复乐霜的制备研究论文

［摘要］目的：拟定复乐霜的制备工艺和质量控制标准。方法：确定复乐霜的制备工 艺流程，采用 HPLC 法对哈西奈德进行含量测定。结果：哈西奈德在浓度 8μg/ml~40μg/μg/ml~40μg/g/ml~40μg/μg/ml~40μg/g/ ml 范围内，浓度与峰面积之比的线性关系良好(r=0.9999)r=0μg/.9999)，平均回收率为 10μg/2.23%，RSD 为 0μg/.69％。结论：处方设计合理，质控方法可靠。 ［关键词］哈西奈德；制备；质量控制 PreparationandQualityControlofFuLeCream Abstract： ObjectiveTostudypreparationtechnology,qualitycontrolstandardofFuLecream.M ethodsFuLeCream''''spreparationtechnologywasconfirmedandcontentofmainco mponent(r=0.9999)Halcinonide)wasdetectedbyusingHPLC.ResultsHalcinonide''''scontent wasin8μg/ml~40μg/μg/ml~40μg/g/ml~40μg/μg/ml~40μg/g/ ml.Linearcorrelationofconcentrationcompareandpeakareawasgood(r=0.9999)r=0μg/.9999). Averagerecoverywas10μg/2.23%.RSD=0μg/.69%.ConclusionPerformulationisreasona ble,qualitycontrolisreliability. Keywords:Halcinonide;Preparation;Qualitycontrol 在现有治疗皮炎类外用制剂中，常见以单一激素类药或单一抗组胺类药的制剂，或以 激素类药与抗真菌类药组成的复方制剂。我院试验用肾上腺皮质激素类药哈西奈德和抗组 胺类药盐酸苯海拉明组成复方制剂，制备复乐霜，并建立起质量控制标准。现将其制备工 艺及质量标准报告如下。 1 仪器与试药 Waters515 型液相色谱仪(r=0.9999)美国 Waters515 泵、248μg/ml~40μg/7 检测器)；HW-20μg/0μg/0μg/ 型色谱 工作站(r=0.9999)上海千谱)；SuntekC18μg/ml~40μg/ 色谱柱；甲醇(r=0.9999)色谱纯)，哈西奈德(r=0.9999)天津天药药业股份有 限公司，批号 FCL0μg/40μg/60μg/1)，哈西奈德对照品(r=0.9999)中国药品生物制品检定所，批号 10μg/146950μg/2)，盐酸苯海拉明(r=0.9999)辽源市迪康药业有限公司，批号 20μg/0μg/50μg/8μg/ml~40μg/0μg/5)。 2 处方与制备 2.1 处方哈西奈德 1g、盐酸苯海拉明 10μg/g、氮酮 20μg/g、乳膏基质 969g 按处方量加入。 2.2 制备先将哈西奈德用氮酮加热溶解，然后加入到已加热溶解的油相中，得 A 组分； 再取盐酸苯海拉明用 50μg/ml 纯化水加热溶解，然后加入到已加热溶解的水相中，得 B 组分； 当 A、B 两组分的温度在 8μg/ml~40μg/5℃时，在搅拌下，将 A 组分加入到 B 组分中，继续搅拌到室温， 即得。 3 质量控制 3.1 性状本品为乳剂型基质的白色乳膏。 3.2 鉴别取本品 1g，加乙醇 5ml，微热，振摇，分取醇溶液，加硫氰化铬铵试液 1 滴， 即发生粉红色沉淀,为盐酸苯海拉明的鉴别。 3.3 检查应符合中国药典软膏剂下的各项规定。 