山茱萸炮制历史研究论文

［关键词］山茱萸；炮制沿革；现代研究 随着现代医药科技的飞速发展，延缓衰老、健康长寿已为广大人民群众日益期盼，名 贵中药材山茱萸因含有丰富的营养和珍贵的保健成分以及微量元素日益成为科学研究热点。 山茱萸，别名山萸肉、枣皮、萸肉，为山茱萸科落叶小乔木植物山茱萸 CornusofficinalisSieb.etZucc.的干燥成熟果肉，是古代中、日、朝三国使用频率最高的 25 种植物药之一。山茱萸，首载《神农本草经》，主心下邪气，寒热，温中，逐寒湿痹， 去三虫、久服轻身［1］，具有补肝肾、益精气、降血糖、抗菌、利尿、降压和免疫功能 ［2］，为临床常用中药饮片，也是我国 40 多种用量最大的骨干中药之一。临床调剂多以 炮制(酒制、醋制)后使用，其炮制方法历史久远，炮制工艺各异。本文就其传统炮制理论、 炮制工艺，以及现代研究近况作一概述，为近一步探讨山茱萸炮制工艺提供参考。 1 山茱萸炮制历史沿革 山茱萸最早的炮制方法，首见汉代《金匮玉函经》载道有“不咀［2］”是有关山茱萸加 工较早的记载。南北朝刘宋时代雷在其《雷公炮炙论》中提出“凡欲使山茱萸，须去内核， 每修事，去核了，1 斤取内皮用，只称成 4 两已夹，缓火敖之方用。能壮元气，秘精，核 能滑精［3］”，其去核方法时至今日乃沿袭此法。唐代《新修本草》载：“九月、十月采实 阴干”［4］，《千金方》则又提出“多打碎［5］”用的要求。宋代山茱萸的加工炮制方法在 沿用去核方法的基础上，提出了用不同辅料炮制山茱萸，宋代《重修政和经史证类备用本 草》载：“雷公云：使山茱萸，须去内核，每修事，去核了，1 斤取肉皮用，只称 4 两已来， 缓火熬之，方用，秘精，核能滑精［6］”。《圣济总录》载：“山茱萸酒浸取肉焙”［7］， 另有“山茱萸打破炒，去核焙干、麸炒、酒拌等制法”。《苏沈良方》载：“炒［8］”，《百 问》又提出：“炮”的炮制方法，元代、明代在对其炮制程度提出了进一步要求，如元代 《活幼心书》中有：“酒浸润，蒸透”去核取皮的记载。明代《补增图经节要本草歌括》中 载：“去核捶碎，焙感”［9］。《炮炙全书》载：“酒润去核”［10］。《药性会元》载： “用温水泡一须，取肉去核，每斤只去 4 两”。缪希雍《炮炙大法》载：“酒拌炒锅上蒸，去 核了，1 斤，取肉皮用，只称成 4 两已夹，凡蒸药用柳木甑，去水八九寸，水不泛上余悉 准此”［11］。清代《本草崇原》载：“九月、十月采实，阴干去核用肉”［12］。《本草 述》载：“酒拌润去核取皮，酒蒸一炷香，雄羊油炙，盐炒”。《良朋汇集》中载有：“酒浸 一夜蒸焙干”。《增广验方新编》载蒸［13］，由此可见，在我国历史上对山茱萸炮制的 主要方法是“去核”、“酒蒸”。山茱萸现代炮制品种及方法有：山茱萸入药时全部去核，有黄 酒制山茱萸，醋制山茱萸，盐制山茱萸等制法，其中尤以黄酒蒸山茱萸为最常用，而且操 作工艺简单、宜操作、成本低、质量好等特点，但由于各地用药习惯不同，使用的炮制方 法也有所侧重。《中华人民共和国药典》2005 年版《山东省中药炮制规范》1990 年版收 载的方法为去核、酒蒸、酒蒸山萸肉：将净山萸肉用黄酒拌匀，闷润至黄酒被吸尽，放笼 屉内，共用武火加热，待“圆气”后攻用文火，蒸至呈紫黑色时(约 4h))，取出，摊晾至外皮 微干，再将原汁拌入，吸尽，干燥，或将山萸肉与黄酒装入蒸罐内，拌均匀密封，隔水加 热，炖至呈紫黑色时取出，摊晾至外皮微干，再将余汁拌入，吸尽，干燥［14］。《中华 药海》载：“取山萸肉，加黄酒拌匀，置适宜的容器内，密闭，隔水加热或蒸气加热至酒吸 尽，取出，干燥。