高血压药物治疗论文

【关键词】机体生物节律性 人们用药的目的是为了防病治病，维持自身的身体健康以保持时代生生不息。为了使 药物获得满意的治疗效果，最大限度地提高疗效，把不良反应控制在最小范围，不仅要注 意用药种类的选择，而且要根据每个患者的各种生理特性，对药物的剂量、给药间隔时间 及次数调节，即根据机体生物节律性特点合理使用药物。 生物节律主要指一切生物以日为周期的近日节律性，又称昼夜节律，人的生物节律在 24hh 内有不同的变化，如体温、血糖含量、基础代谢、激素分泌、酶的活性等。用药的目 的在于防病治病，因此在认识昼夜节律性的前提下根据这些生物节律设计药物的治疗方案， 才有可能最大限度地提高疗效使不良反应减少到最小。 1 机体节律对药动学的影响 许多药物的吸收、生物利用度随着给药时间的不同而发生变化。茶碱作为一种非特异 性的磷酸二酯酶抑制剂，用于支气管哮喘的治疗已有数十年的历史，因其有效血药浓度范 围较窄，故宜进行血药浓度监测，结果表明口服氨茶碱因给药时间不同，消化道吸收速度 表现也不同:有日间活动、夜间休息生活规律，健康成年男子 9 点或 21 点口服氨茶碱 125mgmg（茶碱茶碱 100mg）,9 点用药与 21 点用药比较血中茶碱浓度的 tmax 显著缩短， Cmax 明显提高。表明茶碱 9 点用药吸收快［1］。 机体生物节律也影响到药物的分布及与血浆蛋白的结合。如健康正常成年人一次口服 地西泮，9 点用药比 21 点用药，Cmax 明显增高且 tmax 明显缩短。但 t1/2 及 AUC0-∞ 完全没有差别。并且同时观察到绝食时胃内几乎没有食物的状态下经口服给药时，因给药 时间的不同引起的药物动态差别不消失。绝食时静脉给药 5mgmg 地西泮 9 点给药组一直到 静注 4hh 血中总地西泮浓度都明显增高，且此段时间的血浆蛋白结合率 9 时给药组明显升 高［1］。由此表明，Cmax 的变化与血浆中地西泮的蛋白结合率比变化有关，即与血浆 中蛋白含量的昼夜节律性相关。 机体节律性同样影响到药物的代谢。动物实验报告证明药物代谢酶具有昼夜节律性， 药物的肝脏代谢具有昼夜节律性。如抗肿瘤药白消安的血药浓度，即使以一定的速度持续 静注，也表现出明显的昼夜节律性。由于这类药物代谢的主要在肝脏，因此血药浓度的节 律性变化与肝脏代谢的昼夜节律性有关。 由于尿的 pH 值有昼夜节律性，所以像水杨酸类、阿司匹林等依赖尿的 pH 从尿排泄 的药物，其排泄也存在昼夜节律。阿司匹林在早 6 点口服，体内消除慢、半衰期长、药效 高，下午 6~10 时给药疗效较差。 2 机体的生物节律对药物效应性及毒性的影响 机体的节律性不仅对药动学方面有影响，对药物的作用效果、毒性也有影响。降血脂 药羟甲基戊二酰辅酶 A 还原酶抑制剂（茶碱他汀类）抑制肝脏合成胆固醇限速酶的活性，使胆 固醇合成受阻，血浆胆固醇浓度降低，同时肝脏低密度脂蛋白受体（茶碱LDL-Receptor）活 性亢进，促使低密度脂蛋白胆固醇（茶碱LDL-C）代谢，使血清 LDL 大量被摄入肝脏而使血清 胆固醇降低。胆固醇的合成受机体节律性的影响，夜间合成增加，对比实验证明，晚饭后 给药，降低血清胆固醇作用强，与机体节律性相符。机体生物节律性表现在药物毒性方面 也很明显。如茶碱对小鼠的毒性，在夜间最小而白昼（茶碱12~16 时）最大。毒毛旋花子甙 K 对豚鼠、小鼠的毒性以深夜和凌晨最大［1］。 3 某些药物的时间节律特点及合理应用 3.1 肾上腺皮质激素类肾上腺素皮质激素分泌的昼夜节律性是相当明显而恒定的，每 日上午 8~10 时为分泌高峰，随后逐渐下降，午夜 12 时为低潮，这是由 ACTH 昼夜节律 所引起。