3.4 哈西奈德的含量测定 3.4.1 供试品溶液的制备精密称取复乐霜 1.30μg/g 置 50μg/ml 烧杯中,加甲醇 30μg/ml，在 8μg/ml~40μg/0μg/℃水浴 2min 后超声提取 10μg/min，移置 50μg/ml 的量瓶中，放冷至室温，用甲醇稀释至 刻度，置水浴 2h 以上，取出后迅速滤过，滤液作为供试品溶液。 3.4.2 阴性对照品溶液的制备按制备工艺方法制备不含哈西奈德成分的阴性对照品， 按供试品溶液制备方法制备阴性对照品溶液。 3.4.3 对照品溶液的制备精密称取哈西奈德对照品为 0μg/.0μg/125g 置 10μg/0μg/ml 量瓶中,加甲 醇 76ml 合溶解,取 10μg/ml 加流动相至 50μg/ml(r=0.9999)25mg/ml)作对照品溶液。 3.4.4 色谱柱条件色谱柱为 SuntekC18μg/ml~40μg/(r=0.9999)4250μg/mm，5μg/ml~40μg/m)，流动相为甲醇水水 (r=0.9999)8μg/ml~40μg/0μg/∶20μg/)，流速 1.0μg/ml/min 柱压 2370μg/psi 柱温 24℃检测波长 238μg/ml~40μg/nmAUPS1.0μg/ 进样量 20μg/μg/ml~40μg/l。在此色谱条件下，阴性对照品、对照品及供试品的色谱图，如图 1。 图 1(r=0.9999)a)（略） 图 1(r=0.9999)b)（略） 图 1(r=0.9999)c)（略） 图 1 阴性对照品(r=0.9999)a)对照品(r=0.9999)b)与供试品(r=0.9999)c)的色谱图（略） 3.4.5 标准曲线的制备精密称取哈西奈德对照品 0μg/.0μg/412g 置 10μg/0μg/ml 的容量瓶中,加甲 醇 76ml 使溶解，加水至刻度，摇匀得线性试验的对照液。分别精密吸取 1.0μg/ml、2.0μg/ml、3.0μg/ml、4.0μg/ml、5.0μg/ml 至 50μg/ml 量瓶中，用流动相稀释至刻度。在上述 色谱条件下进行测定，以峰面积(r=0.9999)Y))对浓度(r=0.9999)X))进行线性回归，得直线方程为： Y)=1.3911×10μg/4+9.20μg/76×10μg/4X)r=0μg/.9999。说明哈西奈德在浓度 8μg/ml~40μg/μg/ml~40μg/g/ml~40μg/μg/ml~40μg/g/ml 范围内，浓度与峰面积比呈良好的线性关系。 3.4.6 精密度试验取同一对照品溶液连续进样 5 次，按上述色谱条件进行测定峰面积， 哈西奈德的 RSD 为 0μg/.51％。 3.4.7 重现性试验取同一批号样品 3 份，按供试品溶液制备的方法制备，依法测定哈 西奈德含量，RSD 值为 0μg/.52％，表明本法重现性较好。 3.4.8μg/ml~40μg/ 回收率试验上述 3 份供试品溶液各取 2ml 分别置 3 个 50μg/ml 量瓶中，各加入 3.0μg/ml 线性试验的对照液，加甲醇至刻度，照样品测定项下的方法分别测定含量，计算哈 西奈德的回收率，结果见表 1。 表 1 回收率试验结果（略） 3.4.9 样品含量测定取 3 个批号(r=0.9999)分别为 20μg/0μg/60μg/413、20μg/0μg/60μg/418μg/ml~40μg/、20μg/0μg/60μg/427)的复 乐霜，按样品液的制备方法配制出相应的样品液，取 20μg/μg/ml~40μg/l 进样，测定其样品含量。结果 分别为 97.12％、10μg/3.8μg/ml~40μg/％、10μg/3.1％(r=0.9999)占标示量％)。 3.5 稳定性实验将 3 批样品在常温下放置 6 个月，避光保存,其外观检查无酸败、异臭 和变色等变质现象，主药含量也无明显变化。 4 讨论 4.1 本试验采用肾上腺皮质激素类药哈西奈德和抗组胺类药盐酸苯海拉明组成复方制 剂，处方工艺有别于现有工艺，且制备工艺简单，制剂细腻、光滑、稳定。下一阶段将进 行该制剂在治疗皮炎类皮肤病的临床疗效观察。 