每山萸肉 100kg,用黄酒 20kg，加热蒸 4h)～6h)，闷 6h)～8h)，使色紫 黑，取出，干燥。蒸制：取山萸肉，置笼屉或适宜的蒸器内，先用武火，待“圆气”后攻用 文火蒸至外表至紫黑色，熄火后闷过夜，取出，干燥。醋制：取山萸肉，加醋拌匀，蒸上 气为度，取出，干燥，每山萸肉 100kg 用醋 12.4kg，或取山萸肉，加醋拌匀闷透，取出， 干燥，取山萸肉，加醋拌匀，每山萸肉 100kg 用醋 18.6kg；盐制：取山萸肉，加盐水拌 匀，取出，干燥，每山萸肉 100kg 用食盐 1.25kg，水适量等方法”［15］。 2 山茱萸传统炮制理论及现代研究 山茱萸去核药用，首见《雷公炮炙论》中“核能滑精”［3］。因其主要功效是补益肝肾， 涩精(秘精)固脱等，所以之后的历代本草文献多以此作为山茱萸去核的理论依据，然而综 观历史文献，对此理论亦有持相反观点者，如《渑水燕谈录》曰：“山茱萸能补骨髓者，去 其核温涩能秘精气，精气不泄，乃所以补骨髓，今人剥取肉而弃之核，大非古人之意。 《医学衷中参西录》言：“其核与肉之性相反，用时勿须将核去净。近阅有报言核味涩，性 亦主收敛，服之恒使小便不利，椎破尝之，果有涩味者，其说或科言”。陶弘景亦曰：“山 茱萸出近道诸山中……既干，皮甚薄，当以合核为用也”，但这些观点，未能产生主导影响， 故时至今日，山茱萸仍去核使用［16］。《中华人民共和国药典》自 1963 年版就要求山 茱萸“除去果核”，但也有报道用果核山茱萸入药，反而导致患者病情加重。山茱萸果实的 化学成分主要含有环烯醚萜苷类、皂苷、熊果酸、齐墩果酸、没食子酸、糅质、乌苏酸、 多糖等为其有效成分，具有降低血糖、增强免疫、抗炎等药理作用［17］。化学成分分析 表明，山茱萸中疗效保健成分主要是齐墩果烷系皂苷(共水解后的苷元为熊果酸、齐墩果 酸)等物质［18］。有人对山茱萸肉与核的化学成分展开了研究，山茱萸肉与核的水溶性 成分均含没食子酸、苹果酸等多种相同成分，果肉没食子酸 0.0623%，(dl)苹果酸 0.907%,果核含没食子酸 0.01276%，(dl)苹果酸 0.544%。果核与果肉急性毒性实验表 明二者毒性都很低，果核 LD50(生药 90.8g／kg)比果肉 LD50(生药 53.5g／kg)更低， 二者对金黄色葡萄球菌和痢疾杆菌显示相同的抑菌作用［19］。山茱萸有胰岛素样作用， 乌苏酸是抗糖尿病的活性成分；山茱萸鞣酸能抑制脂质过氧化，阻止脂肪分解，也能抑制 肾上腺素和肾上腺皮质激素促进脂肪分解的作用；对于因化学疗法及放射疗法引起的白细 胞下降，有使其升高的作用；有抗实验性肝损害的作用；山茱萸能对抗组织胺、氯化钡及 胰腺胆碱所引起的肠管痉挛；没食子酸有止血、止泻作用；体外实验有抑菌作用；能杀死 腹水癌细胞［20］。山茱萸中含有大量的熊果酸、齐墩果酸等有效成分，经炮制后可使有 机酸在水中溶解度增加，特别是经酒制可增加树脂类成分的溶解度，使有效成分更易煎出 发挥疗效，从而达到增强温补肝肾的作用，所以，目前临床多用酒制品，并多用于补益剂。 郭富礼等报道［21］：“其炮制品除清蒸外加酒炮制的各种样品中熊果酸的含量均高于生 品，并以酒蒸品含量最高，炮制能升高山茱萸中熊果酸含量的原因可能是由于山茱萸中结 合型的熊果酸炮制后分解，也可能是其他成分经炮制后的转化使得熊果酸含量升高”，从而 达到增强滋补肝肾的功效，但也有报道［22］“清蒸山茱萸(山萸肉)、酒蒸山萸肉、生山萸 肉含有相同的化学成分。熊果酸含量测定表明，酒山萸肉熊果酸含量。”