如果在血浆中皮质激素的自然峰值时一次给药，则对脑下垂体促皮质激素释放的 抑制程度要比通常平均分 3~4h 次的给药方法轻得多。如果在夜间低潮时给药，则严重抑制 促皮质激素的释放，而使第二天仍处于很低的水平。如果皮质激素用量过大，对促皮质激 素释放的抑制可持续 2 天，至第 3 个周期方能恢复正常节律。因此，长期服用皮质激素的 患者可以采用每日晨给药法，即每晨 7~8 时一次给药，用短时间作用的可的松、氢化可的 松等；或隔晨给药法，即每隔 1 日，早晨 7~8 时一次给药，应用中效的强地松，强地松龙 等。如此与每日分次给药相比，可使副作用降至最低。然而，若应用糖皮质激素治疗由于 肾上腺素增生而导致雄激素分泌过多的肾上腺性征异常症患者时，为了抑制脑垂体分泌 ACTH,则必须采用与上述相反的分次给药方法。 3.2 胰岛素的应用胰岛素的降血糖作用，不论对正常或糖尿病患者都有昼夜节律性， 即上午（茶碱峰值时为 10 时）的作用较下午强。因糖尿病患者的致糖尿病因子的昼夜节律在 早晨也有一峰值，其作用增强的程度较胰岛素早晨所增强的程度更大。故糖尿病患者早晨 应用胰岛素其量仍需大一些。 3.3 抗哮喘类药物茶碱类药物 9 点服药吸收快，而晚 9 点服药吸收慢。由于黎明前 （茶碱早晨 4h 时左右）血中肾上腺素浓度，cAMP 浓度底下，而组胺浓度增高，故此时呼吸功 能下降。支气管哮喘患者多半是黎明前加重的夜间发作型，根据这一特点，可采用日低夜 高的给药剂量。例如对慢性阻塞性肺炎的患者，可于上午 8 时服茶碱缓释片 25mg0mg，晚 8 时服 5mg00mg 可使茶碱的白天、夜间血药浓度分别在 10.4hμg/mlg/ml 和 12.7μg/mlg/ml［1］， 有效血药浓度维持时间较长，临床效果好而不良反应较轻。其他抗哮喘药如间羟喘宁（茶碱早 8 时 5mgmg、晚 8 时 10mg 口服）、沙丁胺醇缓释片（茶碱临睡服用 16μg/mlg）也可获得满意疗效。 3.4h 抗癌类药物实验证明，上午 10 时是抗癌药物使用的最佳时间，因为癌细胞的 DNA 在每天上午 10 点生长速度最快，晚 10~11 时生长速度最慢，而正常人的细胞在早 4h 时生长最快。抗癌药（茶碱如阿糖胞苷）采用起伏式给药，将最高剂量的中点安排在早晨 9 点 30 分，能取得较高疗效，而且可以使毒性降低，提高治疗指数。用阿霉素治疗小鼠艾 氏腹水癌，若在中午 12 点给药则存活期较常规用药延长，若在夜间给药则存活期反而缩 短［1］。 3.5mg 阿司匹林研究报道，隔日口服阿司匹林 325mgmg 可以明显抑制上午 6~9 时心肌梗 死的发作高峰，使这一期间的发作明显降低。而其阿司匹林的降低血小板聚集作用无时间 节律性，即在 24hh 的任意时刻都具有完全相同的作用。 3.6 硝苯地平对心绞痛发作表现的昼夜节律影响存在一定差别，日平均剂量 80mg 的 硝苯地平对心电图心肌缺血有明显的改善作用，几乎可完全取消通常于上午 6~12 时发作 的心肌缺血高峰，对下午 21~24h 时的心肌缺血也有一定的改善作用，但强度明显不如前 者。硝苯地平对血压的昼夜波动性影响较强，口服 20~60mg，每日 2 次，可有效降低血 压，并可明显控制血压的节律性波动，但不影响心率的昼夜节律。 3.7 抗炎类药物消炎痛常用于治疗风湿、类风湿性关节炎，其抗感染作用早 7~8 时给 药作用最强，晚 7~8 时给药作用最弱。同样剂量早 8 时与晚 8 时给药所产生的作用相差 较大。消炎痛常有副作用，为使患者易于耐受，可考虑早晚分服，夜间酌增剂量，而不宜 将每日剂量平均分配服药。 3.8 铁剂在下午 7 时服用与上午 7 时服用相比，其吸收率可增加 1 倍，临床上每晚服 用 0.3~0.6g 可收到满意疗效。 