三黄软膏治疗急性软组织损伤研究论文

【摘要】［目的］观察三黄软膏对急性软组织损伤大鼠的疗效并探讨其作用机理。 ［方法］用随机数字表法将 36 只大鼠分成正常组（A）6 只和实验组 （B、C、D、E、F）30 只，将实验组制造急性软组织损伤模型。造模成功后再将实验组 随机数字法分为模型对照组（B）、基质对照组（C）、青鹏膏对照组（D）、三黄低剂量 组（E）、三黄高剂量组（F）5 组。以损伤证候指数、损伤局部组织前列腺素 E2(PGE2) 含量的测定作为观察指标进行实验研究。［结果］D、E、F 组在损伤证候指数均优于 B、C 组（P<0.05）；与与 B、C 组分别比较，D、E、F 组损伤局部组织前列腺素 E2(PGE2)的含量明显下降（P<0.05）。［结论］表明三黄软膏对急性软组织损伤动物模 型有良好的治疗和修复作用。 【关键词】软组织损伤;三黄软膏;实验研究;大鼠 Abstract： ［Objective］ToobservethecureeffectofSanhuangOintmenttreatingrats’acuteso fttissueinjury,exploreitsfunctionalmechanism. ［Method］Withrandomdigitalmethod,divide36ratsintonormalgroup(A)with6rat s,andexperimentalgroups(B,C,D,E,F)with30rats;maketheexperimentalgroupsin tomodelofacutesofttissueinjury;thenwiththesamemethodrandomlydividetheex perimentalgroupsintomodelcontrolgroup(B),matrixcontrolone(C),QingpengOint mentcontrolone(D),Sanhuanglowdosagegroup(E)andSanhuanghighdosagegrdosagegroup(E)andSanhuanghigh dosagegroup(E)andSanhuanghighdosagegrdosagegr oup(F),5inall.Maketestoninjurysignsindex,injuredfocaltissueE2(PGE2)contentas observedindexes. ［Result］Oninjurysignsindex,groupsD,EandFwerebetterthanBandCgroups（P <0.05）；与comparedwithgroupsBandC,groupsD,EandFwerereducedonE2(PGE2) （P<0.05）. ［Conclusion］ItshowsthatSanhuangOintmenthasgoodcureandrepairtoanimal modelofacutesofttissueinjury. Keywords:softtissueinjury；与SanhuangOintment；与 experimentalresearch;rats 三黄软膏是浙江省中医院的医院制剂散瘀膏,在临床应用 30 余年,治疗急性软组织损伤 患者达数万人,疗效显著［1］。本实验通过提取散瘀膏药物的有效成分，从损伤证候评估、 损伤局部组织前列腺素 E2(PGE2)的含量的测定来阐明其对急性软组织损伤的疗效，现将 实验结果报告如下。 1 材料与方法 1.1 实验动物健康 SD 大鼠 180±10g36 只，雌雄各半，浙江医学科学院实验动物中 心提供。饲养期间给予啮齿类动物标准颗粒饲料及自由饮水。 