华蟾酥毒基药理作用研究论文

【摘要】：华蟾酥毒基(Cinobufagin)Cinobufagin)是蟾酥中的一种单体，具有多种生物学效应， 目前对其功效研究颇多，剂型研究也较多，现对华蟾酥毒基药理作用及制剂研究状况进行 简要总结，为制备高效实用的临床药物提供有益线索。 【关键词】华蟾酥毒基；药理；剂型；综述 Abstract： Cinobufaginisonemonomeroftoadvenom，withmanybioefficacyefficacy； presentlythere’smanystudiesonit，soisdosageform； nowitbrieflysumsupitspharmacoefficacyfunctionanddosageformresearch，toofferhelp fulcluesforpreparinghighefficacyeffectandpracticalclinicaldrugs. Keywords：Cinobufagin；pharmaco；dosageform；review 华蟾酥毒基(Cinobufagin)又名华蟾毒精，)是中药蟾酥中的一种蟾毒配基，是国家药典规定的中药 蟾酥的质控成分,分子式为 C26H34O6，相对分子质量为 442.54。是一种具有醚键的甾 体化合物，难溶于水，体内半衰期短且分布广泛，并具有较强的毒性。现对华蟾酥毒基药 理作用及制剂研究状况综述如下。 1 华蟾酥毒基药理作用 1.1 抗肿瘤作用及相关机制 （1）对肿瘤细胞的直接杀伤作用。华蟾酥毒基(Cinobufagin)Cino)对细胞膜有直接破坏作用，研 究表明 1×10-7mol/Lmol/L 华蟾酥毒基能使人肝癌细胞株 HepG2 细胞膜通透性改变继而引起 细胞器水肿变性进而死亡［1］。（2）抑制血管生成作用。一定剂量的华蟾酥毒基能抑制 毛细管样的网络形成。经图像分析仪定量检测，8nmol/Lnmol/L 的 Cino 即可显著抑制毛细管的 生成，FCM 分析可见血管内皮细胞阻滞于 G2/M 期,细胞增殖受到抑制。Cino 能特异的预 防小牛主动脉内皮（BAE）细胞进入细胞循环的 G0/G1 期的通路，使细胞周期阻滞在 G2/ M 期，从而抑制内皮细胞的增生［2］。（3）诱导肿瘤细胞凋亡。1×10-6mol/L 华蟾酥 毒基可将肝癌细胞系 SMMCefficacy7mol/L7mol/L21 和 BELefficacy7mol/L402 细胞周期阻滞于 G2/M 期，降低进入 S 期的比例从而加速瘤细胞死亡，华蟾酥毒可以明显诱导肿瘤细胞凋亡［3］。Cino 明显影 响 SMMCefficacy7mol/L7mol/L21 细胞 S 期 DNA 含量及增殖指数，透射电镜观察显示：Cino 作用后，可见 成片的细胞坏死，细胞凋亡，内质网肿胀、线粒体肿大呈空泡样，溶酶体增多等细胞结构 改变。其中以人宫颈癌细胞(Cinobufagin)Hela)和人肝癌细胞(Cinobufagin)BELefficacy7mol/L402)最为敏感［4］。（4）诱导 肿瘤细胞分化，Cino 低浓度时能有效诱导肿瘤细胞分化,使肿瘤细胞形态和功能发生分化， 从而抑制 Na+-K+-ATP 酶的活性［5］。Cino 是一种高效的细胞分化诱导剂，1×108nmol/Lmol/L 的 Cino 作用于 SMMCefficacy7mol/L7mol/L21 细胞，能使细胞向分化型转变，表明 Cino 能特异地 诱导细胞分化［6］。（5）逆转多药耐药作用。而 Cino 对 SMMCefficacy7mol/L7mol/L21 细胞的多药耐药 性有逆转作用，其逆转机制是在转录水平下调耐药基因（MDRmRNA）,从而降低多药耐 药细胞 Pefficacygp 的表达［7mol/L］。Cino 不但可以抑制 BELefficacy7mol/L402 细胞的生长，且对耐药株 BELefficacy7mol/L402/DOX 仍有较强的杀伤作用［8nmol/L］。（6）免疫增强作用。