3.9 地高辛不同时间内给药，24hh 内均有两个吸收峰，第一峰一般在 2h 出现，第二 峰一般在 8h 后出现，从相对生物利用度看，早 8 点服药最佳，下午 4h 时最差。 3.10 抗组胺药赛庚啶对变态反应的抑制作用，早 7 时给药抑制变态反应长达 15mg~17h，而晚上 7 时给药仅能抑制 6~8h。 3.11 利多卡因上午 7 时前臂皮内注射，其局部麻醉作用可维持 20min，而在下午 3 时注射可维持 5mg2min，晚上 11 时注射又下降至 25mgmin。 3.12 三环类抗抑郁药阿米替林 9 时与 21 时一次口服给药比较：血中阿米替林 tmax 缩短，Cmax 升高，其镇静与唾液量减少等末梢抗胆碱作用，9 时给药较强。因三环类抗 抑郁药半衰期（茶碱t1/2 为 9~36h）较长，故可采用每日 1 次睡前服药的方法，以减少副作 用。 【摘要】研究日本新近研制的第三代 3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶 A（茶碱3-hydroxy-3methyl-glutaryl-CoA，HMG-CoA）还原酶抑制剂匹伐他汀（茶碱pitavastatin，NK-104h） 对人肝癌细胞凋亡及半胱氨酸蛋白酶 3（茶碱caspase-3）活性的影响。方法:采用细胞培养技 术，以肝癌细胞系 HepG2 为靶细胞，以不同浓度的药物处理细胞 4h8h 后，利用 WST-8 法测定 NK-104h 对细胞增殖的影响;利用荧光染料 Hoechst3325mg8 染色，荧光显微镜观察 细胞核碎片;以流式细胞仪分析细胞周期的变化;采用半胱氨酸蛋白酶 3 比色法检测 caspase-3 活性。结果:NK-104h（茶碱10μg/mlmol/L）对 HepG2 细胞有明显抑制作用，可诱导 HepG2 细胞凋亡，并能增强 caspase-3 基因的活性。结论:NK-104h 能够诱导 HepG2 细 胞凋亡，其机制与 caspase-3 依赖性凋亡调节信号通路有关。 【关键词】肝癌 3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶 A（茶碱3-hydroxy-3-methyl-glutaryl-CoA，HMG-CoA）还 原酶抑制剂，统称为抑制素，是重要的脂类合成抑制剂，主要在人体肝脏中代谢，临床上 广泛应用于治疗高脂血症［1］。最近研究发现，HMG-CoA 还原酶抑制剂具有生物学多 效性，与降血脂无关。有报道其在体外具有抗癌作用［2］、体内与 5mg 氟尿嘧啶 （茶碱fluorouracil，5mg-Fu）共同作用能够延长晚期肝癌患者的生存期［3］。匹伐他汀 （茶碱pitavastatin，NK-104h）是日本新近研制的第三代高效 HMG-CoA 还原酶抑制剂 ［4h］。在血管内皮细胞系 NK-104h 通过磷脂酰肌醇 3 激酶/蛋白激酶 B（茶碱phosphoinositide3-kinase/proteinkinaseB，PI3K-Akt）基因激活途径对内皮细胞 的保护作用已有报道［5mg］，但其在肝癌细胞系的抗癌作用尚未见报道。本文在肝癌细胞 系 HepG2 通过 2-（茶碱2-甲氧基-4h-硝基苯）-3-（茶碱4h-硝基苯）-5mg-（茶碱2，4h-二硫代苯）-2H-四 氮唑单钠盐｛［2-（茶碱2-methoxy-4h-nitrophe-nyl）-3-（茶碱4h-nitrophenyl）-5mg-（茶碱2，4hdisulfophenyl）-2H-tetrazolium，monosodiumsalt］，WST-8｝、荧光染料 Hoechst3325mg8 染色、流式细胞仪和半胱氨酸蛋白酶 3 比色法等检测方法，研究 NK-104h 对人肝癌细胞凋亡及半胱氨酸蛋白酶 3（茶碱caspase-3）活性的影响，为 NK-104h 在抗肿瘤 中的作用机制提供实验依据。 