4.2 在试验色谱条件下测定哈西奈德的含量能排除盐酸苯海拉明和乳膏基质的干扰， 哈西奈德在浓度 8μg/ml~40μg/μg/ml~40μg/g/ml~40μg/μg/ml~40μg/g/ml 范围内浓度与峰面积之比的线性关系良好，回收率高， 且重现性好，具有准确、可靠、灵敏等特点，对控制复乐霜的质量具有重要作用。 【摘要】免疫系统抑制肿瘤生长的同时肿瘤的恶性程度逐渐强化，这一过程被称作为 “肿瘤免疫编辑”.这一概念的是在对肿瘤免疫学认识不断深入的基础上提出的，分免疫清除、 免疫对抗、免疫逃逸 3 个阶段.现就肿瘤免疫编辑的 3 个过程及最新进展做一综述，有助于 设计更合理的方案，更好的防癌抗癌. 【关键词】免疫编辑；免疫清除；免疫对抗；免疫逃逸 0μg/ 引言 恶性肿瘤是现代社会人类常见的死亡原因之一.WHO 报告，20μg/0μg/0μg/ 年全球癌症死亡已 经超过了 60μg/0μg/ 万例，占全球死亡人数的 12％，在发达国家达 21％，在发展中国家达 9％，在中国达 1％［1］.肿瘤免疫编辑是指机体免疫系统杀伤肿瘤的同时，肿瘤的恶性程 度逐渐增加，导致免疫系统和肿瘤的力量对比失衡，最终可导致机体死亡的过程.随着现代 科学技术，如基因技术、转基因技术、单克隆抗体技术的发展，以及免疫缺陷动物模型的 建立，学者们可以从多个角度证实该设想的正确性.同时，实验研究还表明，免疫系统杀伤 肿瘤组织的同时也推动着肿瘤的恶性发展.免疫系统既可识别和杀伤肿瘤组织，又能推动肿 瘤组织的恶性化的程度增加，这种双重作用被人们认识后，肿瘤免疫编辑学说才正式被提 出［2-3］.通过多年实验和临床观察，华盛顿大学肿瘤研究中心又进一步提出了肿瘤免疫 编辑的 3 个过程，即免疫清除，免疫对抗和免疫逃逸［4］. 1 免疫清除 免疫清除是指机体免疫系统识别肿瘤组织，并且通过多种途径杀伤肿瘤组织的过程.在 该阶段，如果机体能成功清除肿瘤组织，肿瘤免疫编辑至此结束，而不涉及到免疫对抗和 免疫逃逸.免疫清除又可分为以下 4 个时期. 第 1 时期:固有免疫系统中的细胞和分子识别并杀伤新生的肿瘤组织.巨噬细胞、NK 细 胞、NKT 细胞、CD8μg/ml~40μg/+T 细胞和 B 细胞以及机体中原有的 IFN水γ,乳铁蛋白等分子参与了这 个反应［5-7］.肿瘤细胞表达的多种分子可以激活多种免疫细胞，如 MICA 可激发 NK 细 胞［8μg/ml~40μg/］.NKG2D 的受体可激活 NK 细胞和 Vγ9Vδ2Tγ9Vγ9Vδ2Tδ2T 细胞等，这些免疫细胞被激活后可杀 伤肿瘤细胞［8μg/ml~40μg/-13］. 第 2 时期:固有免疫系统对肿瘤的识别杀伤作用进一步扩大.首先，最初识别肿瘤的 IFN水γ 能够刺激机体产生 IL水12 等一些化学物质，这些化学物质能够趋化更多的固有免疫 细胞到达肿瘤组织［4］.并且，在细胞外基质重新塑造过程中产生的物质，也可诱导浸润 肿瘤的巨噬细胞产生少量的 IL水12.然后，IL水12 又可以刺激浸润肿瘤的 NK 细胞产生少量的 IFN水γ，产生的 IFN水γ 活化浸润在肿瘤组织的巨噬细胞产生大量的 IL水12，IL水12 刺激 NK 细胞产生大量的 IFN水γ.在这个正反馈过程中产生的 IFN水γ 可诱发依赖 IFN水γ 的肿瘤清除过 程.如 IFN水γ 可直接通过：①增加表面 MHC 抗原和肿瘤坏死因子表达，②抗肿瘤血管生成 等多种抗肿瘤作用；IFN水γ 还可间接通过：①上调 Fas/Fasl 分子的表达，从而下调免疫细 胞的凋亡，抑制肿瘤的恶性增殖［14］；②通过对 bcl水2 家族的 bcl水2，bcl水xS 和 BAK 蛋 白水平的调控来（前两种下调，后一种上调）起到抗肿瘤增殖的作用；③通过对 caspase 家族中的重要成员，如 caspase水1，caspase水3，caspase水7，cspase水8μg/ml~40μg/ 的调控从而起 到促进肿瘤细胞凋亡的作用.