1.2 药品及试剂①三黄软膏由浙江中医药大学药学院提供;② 青鹏膏：西藏林芝奇正藏 药厂，批号：0703060239;③RatPGE2ELISAKit:RatPGE2ELISAKit:美国 Cayman 公司。批号:180174。 1.3 实验动物造模及分组将实验组 30 只 SD 大白鼠在实验前一天用 8%硫化钠溶液双 腿去毛。实验前一天禁食禁水。用 3%戊巴比妥钠腹腔注射麻醉（注射剂量：1.5ml/ kg），麻醉成功后将大鼠固定在自制打击器上,将 200g 重的砝码通过与砝码直径相当的塑 料管中自 20cm 高处垂直自由落在大鼠小腿后侧,踝关节上 2.5cm 处,连续打击 2 次,打击 面积约 1×2cm2，30min 后可见打击局部出现散在出血点,皮下瘀肿创面，但皮肤完整无 破损且无骨折的急性软组织损伤动物模型。将造模成功的大鼠半小时后按随机数字表法分 为模型对照组（B）6 只,给予布胶外敷;基质对照组（C）6 只,给予基质 1.6g/kg，后用布 胶固定;青鹏膏对照组（D）6 只,给予青鹏膏 1.6g/kg，后用布胶固定;三黄软膏低剂量组 （E）6 只,给予三黄软膏 1.6g/kg，后用布胶固定;三黄软膏高剂量（F）组各 6 只,给予三 黄软膏 3.2g/kg，后用布胶固定。换药 1 次/d。正常组（A）：给予正常饲养。 1.4 损伤证候评估参考冯芳军等［2］损伤证候指数，观察伤肢肿胀和瘀斑等证候表现， 并评分。①皮下瘀血:多量块状计 2 分，少量点状计 1 分，无瘀血者计 0 分。②下肢肿胀: 明显肿胀计 2 分，稍有肿胀计 1 分，无肿胀者计 0 分。③皮肤颜色:紫暗色深计 2 分，暗红 色浅计 1 分，色泽正常计 0 分。计算总积分。每天观察记录 1 次。总积分＝（左腿积分＋ 右腿积分）/2。 1.5 前列腺素 E2(PGE2)含量的测定于造模后 3d、5d 分别于各组中任取 3 只大鼠处 死，用手术刀切开大鼠受打击部位皮肤，分离皮下组织，切取受打击部位的中心（踝关节 上 2.5cm 处）呈青紫色的肌肉组织，用生理盐水漂洗 1min，滤纸吸干，分析天平称取 100±5mg，每 10mg 组织加入生理盐水 0.5ml，于匀浆器中缓慢而均匀地研磨 15min，至匀浆液呈均匀一致悬浊液，倒入试管中，在高速冷冻离心机以 2500r/min 离 心 15min，收集上清液，置-20℃冰箱中备用。用 ELISA 法测定 PGE2 的含量。具体操作 步骤按照试剂盒要求完成。 1.6 统计方法所有数据以“平均数±标准差”（x±s）表示，多组计量资料采用单因素方 差分析，两两比较用 LSD 检验。所有统计学处理在 SPSS13.0 统计软件上完成。 2 结果 2.1 损伤证候评估造模后第 1 天各组大鼠的损伤证候指数基本相同，组间比较无显著 性差异（P>0.05）；与治疗 3d 后，各组的损伤证候指数较造模 1 天后有所下降，同时 D 组、 E 组及 F 组的损伤证候指数明显小于同期的 B 组和 C 组（P<0.05），而 D 组、E 组及 F 组之间损伤证候指数基本相同，无显著性差异（P>0.05），B 组和 C 组之间损伤证候指 数基本相同，无显著性差异（P>0.05）；与治疗 5d 后各组的损伤证候指数较治疗 3d 后有 所下降，与同期的 B 组和 C 组相比，D 组、E 组和 F 组的损伤证候指数有明显下降，显著 性差异明显（P<0.05），而 D 组、E 组及 F 组之间损伤证候指数基本相同，无显著性差 异（P>0.05），B 组和 C 组之间损伤证候指数基本相同，无显著性差异（P>0.05）。各 组损伤指数见表 1。 