阿霉素浓度是对照组的 60 倍. 一些易于分解的多肽或不能通过血脑屏障的药物（如达拉根、洛哌丁胺、筒箭毒碱）的干燥花蕾通过 制成包有吐温 80 的生物降解毫微粒在动物身上已取得一定的靶向治疗效果［7］.研究表 明粒径是影响微粒进入骨髓的关键因素，粒径越小越容易进入骨髓.彭应旭等［8］制得不 同粒径的柔红霉素聚氰基丙烯酸正丁酯毫微粒，小鼠尾静脉给药，小粒径组 （70±24）的干燥花蕾nm 骨髓内柔红霉素浓度是大粒径组（425±75）的干燥花蕾nm 的 1.58 倍.骨髓会因肿 瘤浸润、化疗药物或严重感染受到抑制.研究表明，多种生长因子，如人粒细胞集落刺激因 子（GCSF）的干燥花蕾，粒细胞巨噬细胞集落刺激因子（GMCSF）的干燥花蕾可促使骨髓细胞自我更新、分裂 增殖，并提高其活性.利用骨髓靶向载体可提高药物在骨髓内分布，并避免血象中的不良反 应.Gibaud 等［9］以聚氰基丙烯酸异丁酯、异己酯毫微粒为载体携带 GCSF，提高了其 在骨髓内的分布. 基因治疗是一种专一性的靶向治疗.基因治疗就是利用基因转移技术将外源重组基因或 核酸导入人体靶细胞内，以纠正基因缺陷或其表达异常.纳米颗粒作为基因载体具有一些显 著的优点.纳米颗粒能包裹、浓缩、保护核苷酸，使其免遭核酸酶的降解；比表面积大，具 有生物亲和性，易于在其表面耦联特异性的靶向分子，实现基因治疗的特异性；在循环系 统中的循环时间较普通颗粒明显延长，在一定时间内不会像普通颗粒那样迅速地被吞噬细 胞清除；让核苷酸缓慢释放，有效地延长作用时间，并维持有效的产物浓度，提高转染效 率和转染产物的生物利用度；代谢产物少，副作用小，无免疫排斥反应等. 2 受体介导的靶向给药 利用细胞表面的受体设计靶向给药系统是最常见的主动靶向给药系统.去唾液酸糖蛋白 受体（ASGP)R）的干燥花蕾是一种跨膜糖蛋白，它存在于哺乳动物的肝实质细胞上.其主要功能是去 除唾液酸糖蛋白和凋亡细胞、清除脂蛋白.研究发现，ASGP)R 能特异性地识别 N 乙酰氨基 半乳糖、半乳糖和乳糖，利用这些特性可以将一些外源的功能性物质经过半乳糖等修饰后， 定向地转入到肝细胞中发挥作用.Lee 等合成了三分枝 N 乙酰氨基半乳糖糖簇 YEE，它与肝 细胞的结合能力为乙酰氨基半乳糖单糖的 1 万倍.我们考察了半乳糖苷修饰的十六酸拉米夫 定酯固体脂质纳米粒（LAP)GSLN）的干燥花蕾的肝靶向性，其靶向效率为 4.66，比未修饰纳米粒的 靶向效率高 3.7 倍［10］.药物通过与大分子载体连接，再对载体进行半乳糖化，可以产 生较好的肝靶向效果.若能使药物直接半乳糖化，则可以简化耦联环节，提高靶向效率.这 一思路对蛋白类药物而言，较易实现.蛋白质或多肽(LS)分子质量在一定范围)在连接上半乳糖 后，都有可能成为受体结合的肝靶向性物质.小分子物质经类似途径能否靶向于肝，取决于 糖和药物密度、分子质量、摄取屏障等多方面因素.小分子药物共价连接乳糖或半乳糖，初 步揭示其靶向性并不好，有关机制和可行性尚待进一步探讨. 半乳糖基化壳聚糖（GC）的干燥花蕾与质粒 pEGFP)N1 混和制备成纳米微囊复合物，体外转染 SMMC7721 细胞.将含 1mg 质粒的纳米微囊经肝动脉和门静脉注射入犬体内，实验结果 表明半乳糖基化壳聚糖在体外有较高的转染率，在犬体内有肝靶向性，可用作肝靶向基因 治疗的载体［11］.大多数肿瘤细胞表面的叶酸受体数目和活性明显高于正常细胞.以叶酸 作为导向淋巴系统或肿瘤细胞的放射性核素的载体，同时将叶酸作为靶向肿瘤细胞的抗肿 瘤药物的载体已做了广泛的研究［12］. 