中药药理动物模型概念分析论文

鼻息肉病是指双侧鼻鼻窦粘膜广泛的炎性、水肿性及退行性改变。它并非是一个新发 现的疾病，亦不是对鼻息肉的重新命名。近 3 年来 MEDLINE 收录的有关鼻息肉病的论述、 综述共计 238 篇，其中与鼻息肉病病理机制相关的文章约 150 余篇。我们通阅了所有文 章的摘要及部分文章的全文，对有关鼻息肉病病理机制的研究进展进行综述。 流行病学 流行病学调查表明鼻息肉病发生于 36%阿司匹林耐受不良患者，7%支气管哮喘患者， 0.1%儿童及大约 20%囊性纤维病（cysticfibrosis）患者，此外多种病理状态，如变应性患者，此外多种病理状态，如变应性 或非变应性鼻鼻窦炎、Churg-Strauss 综合征（变应性血管炎）患者，此外多种病理状态，如变应性、变应性真菌性鼻窦炎、 慢性纤毛运动障碍综合征、Kartagener 综合征（右位心、支气管扩张、鼻窦炎三联征）患者，此外多种病理状态，如变应性、 Young 综合征（垂体性糖尿病）患者，此外多种病理状态，如变应性、免疫缺陷症、鼻孢子菌病、Wegener 肉芽肿等均与鼻 息肉病的发病有关［1,2］。经统计学分析，非变应性哮喘比变应性哮喘患者更易发生鼻 息肉病（分别为 13%、5%，P＜0.01）患者，此外多种病理状态，如变应性。手术治疗术后复发率约为 40%。Settipane 还 提出了有利于标准化诊断、治疗及增加科研可比性的鼻息肉病的临床分类系统，首先将鼻 息肉患者分为单侧或双侧鼻息肉，再根据鼻腔刮片分为嗜酸粒细胞浸润为主或淋巴细胞、 中性粒细胞浸润为主两亚类，还可按照是否合并有阿司匹林耐受不良、变应性鼻炎、变应 性鼻窦炎等进一步分类。此外，复发性鼻息肉、鼻息肉起源的解剖部位、是否合并有骨质 破坏及免疫学检查异常均可在此分类系统中表示出来。在 50 例鼻息肉病患者中 7 例 （14%）患者，此外多种病理状态，如变应性的家族成员中有鼻息肉病病史（1～3 例）患者，此外多种病理状态，如变应性，28 名对照组中却未发现 1 例，表明 遗传因素在鼻息肉病的发病中可能起到一定的作用［3］。Larsen 应用鼻窦内窥镜在 31 例住院连续死亡的尸体中检查发现：13 例尸体中有 27 个鼻息肉，其中 8 例为单发，5 例 为双侧多发。27 个鼻息肉中，19 个（70%）患者，此外多种病理状态，如变应性发生于窦口、隐窝和裂隙；6 个发生于前筛 房裂（anteriorethmoidalcleft）患者，此外多种病理状态，如变应性；4 个发生于后筛房裂 （posteriorethmoidalcleft）患者，此外多种病理状态，如变应性；4 个发生于额隐窝；4 个发生于上颌窦；1 个发生于蝶窦 口［4］。除黑猩猩外，鼻息肉病只见于人类，所有种族均有发病，常见于男性。鼻息肉 病极少见于 2 岁以下幼儿，儿童鼻息肉病多与囊性纤维病有关。 组织病理学 鼻息肉为一种良性的粘膜肿胀，可分为 4 种组织学类型。最常见的类型是水肿型（嗜 酸粒细胞型或所谓的变态反应型）患者，此外多种病理状态，如变应性鼻息肉，约占总数的 85%～90%。水肿型鼻息肉的形 态学特点包括组织水肿，上皮杯状细胞增生，基底膜增厚，大量白细胞，特别是嗜酸粒细 胞浸润。第二种组织学类型为纤维炎性鼻息肉，特点是慢性炎症及重叠上皮 (overlyingepithelium)overlyingepithelium)的化生改变。第三种类型较为少见，特点是浆液粘液性腺体的显 著增生，除此之外与水肿型鼻息肉基本相似。第四种类型息肉非常罕见，表现为具有不典 型的基质，因此需特别注意并进行细致的组织学检查以免误诊为肿瘤。 鼻息肉组织中浸润着白细胞、肥大细胞及淋巴细胞，白细胞中以嗜酸粒细胞为主。