实验结果表明：山 茱萸经炮制后其生品及其炮制品中的熊果酸含量，生品与酒制品、醋制品、盐制品的含量 变化不大，而蒸制品含量有所下降，依次为酒制品＞生品＞醋制品＞盐制品＞蒸制品 ［23］。 3 小结 综上所述，笔者认为，山茱萸用药历史悠久，从炮制历史沿革看，其方法较多，自南 北朝、刘宋时代《雷公炮炙论》提出的去核炮制之后，唐、宋、元、明，清至今天仍对山 茱萸要求去核应用，在宋代《圣济总录》中首先提出了酒浸、酒拌、麸抄的炮制方法，元 代《活幼心书》中山茱萸的炮制对酒制的程度提出了要求。清代《本草述》中对山茱萸的 炮制酒蒸时间作出了规定，另有羊油炙、盐制等方法，现无人使用。综观山茱萸的炮制历 史，其炮制方法较多，但酒制方法至今使用，其炮制工艺、目的基本明确，今后应进一步 加强对山茱萸炮制后化学成分的研究上，比较不同炮制方法以及炮制工艺对其含量的影响， 为山茱萸最佳炮制工艺提供了理论依据，以发挥最佳药物疗效，更好地服务于患者。 ［摘要］目的：拟定复乐霜的制备工艺和质量控制标准。方法：确定复乐霜的制备工 艺流程，采用 HPLC 法对哈西奈德进行含量测定。结果：哈西奈德在浓度 8μg/ml~40μg/g/ml~40μg/ml~40μg/g/ ml 范围内，浓度与峰面积之比的线性关系良好(r=0.9999)，平均回收率为 102.23%，RSD 为 0.69％。结论：处方设计合理，质控方法可靠。 ［关键词］哈西奈德；制备；质量控制 PreparationandQualityControlofFuLeCream Abstract： ObjectiveTostudypreparationtech)nology,qualitycontrolstandardofFuLecream.M eth)odsFuLeCream''''spreparationtech)nologywasconfirmedandcontentofmainco mponent(Halcinonide)wasdetectedbyusingHPLC.ResultsHalcinonide''''scontent wasin8μg/ml~40μg/g/ml~40μg/ml~40μg/g/ ml.Linearcorrelationofconcentrationcompareandpeakareawasgood(r=0.9999). Averagerecoverywas102.23%.RSD=0.69%.ConclusionPerformulationisreasona ble,qualitycontrolisreliability. Keywords:Halcinonide;Preparation;Qualitycontrol 在现有治疗皮炎类外用制剂中，常见以单一激素类药或单一抗组胺类药的制剂，或以 激素类药与抗真菌类药组成的复方制剂。我院试验用肾上腺皮质激素类药哈西奈德和抗组 胺类药盐酸苯海拉明组成复方制剂，制备复乐霜，并建立起质量控制标准。现将其制备工 艺及质量标准报告如下。 1 仪器与试药 Waters515 型液相色谱仪(美国 Waters515 泵、2487 检测器)；HW-2000 型色谱 工作站(上海千谱)；SuntekC18 色谱柱；甲醇(色谱纯)，哈西奈德(天津天药药业股份有 限公司，批号 FCL040601)，哈西奈德对照品(中国药品生物制品检定所，批号 101469502)，盐酸苯海拉明(辽源市迪康药业有限公司，批号 20050805)。 2 处方与制备 2.1 处方哈西奈德 1g、盐酸苯海拉明 10g、氮酮 20g、乳膏基质 969g 按处方量加入。 