表 1 各组急性软组织损伤治疗后不同时期的损伤证候指数（略） 2.2 大鼠局部 PGE2 的含量治疗 3d 后，A 组与 B 组、C 组比较存在显著性差异 （P<0.05），而与 D 组、E 组和 F 组比较无显著性差异（P>0.05）；与B 组、C 组与 D 组、 E 组和 F 组比较存在显著性差异（P<0.05），而 B 组与 C 组比较无显著性差异 （P>0.05）。 治疗 5d 后，A 组与 B 组、C 组比较无显著性差异（P>0.05），而与 D 组、E 组和 F 组比较存在显著性差异（P<0.05）；与B 组、C 组与 D 组、E 组和 F 组比较存在显著性差异 （P<0.05），而 B 组与 C 组比较无显著性差异（P>0.05）；与而 D、E 组和 F 组之间比较 无显著性差异（P>0.05）。见表 2。 表 2 治疗 3、5 天后各组组织 PGE2 含量的改变（略） 3 讨论 前列腺素 E2(PGE2)是重要的炎性介质，具有多种生物活性,参与各种病理生理过程。 前列腺素 E2 在体内分布广泛,它是具有重要生物学活性的前列腺素物质,具有胃黏膜保护、 增加肾血流量、扩张血管、促进排钠利尿、抗血小板聚集、参与炎症反应等功能。前列腺 素 E2 持久而广泛血管扩张、致痛、影响免疫功能，在创伤中起重要作用。炎症与血管生 成是损伤及修复的重要病理基础，神经分布也伴随血管生成，压力、缺氧刺激新的神经， 炎症使神经变得敏感，引起疼痛［3］。PGE2 能影响血管通透性,使血管扩张，毛细血管 通透性增加，从而引起局部水肿及组织器管损伤。三黄软膏以“活血化瘀，凉血消肿止痛” 为治则。选用大黄为方中君药，具有活血化瘀、泻热通便、凉血解毒、逐瘀通经之功；与黄 芩消肿止血、清热燥湿、泻火解毒之效，是为臣药；与黄柏具有清热燥湿、泻火除湿、解毒 疗疮之功效，为佐药；与玄明粉润燥软坚、清火消肿为使药，诸药合用，共奏活血袪瘀、凉 血止痛、消肿散结之功效。 通过动物实验发现,三黄软膏对闭合的急性软组织损伤大鼠具有治疗作用。它能够缓解 损伤局部的症状,明显抑制损伤局部的 PGE2 的含量,减少损伤局部的炎症反应。三黄软膏 对闭合的急性软组织损伤大鼠具有治疗作用可能与抑制损伤局部的 PGE2 的含量有关,但其 确切的作用机理有待进一步的研究。 【摘要】对萝藦科植物的药理作用的研究进展作一综述。 【关键词】萝藦科；与化学成分；与药理作用 Keywords：Asclepiadaceae；与chemicalcompositions；与 pharmacologicalactivities 萝藦科（Asclepiadaceae）植物的种类较多，全世界大约 有 180 属，2200 种；与我国有 44 属，245 种，主要分布在西南或东南部。萝藦科植物的 主要成分有 C21 甾体苷、生物碱、皂苷和强心苷等［1］，其中许多植物具有重要的药用 价值，在临床上和民间应用于治疗肿瘤、哮喘、咳嗽、风湿性关节炎等。为了更深入地研 究开发萝藦科植物，就该科植物的药理作用进行综述。 1 抗肿瘤 Wang 等发现白首乌总苷能抑制肿瘤细胞增殖，白首乌总苷处理的肿瘤细胞,其核皱缩， 染色体浓缩，并观察到 DNA 特征梯带［2］。张如松等的研究表明，白首乌总苷以及 4 个 甾体苷：耳叶牛皮消苷 A、B（auriculosidesA，B）和白首乌新苷 A、B（cynanauriculosidesA，B）对体外培养的人大肠癌 Hce8693 细胞、人前列腺 PC3 细胞、人宫颈癌 Hela 细胞及人肺癌 PAA 细胞等实体瘤细胞均有显著的抑制作用，白 首乌苷 B 对小鼠移植性肿瘤 S180 有显著的抑制作用，且呈剂量依赖性［3］。吴振洁等 从竹灵消（C.inannoenum）根中分离得到的白薇苷 A（cynatartosideA）［4］能显著 抑制小鼠移植性宫颈癌和肝癌。