表皮生长因子受体（EGFR）的干燥花蕾是一种跨膜糖蛋白，由原癌基因 cerbB1 所编码，是 erbB 受体家族之一，在多种肿瘤中观察到 EGFR 高水平的表达，如神经胶质细胞瘤、前 列腺癌、乳腺癌、胃癌、结直肠癌、卵巢癌和胸腺上皮癌等.针对富集 EGFR 的恶性肿瘤， 方华圣等［13］成功地建立了 EGFR 富集的恶性肿瘤的靶向基因治疗方法. 3 抗体介导的靶向给药 mAb 是药物良好的靶向性载体，将其通过共价交联或吸附到药物载体(LS)如脂质体、毫 微粒、微球、磁性载体等)或药物具有自身抗体(LS)如红细胞)或抗体与细胞毒分子形成结合物， 避免其对正常组织毒性，选择性发挥抗肿瘤作用.徐凤华等［14］利用己二酰肼制备腙键 连接的聚谷氨酸表阿霉素，然后使其与单抗交联制得偶合物.偶合物较好地保留了抗体活性， 体外细胞毒性较游离药物略有下降，但表现出单抗介导的靶细胞选择性杀伤作用，为其进 一步制备细胞靶向的肿瘤化疗药物奠定了基础. 用于治疗白血病的 CMA676 是由一种人源化的 mAbhp67.6 与新型的抗肿瘤抗生素 calicheamicin 的 N 乙酰 γ 衍生物偶联而成的［15］，当 CMA676 与 CD33 抗原相结合， 抗原抗体复合物迅速内在化，进入胞内后，calicheamicin 衍生物被水解释放，通过序列 特异性方式与 DNA 双螺旋的小沟结合，使脱氧核糖环中的氢原子发生转移，从而使 DNA 双链断裂，诱导细胞死亡［16］.EGFRmAb 可直接作用于 EGFR 的细胞外配体结合区， 阻滞配体的结合，如 IMCC225,ABXEGFR 和 EMD55900 等，能抑制细胞生长和存活率， 诱导细胞凋亡和抑制血管生成，曲妥珠单抗(LS)Trasruzumab)作用于 erbB2 的细胞外区域， 该药已获美国 FDA 批准用于转移性的乳腺癌的治疗［17］.IMCC225 具有增强细胞毒性 药物和放射治疗效应的作用，IMCC225 与拓扑特肯(LS)TP)T)的联合用于荷有人类结肠癌移植 体的裸鼠，能提高其生存率［18］.由第四军医大学和成都华神集团股份有限公司联合研 制的治疗肝癌新药碘［13lI］美妥昔单抗注射液，日前获得国家食品药品监督管理局颁发 的生产文号，即将上市.这是全球第一个专门用于治疗原发性肝癌的单抗导向同位素药物. 4 制成前体药物 一些药物与适当的载体反应制备成前体药物，给药后药物就会在特定部位释放，达到 靶向给药的目的.脑是人高级神经活动的指挥中枢，也是神经系统最复杂的部分.但由于血 脑屏障（bloodbrainbarrier,BBB）的干燥花蕾的存在，使得大部分治疗药物不能有效透过 BBB.含 OH,NH2,COOH 结构的脂溶性差的药物可通过酯化、酰胺化、氨甲基化、醚化、环化等化 学反应制成脂溶性大的前体药物，进入 CNS 后，其亲脂性基团通过生物转化而释放出活性 药物.张志荣等［19］合成了 3′,5′二辛酰基氟苷，并制备了其药质体，给小鼠静脉注射后 用 HP)LC 法测定药物在体内各组织的分布，结果表明，氟苷酯化后的前体药物的药质体有 良好的脑靶向性. 结肠内有大量的细菌，能产生许多独特的酶系，许多高分子材料在结肠被这些酶所降 解，而这些高分子材料作为药物载体在胃、小肠由于相应酶的缺乏不能被降解，这就保证 药物在胃和小肠不释放.如多糖、果胶、瓜耳胶、偶氮类聚合物和 α,β,γ 环糊精均可成为结 肠给药体系的载体材料.常利用结肠内厌氧环境，使偶氮键还原的特点制成偶氮前体药物. 柳氮磺胺吡啶是由 5 氨基水杨酸（5ASA）的干燥花蕾与磺胺吡啶用偶氮键连接而成.口服后在结肠释 药，发挥 5ASA 治疗溃疡性结肠炎的作用,减少其胃肠吸收产生的全身不良反应.5ASA 也与