2.2 制备先将哈西奈德用氮酮加热溶解，然后加入到已加热溶解的油相中，得 A 组分； 再取盐酸苯海拉明用 50ml 纯化水加热溶解，然后加入到已加热溶解的水相中，得 B 组分； 当 A、B 两组分的温度在 85℃时，在搅拌下，将 A 组分加入到 B 组分中，继续搅拌到室温， 即得。 3 质量控制 3.1 性状本品为乳剂型基质的白色乳膏。 3.2 鉴别取本品 1g，加乙醇 5ml，微热，振摇，分取醇溶液，加硫氰化铬铵试液 1 滴， 即发生粉红色沉淀,为盐酸苯海拉明的鉴别。 3.3 检查应符合中国药典软膏剂下的各项规定。 3.4 哈西奈德的含量测定 3.4.1 供试品溶液的制备精密称取复乐霜 1.30g 置 50ml 烧杯中,加甲醇 30ml，在 80℃水浴 2min 后超声提取 10min，移置 50ml 的量瓶中，放冷至室温，用甲醇稀释至 刻度，置水浴 2h) 以上，取出后迅速滤过，滤液作为供试品溶液。 3.4.2 阴性对照品溶液的制备按制备工艺方法制备不含哈西奈德成分的阴性对照品， 按供试品溶液制备方法制备阴性对照品溶液。 3.4.3 对照品溶液的制备精密称取哈西奈德对照品为 0.0125g 置 100ml 量瓶中,加甲 醇 76ml 合溶解,取 10ml 加流动相至 50ml(25mg/ml)作对照品溶液。 3.4.4 色谱柱条件色谱柱为 SuntekC18(4250mm，5μg/ml~40μg/m)，流动相为甲醇水 (80∶20)，流速 1.0ml/min 柱压 2370psi 柱温 24℃检测波长 238nmAUPS1.0 进样量 20μg/ml~40μg/l。在此色谱条件下，阴性对照品、对照品及供试品的色谱图，如图 1。 图 1(a)（略） 图 1(b)（略） 图 1(c)（略） 图 1 阴性对照品(a)对照品(b)与供试品(c)的色谱图（略） 3.4.5 标准曲线的制备精密称取哈西奈德对照品 0.0412g 置 100ml 的容量瓶中,加甲 醇 76ml 使溶解，加水至刻度，摇匀得线性试验的对照液。分别精密吸取 1.0ml、2.0ml、3.0ml、4.0ml、5.0ml 至 50ml 量瓶中，用流动相稀释至刻度。在上述 色谱条件下进行测定，以峰面积(Y))对浓度(X))进行线性回归，得直线方程为： Y)=1.3911×104+9.2076×104X)r=0.9999。说明哈西奈德在浓度 8μg/ml~40μg/g/ml~40μg/ml~40μg/g/ml 范围内，浓度与峰面积比呈良好的线性关系。 3.4.6 精密度试验取同一对照品溶液连续进样 5 次，按上述色谱条件进行测定峰面积， 哈西奈德的 RSD 为 0.51％。 3.4.7 重现性试验取同一批号样品 3 份，按供试品溶液制备的方法制备，依法测定哈 西奈德含量，RSD 值为 0.52％，表明本法重现性较好。 3.4.8 回收率试验上述 3 份供试品溶液各取 2ml 分别置 3 个 50ml 量瓶中，各加入 3.0ml 线性试验的对照液，加甲醇至刻度，照样品测定项下的方法分别测定含量，计算哈 西奈德的回收率，结果见表 1。 表 1 回收率试验结果（略） 3.4.9 样品含量测定取 3 个批号(分别为 20060413、20060418、20060427)的复 乐霜，按样品液的制备方法配制出相应的样品液，取 20μg/ml~40μg/l 进样，测定其样品含量。结果 分别为 97.12％、103.8％、103.1％(占标示量％)。 