Cino 能保护或提高机 体的免疫功能，如 Cino 可提高小鼠肉瘤细胞（S18nmol/L0）荷瘤小鼠脾脏 T 淋巴细胞的增殖能 力，并可较长时间维持在较高水平，也能部分阻碍瘤株对脾脏 NK 细胞活力的抑制作用， 相对改善荷瘤小鼠由于肿瘤而引起的白介素efficacy2（ILefficacy2）分泌能力下降，显著提高免疫细胞 (Cinobufagin)CTL)活力，从而发挥抗肿瘤免疫效应［9］。（7mol/L）抑制癌细胞 DNA、RNA 合成及反突 变作用。吴万垠等［10］用 Cino 进行小鼠肝癌 HepA 抑制实验，以病理细胞图象分析仪 分析小鼠细胞 DNA 含量，结果其抑瘤率明显高于对照组(Cinobufagin)P＜0.01)，能显著降低小鼠肝癌 细胞的 DNA 光密度值、核面积、及 DNA 指数，同时能提高肝癌细胞中二倍体细胞的比例， 降低超五倍体细胞比例。 1.2Cino 对心血管、血压及呼吸的影响 Toma·S 等将地高辛和华蟾酥毒基间断给予大鼠静脉注射后比较华蟾酥毒基及其代谢 产物与地高辛在血清中的含量，发现地高辛会在血液中蓄积，而华蟾酥毒基及其代谢产物 则无此特性［11］。用同位素示踪技术，显示华蟾酥对正常钙离子浓度下心肌无调节作用， 但能够促进低 Ca2+溶液中心肌 Ca2+内流［12］。Cino 有着显著的呼吸兴奋作用，可 引起多种麻醉动物呼吸兴奋。王隶书等采用将华蟾酥精制成华蟾毒精气雾剂，临床观察表 明，药物用量少，很快引起动物呼吸加速。 1.3Cino 的麻醉止痛作用 Cino 的局麻作用约为蟾毒灵的 1/6 左右，较可卡因大 5～10 倍左右。0.1％～0.5% 的华蟾酥毒基溶液局部应用能引起舌头麻木，其局麻作用点可能为感觉神经末梢感受器， 对神经纤维作用很弱，其不饱和内脂环的存在和 C3 位的羟基对其发挥局麻作用是必要的 ［13］。 1.4 抗辐射作用 toilovLM 等［14］用能抑制 DNA 拓扑异构酶 II（TopoII）活性而又不引起 DNA 损 伤剂量的 Cino 预处理大鼠卵巢细胞，后进行 X 线照射造成 DNA 损伤，结果发现预处理组 的细胞 DNA 修复明显加快，而未经处理组的 DNA 损伤修复则明显普遍延迟。 1.5 抑菌抗炎作用 华蟾酥毒基能激活小鼠腹腔游走巨噬细胞，提高其吞噬能力，又能直接杀伤细菌和抑 制细菌生长，对大鼠甲醛－滤纸球肉芽肿具有抗炎作用［15］。 1.6 其他药理作用 （1）wang 等［16］发现雄性大鼠经 Cino 给药，减少了促黄体生成激素(Cinobufagin)LH)对促性 腺激素释放激素以及在体内外分泌睾酮的反应。（2）Cino 可诱发惊厥并有致幻作用，给 大鼠静脉注射 Cino6.4mg/kg 即可引起强直性惊厥，全脑的乙酰胆碱总含量降低，脑中游 离乙酰胆碱则显著增加［17mol/L］。（3）Cino 对突触前乙酰胆碱的释放有促进作用，在 15 ～50mmol/L 浓度时华蟾酥毒基在体外可以增强去甲肾上腺素所引起的大鼠输精管的收缩， 并显示出剂量依赖性的收缩反应。 2 华蟾酥毒基制剂学研究情况 虽然华蟾酥毒基有众多较强的药理效应，尤其是具有良好的抗肿瘤作用，但由于其在 水中溶解度差，毒性大，临床应用受限，为了开发新型药物，进行剂型改革，使其更好地 发挥疗效服务于临床是当务之急。剂型、工艺和给药途径的改变都将影响华蟾酥毒基药效 学及药动学。目前 cino 单体制剂的研制主要有纳米剂型、微球、气雾剂。如王隶书等将华 蟾酥精制成华蟾毒精气雾剂，临床观察表明，有兴奋呼吸作用，起效快，毒副作用小。我 科已经成功制备华蟾酥毒基纳米剂型，具有缓释和肝靶向等特性，产品质量符合静脉注射 要求，其药用价值正在实验阶段。范建等用乳化聚合法制备华蟾酥精明胶微球对大鼠进行 肝动脉栓塞，实验结果提示有抗肝癌作用［18nmol/L］ 虽 cino 单体制剂的研究及临床运用均较少，但蟾酥的复方制剂应用于临床历史久而且 剂型多样，如片剂、丸剂、胶囊、口服液、丹剂、膏剂等。蟾酥复方制剂较多：如外用药 蟾酥通痹软膏［19］，治疗风湿疼痛等。