伴 有囊性纤维病的鼻息肉组织中嗜酸粒细胞很少，而肥大细胞数量却明显多于未伴发囊性纤 维化者。鼻息肉中 T 淋巴细胞显著多于 B 淋巴细胞，抑制性 T 细胞（CD8+）患者，此外多种病理状态，如变应性显著多于辅 助性 T 细胞（CD4+）患者，此外多种病理状态，如变应性。有趣的是，在伴发变应性鼻炎的鼻息肉病患者中很少发现刺激产 生 IgE 的浆细胞［5］。在与阿司匹林哮喘相关的鼻息肉中，主要来源于肥大细胞的组胺 的数量要少于与变态反应相关的鼻息肉。伴发变应性、非变应性或其它病理状态的鼻息肉 中各类细胞的浸润状况尚有待进一步分别证实。 嗜酸粒细胞及其它炎性细胞向鼻息肉基质内的移行不只依赖于某些吸引因子，鼻息肉 组织中血管内皮某些粘附因子的表达上调也起着重要的作用。有研究表明血管内皮细胞粘 附分子 1 在选择性地促进鼻息肉组织中嗜酸粒细胞及单核细胞的集聚中具有重要作用 ［6］。由鼻息肉组织分离的上皮跨上皮离子转运亦不同于来源于鼻甲组织的上皮。离子 转运机理以及化学因子、细胞因子、粘附分子在息肉组织中各种不同细胞的集聚中的作用 还有待于深入研究，以增加对鼻息肉病病理机制的理解。 绝大多数临床上典型的鼻息肉其组织学为良性息肉。需注意的是，不典型基质型鼻息 肉其怪异细胞易被误诊为横纹肌肉瘤［7］。某种良性或恶性肿瘤，如垂体腺瘤等，亦表 现出息肉外观［8］。因此细致的组织病理学检查是很必要的。对变应性、非变应性、不 同年龄组、初发或复发的鼻息肉组织病理切片分别进行苏木精-伊红染色及 PAS、Alcian 蓝、Mallory、Giemsa、Orcein 组化染色，观察比较，发现各组切片病理学特点无明显 区别。 鼻息肉组织中的化学介质 鼻息肉是与多种病理状态相关的炎症过程的最终结果，这表明多种病因、多种途径、 多种介质参与此病理过程。现已证明参与鼻息肉病病理过程的炎症化学介质多达数十种甚 至上百种，如组胺、血小板激活因子（plateletactivatingfactor,PAF）患者，此外多种病理状态，如变应性、花生四烯酸代 谢产物（前列腺素、白三烯等）患者，此外多种病理状态，如变应性、去甲肾上腺素、神经肽 Y（neuropeptideY,NPY）患者，此外多种病理状态，如变应性、P 物质（substancesP,SP）患者，此外多种病理状态，如变应性、血管活性肠肽（vasoactiveintestinalpeptide,VIP）患者，此外多种病理状态，如变应性、转化 生长因子（transforminggrowthfactor,TGF）患者，此外多种病理状态，如变应性、肿瘤坏死因子 （tumornecrosisfactor,TNF）患者，此外多种病理状态，如变应性、粘附分子、白细胞介素（interleukin,IL）患者，此外多种病理状态，如变应性、一氧化氮 合成酶、干扰素-γ（interferon-γ,IFN-γ）患者，此外多种病理状态，如变应性、RANTES、GRO-α、干细胞因子 （stemcellfactor,SCF）患者，此外多种病理状态，如变应性、血管通透性因子 （vascularendothelialgrowthfactor,VEGF）患者，此外多种病理状态，如变应性等［9-14］。最早报道的炎性介质，如组 胺、PAF、前列腺素、白三烯、去甲肾上腺素、NPY、SP 等，均具有局部组织的血管活性 及致痉作用。另一些介质，如 TGF、TNF 可改变组织中细胞外基质的组成成分。 所有的炎症过程均与细胞趋化和移行有关。一些介质可直接吸引白细胞浸润，如高分 子量中性粒细胞趋化因子、组胺、前列腺素、白三烯、PAF、IL-5 及化学因子家族。