另外，Vγ9Vδ2Tγ9Vγ9Vδ2Tδ2T 细胞可产生直接溶解肿瘤细胞的细胞因子， 并且，IL水12 可维持 Vγ9Vδ2Tγ9Vγ9Vδ2Tδ2T 淋巴细胞生长所需内环境的稳定，并促进其生长.通过这种 方式，IL水12 也对肿瘤组织进行杀伤［15-16］.最新研究发现，淋巴因子激活的杀伤细胞 （LAK）也参与了固有免疫系统的抗肿瘤免疫反应.LAK 能杀伤和溶解对 NK 细胞敏感或抵 抗的肿瘤细胞，从而抑制肿瘤的生长［17］. 第 3 时期:在固有免疫系统杀伤肿瘤细胞的同时，适应性免疫系统也可被肿瘤细胞激活， 参与杀伤肿瘤组织的过程.在固有免疫系统杀伤肿瘤组织的过程中，浸润肿瘤组织的 NK 细 胞与肿瘤细胞的相互作用产生的细胞因子，可激活趋化到肿瘤组织的未成熟的树突状细胞， 使其成熟［18μg/ml~40μg/］.成熟的树突状细胞可直接摄取抗原，也可以通过热休克蛋白/肿瘤抗原复 合物间接摄取抗原，结合抗原的树突状细胞迁移到淋巴结，在淋巴结中激活肿瘤特异性 CD4+Th1 细胞，活化的 CD4+Th1 细胞通过协助交叉提呈树突状细胞 MHCI 类分子提呈 的抗原肽，活化 CD8μg/ml~40μg/+T 细胞.最新研究发现，次级淋巴细胞趋化因子（SLC）通过向肿瘤 组织募集淋巴细胞和成熟 DC，也参与了该时期的抗肿瘤免疫反应［19］.另外，TNF/ TNFR 家族的分子可活化 T 细胞并维持其功能，参与了该时期的抗肿瘤免疫反应［20μg/］. 第 4 时期:CD4+T 细胞产生的 IL水12 与宿主细胞产生的 IL水15 之间相互作用，可维持 肿瘤特异性 CD8μg/ml~40μg/+T 细胞的功能和活力.另外，机体的 IL水21 也可激活 CD8μg/ml~40μg/+T 细胞，使其 发挥对肿瘤组织的杀伤作用［21］.肿瘤特异性的 CD8μg/ml~40μg/+T 细胞可通过两种方式杀伤肿瘤组 织：①有效识别肿瘤抗原并对肿瘤组织进行直接杀伤，②产生大量的 IFN水γ 来诱导肿瘤细 胞死亡.此外，肿瘤间质内的淋巴细胞群 TIL，可识别自身的 MHC水I 类分子抗原复合物，并 分泌大量细胞因子，如 GM水CSF,IFN水C 及 TNF水A 等杀伤肿瘤［17］. 2 免疫对抗 机体的免疫系统虽能识别和杀伤肿瘤组织，但并不一定能将其完全清除.经过免疫清除 后，存活下来的弱免疫原性肿瘤细胞和免疫系统之间可以动态平衡的状态共处，这种共存 状态我们称之为免疫对抗.在免疫对抗阶段，淋巴细胞和 IFN水γ 等对肿瘤组织中的肿瘤细胞 进行选择杀伤［4］，识别并杀伤免疫原性强的肿瘤细胞，而弱免疫原性的肿瘤细胞的得 以保留.华盛顿大学肿瘤研究中心称这阶段是“残酷的达尔文式选择”［4］.尽管大量的肿瘤 细胞被杀死，但一个肿瘤组织含有许多基因不稳定的肿瘤细胞和突变的肿瘤细胞，这些对 免疫系统抵抗力高的肿瘤突变体能够与机体的免疫系统共存.通过这一过程，机体可以选择 出免疫原性低的肿瘤突变体. 3 免疫逃逸 一些肿瘤突变体可以经过免疫清除和免疫对抗后，能够适应机体的生存环境而存活下 来，进入免疫逃逸阶段.大量研究表明，肿瘤在形成过程中，可通过多重机制，逃避了免疫 系统的的监视，我们将这一过程称之为肿瘤组织的免疫逃逸.肿瘤细胞主要通过对 Fas/ FasL 的改变逃避免疫系统的攻击. 3.1Fas/FasL 介导的免疫逃逸 降肿瘤细胞 Fas 表达下或功能性表达 FasL 杀伤免疫细胞，及对 Fas/FasL 介导的凋亡 作用不敏感等，是肿瘤能够逃逸免疫系统攻击的机制之一.① 当肿瘤细胞 Fas 表达丧失与异 常时，则会导致 Fas 系统信号的破坏或无活性，不能与表达 FasL 的免疫活性细胞发生交 联，因而不能进行正常的凋亡作用，使肿瘤细胞逃避机体的免疫监视;② 当肿瘤细胞功能表 达 FasL 时，表达 Fas 的淋巴细胞攻击肿瘤细胞时，肿瘤细胞的 FasL 与淋巴细胞表达的 Fas 结合，结果凋亡的不是肿瘤细胞，而是淋巴细胞，从而有助于肿瘤细胞的免疫逃避. 