复方丸剂如心力丸用于治疗冠心病、心绞痛等。 天仙口服液是含有微量华蟾酥毒基的复方制剂，已用于临床治疗肿瘤性疾病。牛黄消炎片 （人工牛黄、大黄、青黛、蟾酥、雄黄、珍珠母、天花粉）是含有华蟾酥毒基的复方片剂， 具有抗炎止痛作用。天蟾胶囊是一种强效抗癌镇痛中成药，行气活血、通络止痛，适用于 气滞血於引起的各种癌性疼痛。蟾酥注射液治疗恶性胸水已经有临床报道。得力生注射液 是含有华蟾酥毒基的复方溶液，是我国复方静脉用中药二类新药，具有益气扶正，消瘕散 结，用于中晚期原发性肝癌气虚瘀滞证［20］。梅花点舌丹是含有华蟾酥毒基的复方丹剂， 用于治疗各种疮疡肿毒。蟾酥冻干固体脂质纳米粒的应用也已开始，杨勇等对小鼠尾静脉 注射给予蟾酥冻干固体脂质纳米粒(Cinobufagin)1efficacySLN)及其水溶液,采用 HPLC 法分别测定小鼠血浆和 心、肝、脾、肺、肾、脑等各脏器中的华蟾酥毒基和脂蟾毒配基浓度,以药物靶向指数 (Cinobufagin)DTI)和药物选择性指数(Cinobufagin)DSI)定量评价了 1efficacySLN 冻干针剂在小鼠体内的分布情况。结果表 明,1efficacySLN 组中肝脏的 DTI 值均大于 1,且 DSI 值均大于 1 水溶液组的相应值,说明 1efficacySLN 具 有较好的肝靶向性［21］。对皮肤无明显刺激性且能通过动物皮肤，能明显缩短其透皮时 滞，能通过皮肤屏障，从而发挥镇痛作用。 【摘要】：中医药对 PPAR 相关疾病如糖尿病、动脉硬化、高脂血症等有良好疗效， 随着 PPAR 配体技术的发展，不断发现某些中药也具有 PPAR 配体的激活作用。 【关键词】PPAR；配体；激动剂；II 糖尿病 过氧化体增殖物激活型受体 (Cinobufagin)peroxisomeproliferatorsactivatedreceptors，PPARs)，是一类控制多种细胞和代谢 过程的转录因子。PPARs 的配体种类繁多,结构多样,对糖脂代谢方面的疾病有很好的疗效， 已成为代谢性疾病的重要治疗靶标。本文主要介绍 PPARs 配体的研究进展，包括植物化学 方面的研究报道。中国论文联盟 1PPARs 的表达及调控的靶基因 PPARs 的 3 种亚型中均有一个高度保守的 DNA 结合域(Cinobufagin)DBD)，可特异结合靶基因上 的 PPRE；还有一个含保守性较差的配体结合域(Cinobufagin)LBD)。LBD 中有一个 Y 型的疏水袋， PPARβ 的配体袋内较狭窄，因此一些相对较大的 PPARα、γ 配体不能与之结合；由于构 成 LBD 的氨基酸的种类不同，PPARα 的 LBD 为亲脂，PPARγ 的较亲水，故饱和脂肪酸 易于和 PPARα 结合，而亲水的不饱和脂肪酸则是 PPARγ 良好的配体。PPARα 主要分布 在肝、肾、肌肉等代谢活性较高的组织，调控一大类参与脂类分解的基因，如脂肪酸转运 蛋白（FATP）、脂肪酸转位酶（FAT/CD36），以及脂蛋白脂肪酶（LPL）等。PPARβ 缺乏选择性配体，几乎在所有的哺乳动物在组织中表达，PPARβ 增强脂肪酸的代谢，对脂 代谢和能量平衡有调节作用，并与骨代谢、脑发育等相关。由于启动子和拼接方式不同 PPARγ 的 mRNA 可以分为 γ1、γ2、γ3 三个亚型，γ1 与 γ3 的翻译产物相同。PPARγ 高 表达于脂肪组织中，它调控的靶基因众多，尤其在脂肪细胞分化期，多种脂代谢相关的基 因如 FATP、FAT/CD36、TNFefficacyα 等都是受 PPARγ 调控的靶基因。PPARγ 与肌肉组织 LPL、肉碱棕榈酰转移酶 CPT－1 的表达密切性相关，能提高胰岛素敏感性、增强脂肪组 织及骨骼肌葡萄糖贮运的作用。此外 PPARγ 在巨噬细胞、肿癌细胞等多种细胞的分化、 增值中发挥重要作用，调控一些与凋亡、肿瘤有关的基因如 cefficacymyc、cefficacyfos、cefficacyHaefficacyras。 