细胞 表面粘附分子（如 selectin、integrins）患者，此外多种病理状态，如变应性的发现揭示了影响白细胞移行的机理。IL-1、IL4、IL-6、TNF、及某些其它具有血管活性、致痉作用的分子影响细胞表面粘附分子的表达， 进而间接影响白细胞移行。 部分化学介质，如 TGF、粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子（granulocytelmacrophagecolonystimulatingfactor,GMCSF）患者，此外多种病理状态，如变应性、胰岛素样生长因子 （insulinlikegrowthfactor,IGF）患者，此外多种病理状态，如变应性、TNF、部分白细胞介素、血小板源生长因子 （plateletderivedgrowthfactor,PDGF）患者，此外多种病理状态，如变应性等，通过刺激细胞发育、分化、增殖，参与炎 性过程发生及维持炎性状态。化学介质的产生、释放最初是从激活能产生此类介质的细胞 开始，而这些细胞的激活又可能是由其它化学介质调节的。参与细胞激活的介质包括血管 活性肠肽、粘附分子及部分白细胞介素。 综上所述，可认为细胞因子及生长因子在鼻息肉的形成过程中协调统一的发挥着作用。 这些具有强大生物学活性的介质互相作用并维持自身的“永存”。淋巴细胞、肥大细胞、单 核细胞、中性粒细胞、上皮细胞、成纤维细胞及嗜酸粒细胞通过这些生物信号相互沟通并 改变细胞表面粘附因子的表达。 鼻息肉组织中的嗜酸粒细胞 鼻息肉具有典型慢性呼吸道炎症的病理特点。除囊性纤维病及 Kartagener 综合征外， 嗜酸粒细胞是息肉组织中最常见的炎细胞类型。以往认为嗜酸粒细胞在鼻息肉病发病过程 中的主要作用机理是通过释放多种介质，如嗜酸粒细胞过氧化物酶 （eosinophilperoxidase,EPO）患者，此外多种病理状态，如变应性，嗜酸细胞源神经毒素（eosinophilderivedneurotoxin,EDN）患者，此外多种病理状态，如变应性，嗜酸粒细胞阳离子蛋白 （eosinophilcationicprotein,ECP）患者，此外多种病理状态，如变应性等引起细胞及组织损伤。近年来研究表明嗜酸粒细 胞，特别是鼻息肉组织中的嗜酸粒细胞，可以合成、释放多种强有力的调节分子——细胞 因子，如 GM-CSF、TNF-α、TGF-β、IL-3、IL-4、IL-5、CD40 等［12］。其中部分因 子，如 GM-CSF，TNF-α 及 IL-4，可以直接或间接地反过来促进嗜酸粒细胞的集聚及活化 ［15］，IL-3、IL-5、GM-CSF 还具有抑制嗜酸粒细胞凋亡的作用。具有促进嗜酸粒细胞 的集聚、活化作用的因子还有 IL-8、RANTES、P-选择蛋白［15-16］。此外，TGF-α 和 TGF-β 在鼻息肉组织结构形成中起到一定作用。以上研究表明嗜酸粒细胞通过多种方式调 节上呼吸道炎症过程，且部分地解释了嗜酸细胞自我“永存”的分子机理。 尽管鼻息肉病组织中嗜酸粒细胞的自我“永存”机理十分复杂，但上述研究提示，鼻息 肉病发病早期，自分泌和旁分泌刺激引起慢性炎症及不可逆性组织结构改变之前，需大剂 量类固醇药物抗炎治疗呼吸道嗜酸粒细胞炎症性疾病。 鼻息肉病的发病机理 鼻息肉病的发病与多种因素有关，如遗传因素、免疫缺陷、纤毛功能障碍、Young 综 合征、阿司匹林耐受不良等，因此可认为许多原因都可能致病或者多种因素联合致病。 鼻息肉生长早期可发现一些特殊的长管状腺体，这些腺体与正常的浆液粘液性腺体具 有完全不同的结构、形状及大小。尽管关于鼻息肉病的发病机理存在数种假说，但无一种 假说能圆满地解释此种长管状腺体的组织学起源。 