3.5 稳定性实验将 3 批样品在常温下放置 6 个月，避光保存,其外观检查无酸败、异臭 和变色等变质现象，主药含量也无明显变化。 4 讨论 4.1 本试验采用肾上腺皮质激素类药哈西奈德和抗组胺类药盐酸苯海拉明组成复方制 剂，处方工艺有别于现有工艺，且制备工艺简单，制剂细腻、光滑、稳定。下一阶段将进 行该制剂在治疗皮炎类皮肤病的临床疗效观察。 4.2 在试验色谱条件下测定哈西奈德的含量能排除盐酸苯海拉明和乳膏基质的干扰， 哈西奈德在浓度 8μg/ml~40μg/g/ml~40μg/ml~40μg/g/ml 范围内浓度与峰面积之比的线性关系良好，回收率高， 且重现性好，具有准确、可靠、灵敏等特点，对控制复乐霜的质量具有重要作用。 【摘要】免疫系统抑制肿瘤生长的同时肿瘤的恶性程度逐渐强化，这一过程被称作为 “肿瘤免疫编辑”.这一概念的是在对肿瘤免疫学认识不断深入的基础上提出的，分免疫清除、 免疫对抗、免疫逃逸 3 个阶段.现就肿瘤免疫编辑的 3 个过程及最新进展做一综述，有助于 设计更合理的方案，更好的防癌抗癌. 【关键词】免疫编辑；免疫清除；免疫对抗；免疫逃逸 0 引言 恶性肿瘤是现代社会人类常见的死亡原因之一.WHO 报告，2000 年全球癌症死亡已 经超过了 600 万例，占全球死亡人数的 12％，在发达国家达 21％，在发展中国家达 9％，在中国达 1％［1］.肿瘤免疫编辑是指机体免疫系统杀伤肿瘤的同时，肿瘤的恶性程 度逐渐增加，导致免疫系统和肿瘤的力量对比失衡，最终可导致机体死亡的过程.随着现代 科学技术，如基因技术、转基因技术、单克隆抗体技术的发展，以及免疫缺陷动物模型的 建立，学者们可以从多个角度证实该设想的正确性.同时，实验研究还表明，免疫系统杀伤 肿瘤组织的同时也推动着肿瘤的恶性发展.免疫系统既可识别和杀伤肿瘤组织，又能推动肿 瘤组织的恶性化的程度增加，这种双重作用被人们认识后，肿瘤免疫编辑学说才正式被提 出［2-3］.通过多年实验和临床观察，华盛顿大学肿瘤研究中心又进一步提出了肿瘤免疫 编辑的 3 个过程，即免疫清除，免疫对抗和免疫逃逸［4］. 1 免疫清除 免疫清除是指机体免疫系统识别肿瘤组织，并且通过多种途径杀伤肿瘤组织的过程.在 该阶段，如果机体能成功清除肿瘤组织，肿瘤免疫编辑至此结束，而不涉及到免疫对抗和 免疫逃逸.免疫清除又可分为以下 4 个时期. 第 1 时期:固有免疫系统中的细胞和分子识别并杀伤新生的肿瘤组织.巨噬细胞、NK 细 胞、NKT 细胞、CD8+T 细胞和 B 细胞以及机体中原有的 IFNγ,乳铁蛋白等分子参与了这 个反应［5-7］.肿瘤细胞表达的多种分子可以激活多种免疫细胞，如 MICA 可激发 NK 细 胞［8］.NKG2D 的受体可激活 NK 细胞和 Vγ9Vδ2Tγ9Vγ9Vδ2Tδ2T 细胞等，这些免疫细胞被激活后可杀 伤肿瘤细胞［8-13］. 第 2 时期:固有免疫系统对肿瘤的识别杀伤作用进一步扩大.首先，最初识别肿瘤的 IFNγ 能够刺激机体产生 IL12 等一些化学物质，这些化学物质能够趋化更多的固有免疫 细胞到达肿瘤组织［4］.并且，在细胞外基质重新塑造过程中产生的物质，也可诱导浸润 肿瘤的巨噬细胞产生少量的 IL12.然后，IL12 又可以刺激浸润肿瘤的 NK 细胞产生少量的 IFNγ，产生的 IFNγ 活化浸润在肿瘤组织的巨噬细胞产生大量的 IL12，IL12 刺激 NK 细胞产生大量的 IFNγ.在这个正反馈过程中产生的 IFNγ 可诱发依赖 IFNγ 的肿瘤清除过 程.如 IFNγ 可直接通过：①增加表面 MHC 抗原和肿瘤坏死因子表达，②抗肿瘤血管生成