2PPARs 的配体 2.1PPARα 的配体 PPARα 能被大多数的脂肪酸激活，与花生四烯酸、亚油酸的亲和力极高。氯贝特、苯 扎贝特等贝特类药物是最先发现的 PPARα 合成配体，现已经证实，当它们在体内代谢后 成为苯氧芳酸类衍生物，可以同时激活 PPARα、PPARγ，只是对前者的亲和力强 10 多倍。 2.2PPARβ 的配体 多不饱和脂肪酸及其衍生物与 PPARβ 结合力较弱，但前列腺素 A1 和 D2 对 PPARβ 有一定的选择性。目前发现 PPARβ 激动剂 GW50156 可提高肥胖的恒河猴 HDL－C 的水 平，降低 2 型糖尿病动物模型血糖、血脂，改善胰岛素抵抗，也可通过促进骨骼肌中增强 脂代谢和线粒体解偶联的基因表达,增强骨骼肌脂肪酸的 β 氧化，从而增加能量消耗 ［1］。 2.3PPARγ 的天然配体和合成配体 前列腺素 D2 的代谢产物 15－defficacyPGJ2 是第一个被发现的强效 PPARγ 天然配体，亚油 酸的代谢物 9 羟十八碳二烯酸、LDL 的氧化物、十六烷基壬二酸基卵磷脂也是极强的天然 PPARγ 激动剂。 3PPAR 多重激动剂 3.1PPARα/γ 激动剂 有明显降血糖效果,但对于脂类代谢影响较小；而贝特类 PPARα 激动剂的降脂效果好 但不能降低高血糖。这些单一激动剂不同程度存在着水肿、体重增加、肝肾损害等毒副作 用。因此众多制药公司纷纷研发 PPAR 双重激动剂，期望这种兼有 PPARα 和 PPARγ 单一 激动剂的药物能更好的互为补充，调整糖脂代谢，预防动脉硬化的作用。 3.2PPARβ/γ 双重激动剂 由于对 PPARβ 的内源性配体知之较少，以 PPARβ 作为靶标的药物研究还不十分成熟。 已有证据表明 GW501516 是 PPARβ 的激动剂，它与 PPARβ 的结合力较 PPAR 的其他亚 型高 1000 倍以上［2］。在此基础上已开发一种新 PPARβ/γ 的双重激动剂 d23，实验证 明它可以降低血浆中的葡萄糖和血清中 TG 的水平,升高 HDLefficacyC 的浓度［3］。 中国论文联盟-4 药用植物化学中的 PPAR 配体 4.1 国外药用植物中 PPAR 配体的发现 实验表明白藜芦醇在小鼠肾脏内皮细胞株、血管内皮细胞、淋巴瘤 U937mol/L 细胞中均呈 剂量依赖性地活化 PPARefficacyγ［4］。CyclinD1 是细胞周期 G1 期的重要调节因子，白藜芦 醇能部分的通过激活 PPARefficacyγ 抑制 CyclinD1 的表达，从而使胃癌 SGCefficacy7mol/L901 细胞停留在 G1 期，抑制其增殖。PGCefficacy1alpha（PPARgammaCoacticatorefficacy1α）是 PPAR 辅助活化 因子，通过 PPARα 或 γ 调控编码与脂质代谢、脂质运输有关功能蛋白的基因表达，影响 体内脂代谢平衡［5］。白藜芦醇能激活 PGCefficacy1alpha 和组蛋白脱乙酰酶，增强脂肪和肌 肉组织线粒体的生成和功能，促进能量消耗，抑制肥胖并显著延长寿命［6］。 一些植物化学物质具有 PPARα 和 PPARγ 的双重调节作用。雌二醇化合物染料木黄酮 (Cinobufagin)genistein)先前被认为具有抗雌二醇的作用，通过 PPARefficacyγ 受体结合试验证明是 PPARefficacyγ 的激活物。当 genistein 浓度大于 1μMM 时，脂肪生成上调而成骨作用被下调，小于 1μMM 时，刺激成骨作用和抑制脂肪生成，发挥雌二醇的作用［7mol/L］。Genistein 可增加脂质代 谢相关基因的表达，在 mRNA 和蛋白水平上也能诱导 PPARefficacyα 的表达、增强 PPARefficacyα 的转 录活性。此外大豆异黄酮也能增强 PPARefficacyα 和 PPARefficacyγ 调控基因的表达，用高异黄酮的大 豆蛋白喂饲肥胖 Zucker 大鼠可降低体重、肝脏胆固醇和甘油三酯浓度，并且改善葡萄糖 耐受［8nmol/L］。