目前得到多数学者认同的是鼻息肉形成的“上皮破裂理论”。Tos 等［17］自 1977 年 起对鼻息肉形成的机理进行了系列研究。他推测息肉形成最初是水肿的粘膜固有层压力增 大导致上皮破裂，粘膜固有层突出上皮破损处，粘膜上皮通过破损边缘向中心生长趋于覆 盖破损处。如果再生的上皮生长速度不足以覆盖疝出部位，或者粘膜固有层疝出部位继续 生长，鼻息肉及其蒂将就此形成。如果小的带蒂的鼻息肉已经形成，这时即使疝出部位彻 底上皮化，鼻息肉亦不会消失。而且，由于重力的作用，息肉将继续生长。在鼻息肉上皮 化及生长的过程中，以上所描述的长管状腺体将同时形成，并且提示鼻息肉绝非只是鼻粘 膜的疝出。为更透彻地理解此假说，Tos 将息肉的形成分为以下几期：①鼻粘膜细胞浸润 或炎性水肿导致组织压力增高，进而上皮损伤、坏死、破裂，粘膜固有层疝出；②疝出部 位的上皮化；③腺体形成；④因重力作用息肉增大，腺体拉长；⑤已发育成熟的鼻息肉的 上皮及基质发生变化，如假复层上皮转化为复层上皮、杯状细胞及纤毛细胞密度的变化、 浸润细胞类型的变化以及基质水肿等。其中前 2 期很难在人鼻中得到证实，但 Tos 等通过 建立实验性大鼠急性中耳炎和长期鼻咽管阻塞模型，证明了感染过程中确实发生了上皮细 胞坏死［18］。 Bernstein 等［19,20］近年来的研究进一步地发展了“上皮破裂理论”并形成了“多种 因素发病学说”。其内容为，鼻腔外侧壁的空气动力学变化，细菌、病毒以及变应性疾病等 多种因素均可作用于鼻腔外侧壁粘膜，引起粘膜的炎症反应。继之按 Tos 等的“上皮破裂理 论”，开始上皮破裂、粘膜疝出、再上皮化、新腺体形成、鼻息肉形成。此时，鼻息肉组织 中的结构细胞，如上皮细胞，成纤维细胞，均有合成 GM-CSF 和 G-CSF 信使 RNA 的能力。 这 2 种细胞集落刺激因子可促进组织内嗜酸粒细胞、肥大细胞、中性粒细胞的集聚。这些 炎性细胞分泌多种炎性介质，其中部分介质还可通过正反馈作用进一步促进自身的分泌。 存在于鼻息肉组织内的炎症反应可影响鼻息肉表面粘膜上皮细胞 Na+、Cl离子转运，即 细胞 Na+吸收增多，Cl分泌增多。最终导致进入细胞及间质的水分增多，细胞及间质水 肿，鼻息肉组织得以维持并增长。 近年来研究表明，VEGF 血管通透性作用强于组织胺 50000 倍，而鼻息肉病组织中 VEGF 表达显著强于鼻甲，提示 VEGF 在鼻息肉病的组织水肿发生机制亦具有重要意义 ［10］。 摘要：目的：研制一种新型有效的牙周抗菌制剂，以代替常规用药。方法：用琼脂稀 释法做几种口腔常见菌对大黄总蒽醌和大黄酸标准品的敏感性试验。甲壳胺对口腔常见菌 的凝集试验。用龋活性试验做甲壳胺对变形链球菌的解吸附试验。用钢管法做大黄滴剂对 口腔常见菌的抑菌试验。结果：大黄总蒽醌和大黄酸标准品对口腔常见菌都有不同程度的 抑菌作用。甲壳胺除对齿双歧外，对其他口腔常见菌均有凝集作用。甲壳胺对变形链球菌 有解吸附作用。成品大黄滴剂对口腔常见菌有抑菌作用。结论：大黄滴剂有明显抑菌作用。 牙周病是由牙菌斑引起的牙齿周围组织的慢性破坏性疾病，选择有效的抗菌药物控制 引起牙周病的菌斑，收到明显疗效。但目前治疗牙周病的抗菌药物多局限于抗生素类的化 学制剂，而对中药的研究甚少。我们利用中药大黄的明显抗厌氧菌作用和甲壳胺配伍制成 中药大黄滴剂，旨在提出一种新的牙周抗菌制剂。现就其主要实验室研究报告如下。 1 材料与方法 1.1 标准菌株和培养条件 1.1.1 标准菌株选用北京口腔医学研究所微生物室保存的国际标准菌株。