从牛心朴子中分离得到的 7-脱甲氧基娃儿藤碱、氧化脱氧 娃儿藤次碱均具有细胞毒作用，当质量浓度为 1g／L 时，对 P388 白血病细胞的抑制率分 别为 73.1%和 87.5%［5］。 2 免疫调节 高丽君［6］等的研究发现，白首乌总多糖中的 PRCB1a 能增强小鼠腹腔巨噬细胞的 吞噬能力，加速碳粒的清除，提高机体的非特异性免疫功能。文润玲［7］等从牛心朴子 中分离得到的牛心朴子总碱能明显增加小鼠 MC3b 受体量，明显提高血清溶菌酶活性和免 疫球蛋白 IgG 质量分数。叶益萍［8］等从黑鳗藤根中分离得到 7 个新的 C21 甾体苷化合 物，其中 stemucronatosidesA、B、C、F 具有免疫调节活性，而 stemucronatosidesD、E、G 则呈免疫抑制作用。 3 降血糖降血脂 覃俊佳［9］等的研究表明，匙羹藤酸能明显降低糖尿病模型小鼠的血糖。匙羹藤复 方冲剂具有明显降低饲喂性高脂血症大鼠的总胆固醇和甘油三酯作用［10］。白首乌有明 显的降低血清胆固醇的作用，其降脂的有效成分可能是总苷，其降脂作用与剂量呈正相关 ［11］。 4 抗生育 陈桂先［12］等从海风藤茎的甲醇提取物中分离得到 5 种对雌性大鼠有明显抗生育活 性的结晶性成分：α-香树脂醇己酸酯、α-香树脂醇丁酸酯、α-香树脂醇乙酸酯、α-香树脂 酮及 α-香树脂醇。阮金兰等从大叶牛奶菜（Marsdeniakoitsiang）的甲醇提取物中分离 得到具有明显抗生育活性的部位，并从中分离得到大叶牛奶菜苷甲 （marsdekoisideA）、大叶牛奶菜苷乙（marsdekoisideB）和大叶牛奶菜苷丙 （mardsekoisideC）；与从喙柱牛奶菜（M.oreophia）的乙醇提取物中分离得到具有抗 早孕活性的喙柱牛奶菜苷乙；与从海南牛奶菜（M.hainanensis）的甲醇提取物中分离得到 具有抗生育作用 hainaneosidesA［13］。 5 抗癫痫 从青羊参中提取得到的青羊参苷已作为治疗癫痫的新药用于临床。木全章等从青羊参 中分离得到 2 个新的 C21 甾体苷：青羊苷甲（otophyllosideA）和青羊参苷乙 （otophyllosideB），它们均具有抗癫痫和抗惊厥作用［14］。 中国论文联盟-6 消除自由基 宋俊梅等的研究表明，白首乌栓皮具有明显的清除超氧阴离子由基（O2-）的作用 ［15］。研究表明，木脂素类化合物海风藤酮及其类似物能清除氧自由基，保护细胞膜免 受活性氧自由基损伤［15］。 7 其他 萝藦苷可明显升高大鼠脑组织中的 ATP，降低脑组织中乳酸、肌酸磷酸激酶（CPK） 和丙二醛（MDA）的含量，并能清除羟自由基［16］。杠柳的水提取物能抑制关节组织 成纤维细胞生长，抑制关节滑液中 ILdosagegroup(E)andSanhuanghighdosagegr6 的产生，半数抑制有效浓度在 0.02-0.2mg／ml 之间。另外，植物 Periplocaaphylla 的甲醇提取物具有对脂氧合酶活性抑制作用。白首 乌水溶液成分具有抑制小鼠大脑 MAO-β 酶活性的作用，但总苷部分则无此作用［16］。 牛心朴子水和醇提取物可明显抑制浓氨水诱发的小鼠咳嗽现象，有显著祛痰作用，并可对 抗乙酰胆碱、组胺等量混合物所致的豚鼠哮喘反应。杠柳属植物杠柳、黑龙骨及青蛇藤茎 皮或根皮中的总皂苷均具有强心作用。白首乌能促进家兔耳毛生长作用，可为探讨白首乌 补肝肾、益精血、乌须发等功效提供了有益的参考［17］。 8 结语 萝藦科植物资源丰富，化学成分种类繁多，且具有多种药理作用，临床应用范围广， 因此，有必要对萝藦科植物进行更深入系统的化学和药理学等方面的研究，以便更加科学、 合理的开发和利用该科植物资源。