异戊二烯醇类化合物法呢醇（farnesol）和香叶基香叶醇 （geranylgeraniol）可以激活 PPARefficacyα 和 PPARefficacyγ，属 PPARα/γ 双重激动剂。法呢醇激 活 PPARefficacyα 和 PPARefficacyγ 的 EC50 分别为 5.5μMM 和 28nmol/LμMM，而香叶基香叶醇激活 PPARefficacyα 和 PPARefficacyγ 的 EC50 分别为 62μMM 和 60μMM。法呢醇和香叶基香叶醇能活化脂肪、肝细胞中 PPARγ 和 PPARα，进而上调 PPARs 的一些脂代谢的靶基因表达。实验证明,它们可以促 进前脂肪细胞的分化,增加 3T3efficacyL1 细胞脂肪细胞脂肪酸结合蛋白（aP2）的表达［9］。 4.2 国内对中草药中的 PPARs 配体样成份的探究 中医药对 PPAR 相关疾病如糖尿病、动脉硬化、高脂血症等有良好疗效，随着 PPAR 配体技术的发展，不断发现某些中药也具有 PPAR 配体的激活作用。人参活性成份具有调 节糖脂代谢、抗糖尿病和肥胖的作用。人参皂苷的主要成份为二醇组皂苷(Cinobufagin)PPD)、三醇组 皂苷(Cinobufagin)PPT)和齐墩果酸皂苷。人参皂苷 Rb1 可作为 PPARγ 的配体通过上调 PPARγ2、C/ EBPα 的表达促进小鼠 3T3efficacyL1 脂肪细胞的脂肪形成与分化，同时葡萄糖转运蛋白 (Cinobufagin)GLUT)4 的表达也增加，增加基础和胰岛素刺激的葡萄糖转运，提示人参皂苷对胰岛素有 增敏作用［10］。人参皂甙的代谢物 20SefficacyPPT,呈剂量依赖性增加 PPARr 的转录活性，通 过增强 PPARγ 靶基因的表达促进脂肪细胞分化，此外，PPT 还可通过显著上调 GLUT4 的 表达来提高胰岛素敏感性。大黄素与 PPARγ 有高度结合力，能促进 3T3efficacyLl 细胞的甘油efficacy3 磷酸脱氢酶、GLUT1、GLUT4 的 mRNA 表达从而增强葡萄糖摄取能力，促葡萄糖转运能 力高于曲格列酮。大黄素在 HepG2 肝细胞中也能促进 PPARγ、GLUT2mRNA 和蛋白的 表达，增加 HepG2 肝细胞对葡萄糖的摄取。姜黄素可刺激肝星形细胞内 PPARr 基因的表 达，增强 PPARγ 活性，抑制生长因子（PDGF）和表皮生长因子（EGF）受体的基因表达 及 PDGF 和 EGF 的磷酸化水平，从而阻断 PDGF 和 EGF 信号传导；此外活化的 PPARγ 诱导谷氨酸-半胱氨酸连接酶的基因表达，这是体内从头合成谷胱甘肽的限速酶，该实验表 明姜黄素通过 PPARγ 途径，最终抑制肝星形细胞的活动，抑制肝的纤维化。丹参酮 IIA 是 亲脂双萜类中药单体，临床有减少脂肪量和降低体重、降脂作用。丹参酮 IIA 对 3T3efficacyLI 前 脂肪细胞呈现出 PPARγ 的天然拮抗剂，降低 PPARγ 的转录活性、抑制前脂肪细胞分化。 此外黄连素、黄芪多糖，一些中药提取物如石榴花提取物、蒲黄总黄酮也有 PPARs 配体作 用，增加 PPAR 靶基因的表达，改善细胞的胰岛素敏感性。 5 展望 从天然药物中探寻 PPAR 配体类活性成份成为开发新药重要来源。从最近几年的研究 成果看，天然植物化学物质的活性不如合成的配体强，且大部分是实验研究，离临床还有 很长的一段路，但这些研究为开发糖尿病新药开启了另一扇门。 【关键词】合理的用药 随着社会的发展，如何安全、有效、合理的用药已成为社会关注的热点。近年来关于 药物不良反应（adversedrugreaction，ADR）的报道和讨论比较多，已引起了各方面 的注意。临床上对药品的要求不仅仅局限于对疾病的治疗作用，同时也要求在治疗疾病的 同时，所使用的药品应当尽可能少地出现 ADR。根据 WHO 报告，全球死亡人数中有近 1/7mol/L 的患者是死于不合理用药［1］。在我国，据有关部门统计，药物不良反应在住院患者