牙龈卟啉菌 P381 和 ATCC33277，粘性放线菌 ATCC19246，中间型普氏菌 ATCC25261，具核梭 形菌 ATCC10953，伴放线放线杆菌 Y4，变形链球菌 c 型和 d 型，中间型链球菌 ATCC27335，齿双歧 ATCC27534。 1.1.2 培养条件变形链球菌和中间型链球菌在 MSA 培养基中微需氧培养 2 天，余菌株 在 CDC 培养基中厌氧培养 5 天。 1.2 主要试剂 1.2.1 大黄总蒽醌北京制药研究所提供。 1.2.2 大黄酸标准品中国药品生物制品检定所，0757-9703。 1.2.3 甲壳胺取比度 0.78 粘度 45cps 灰分 0.8%。 1.2.4 大黄滴剂北京口腔医院药房配制。 1.3 实验方法 1.3.1 大黄对牙周致病菌的抑菌试验取大黄总蒽醌和大黄酸标准品，用琼脂稀释法 ［1］做细菌敏感性试验。 1.3.2 甲壳胺的凝集试验将各菌接种在相应的液体培养基中，内含一定浓度的甲壳胺， 培养后观察各菌生长情况。 1.3.3 甲壳胺对变形链球菌的解吸附试验用龋活性试验方法，将标准板浸入含变形链 球菌的液体培养基中，经 48 小时培养后，将有变形链球菌附着的板再浸到含甲壳胺的溶 液中，连续观察附着的变形链球菌从板上的脱落情况。 1.3.4 大黄滴剂的体外抑菌实验取成品大黄滴剂，按倍比稀释的原则，稀释为原液的 100%、50%、25%、12.5%和 6.25%。用钢管法分别加入到各菌的菌平皿中，培养后 观察抑菌结果。 2 结果 2.1 大黄抑菌试验测定结果大黄总蒽醌和大黄酸标准品的抑菌效果大致相同，除对变 形链球菌、中间型链球菌和伴放线放线杆菌无作用外，对口腔其他常见菌均有作用。对牙 龈卟啉菌 ATCC33277 和中间型普氏菌 ATCC25261 作用最强，大黄总蒽醌浓度在 1.4μg/mlg/ml，大黄酸标准品浓度在 4.17μg/mlg/ml 时都有抑菌作用。 2.2 甲壳胺凝集结果甲壳胺除对齿双歧 ATCC27534 无凝集作用外，对口腔其他常见 菌都有不同程度的凝集作用。 2.3 甲壳胺解吸附试验结果甲壳胺对附着的变形链球菌有一定解吸附作用，这一作用 的最有效浓度是 5mg/ml。应用甲壳胺后 10min 开始起作用，60min 后使附着的变形链 球菌完全脱尽。 2.4 大黄滴剂的体外抑菌实验结果大黄滴剂对口腔常见菌有明显抑菌作用，即使稀释 至原液的 1/16 仍有作用。 3 讨论 在我国应用大黄治疗疾病已有悠久的历史。大黄有广谱抗菌作用，大黄中起抗菌作用 的有效成分为蒽醌衍生物，而蒽醌衍生物中有抑菌作用的成分为大黄酸、大黄素和芦荟大 黄素。王文风等［2］报告，大黄蒽醌衍生物对临床常见的 100 株厌氧菌有较强的抑制作 用。我们利用大黄的明显抗厌氧菌作用，尤其是对脆弱类杆菌、产黑色素类杆菌敏感的特 性，制成中药抗菌药物，治疗牙周疾病。 用琼脂稀释法做几种口腔常见菌对大黄总蒽醌和大黄酸标准品的敏感性，发现二者的 抑菌效果基本相同，对牙周致病菌都有不同程度的抑制作用，尤其是对牙龈卟啉菌 ATCC33277 和中间型普氏菌 ATCC25261，即使浓度在 1.4μg/mlg/ml 都有抑菌作用。但大 黄对变形链球菌、中间型链球菌和伴放线放线杆菌无抑菌作用，说明对由伴放线放线杆菌 引起的青少年牙周炎可能无作用，而对厌氧菌引起的牙周炎作用较好。 甲壳胺做为一种生物多糖高分子物质，因其可溶性、成膜性、可吸收性和生物相容性， 在药剂中作为填充剂、黏合剂、薄膜包衣材料、缓释控释材料等在医学上研究很多 ［3］。近年来，在口腔方面的应用也渐渐受到重视。甲壳胺除对齿双歧无凝集作用外， 对其他口腔常见菌均有凝集作用。这样，甲壳胺就可把牙周袋内的细菌凝集沉淀在牙周袋 的局部，然后局部针对性用药，而无需在整个牙周袋内达到高浓度。这是甲壳胺做为缓释 控释制剂的特性。