3.2 其他方式介导的免疫逃逸 肿瘤细胞还可通过以下途径逃多脱免疫系统的攻击：①肿瘤抗原的免疫原性降低及抗 原调变；②肿瘤细胞表面 MHC 分子表达缺陷或表达量降低，如提呈抗原肽的 LMPTAP 缺 陷；③肿瘤细胞通过非经典的 HLA 分子(r=0.9999)HLA水G 和 HLA水E))抑制 NK 细胞的杀伤作用；④肿 瘤细胞可自分泌或旁分泌一些免疫抑制性细胞因子，如 IL水10μg/，TGF水β 等.这些因子可以削 弱免疫系统对肿瘤的排斥作用，也可激活免疫抑制细胞抑制免疫系统的杀伤作用；⑤肿瘤 细胞协同刺激分子及黏附分子表达下降；⑥肿瘤细胞释放出肿瘤抗原分子，与抗体结合成 复合物，通过抗体的 FC 段与淋巴细胞、NK 细胞、巨噬细胞的 FC 受体结合，从而封闭 ADCC 效应；⑦肿瘤细胞分泌可溶性活化受体的配体，如 NK 细胞活化受体的配体 (r=0.9999)NCR)，下调免疫细胞表面活化受体的表达，使免疫效应细胞功能丢失或下；⑧肿瘤对 HLAI 类分子的溶解；⑨肿瘤细胞 bcl水2 的过量的表达.此外，Ⅰ通过表达通过表达 PI水9,组织蛋白酶 B 抵抗穿孔素的作用,肿瘤死亡受体的脱落,T 细胞肿瘤特异性抗原的耐受（由宿主抗原提呈 细胞；髓样细胞或调节性 T 细胞造成的 T 细胞耐受或缺失）,T 细胞抑制，常由肿瘤衍生因 子，免疫抑制性髓样细胞或调节性 T 细胞导致和专职抗原提成细胞功能缺陷. 最近研究发现，除上述机制之外，HLA水G,肿瘤血管内皮细胞以及肿瘤分泌的 sMICA 分子也与肿瘤免疫逃逸有关［22-23］.另外，单核吞噬细胞可通过形成肿瘤细胞微环境和 削弱抗肿瘤的免疫反应，加快肿瘤的扩增和恶化［24］.肿瘤免疫编辑中，机体免疫系统 与肿瘤的相互作用依次分为免疫清除，免疫对抗和免疫逃逸.对肿瘤免疫编辑理解的不断深 入，有助于我们更好防癌治癌. 【摘要】目的探讨原发性干燥综合征（primarysjgren’ssyndrome,pSS）的临床特 点，了解成人 pSS 的临床表现。方法回顾性分析了门诊及住院诊治的 pSS36 例，其中男 性发病者 5 例，女性发病者 31 例。对其临床表现及实验室检查等进行分析。结果发病者 首发症状表现多样化，常见的有口眼干燥、关节疼痛、腮腺肿大、肾小管酸中毒及皮肤表 现等。结论 pSS 的临床症状多样化，易致误诊，应引起临床医师足够重视。 【关键词】干燥综合征；临床表现 Clinicalanalysisof36patientswithprimarysjgren’ssyndrome LUJun-yong,CHE)NJia-zhi，FANGQianhua.DepartmentofStomatology,FengtaiHospital,Beijing10μg/0μg/0μg/71,China ［Abstract］ObjectiveToassesstheclinicalfeaturesofprimarysjgren’ssyndro meinpatients.Ofthosepatients,5weremale,31female.Clinicalpictureandlaborato ryexaminationwereanalyzed.MethodsThirtysixpatientswithdefinitprimarysjogren’ssyndromewereanalyzedretrospectively. ResultsInpatients,initialclinicalsymptomswerevarious,drymouthanddryeyes,art hritisandarthralgia,parotidswelling,renaltubularabnormalitiesandrashweremor ecommon.Thefrequencyofpulmonaryabnormalitiesandneurologicinjurywereles s.Anti-SSA,anti-