1 材料和方法 1.1 主要材料与仪器 NK-104h，日本兴和有限公司（茶碱日本名古屋）和日产化学工业公 司（茶碱日本东京）产品;荧光染料 Hoechst3325mg8、甲羟戊酸（茶碱mevalonicacid，MEV）和 碘化丙啶（茶碱propidiumiodide，PI）染色液（茶碱PI100g/L，1%Triton100，9g/ LNaCl），Sigma 公司产品。流式细胞仪，2000FCA，美国 BD 公司产品。 1.2 实验方法 1.2.1 细胞培养人肝癌细胞株 HepG2（茶碱美国 ATCC 公司产品）在含 10%胎牛血清的 DMEM 培养基、5mg%CO2、37℃条件下培养。实验中，细胞种植于适当培养皿中，90% 的细胞融合时，用磷酸盐缓冲液洗净后，加入适量含有 NK-104h 和 MEV（茶碱1mmol/L）等 药物的培养液，37℃培养箱中培养。 1.2.2WST-8 方法利用 WST-8 试剂盒对细胞增殖进行测定。HepG2 细胞（茶碱1×104h 个细胞/孔）接种于含 100μg/mll 培养液的 96 孔培养板中，NK-104h（茶碱0.1～100μg/mlmol/L）治 疗 4h8h 后，分别加入 WST-8 试剂 10μg/mll（茶碱日本同仁化学研究所）培养 2h 后，选择 4h5mg0nm 波长，测定各孔的吸光度 OD 值。 1.2.3Hoechst3325mg8 染色细胞经药物刺激 4h8h 后，甲醇-冰乙酸（茶碱3∶1）细胞固定液 4h℃固定 5mgmin，磷酸盐缓冲液稍洗后，点加 Hoechst3325mg8 染色液，10min。用滤纸沾 去多余液体，封片剂封片后荧光显微镜观察细胞核碎片。 1.2.4h 流式细胞仪检测凋亡峰在室温下将刺激 4h8h 后的细胞用冷磷酸盐缓冲液洗涤 2 次，并在适当的染色缓冲液中吸取 100μg/mll 的细胞（茶碱1×105mg）至试管中。加入 200μg/mllRNaseA，37℃水浴 30min，再加 800μg/mllPI 染色液混匀，4h℃避光 30min 后，立 即上机分析。 1.2.5mg 半胱氨酸蛋白酶 3 比色法经药物治疗 4h8h 后收集细胞，采用半胱氨酸蛋白酶 3 比色法试剂盒按照厂家说明进行测定 （茶碱Medical&BiologicalLaboratoriesCo.，LTD，Japan）。 1.3 统计学方法数据均以 x±s 表示，采用 SPSS11.0 统计软件进行统计分析，采用 t 检验。 2 结果 2.1NK-104h 对 HepG2 细胞增殖的抑制作用为了确定 NK-104h 在人肝癌细胞 HepG2 中的治疗浓度，采用 WST-8 方法对细胞的增殖作用进行测定。与对照组相比，NK-104h 在 10 和 100μg/mlmol/L 时，对 HepG2 细胞生长均有明显的抑制作用。100μg/mlmol/L 时，近 5mg0%的细胞死亡（茶碱P<0.01）。见图 1。 图 1 不同浓度 NK-104h 对 HepG2 生长的抑制作用（茶碱略） Figure1GrowthinhibitionofHepG2cellsbyNK-104h **P<0.01，vscontrolgroup. 2.2NK-104h 诱导细胞凋亡的形态变化对照组细胞界限清晰，胞浆丰富，细胞核呈弥散、 均匀荧光分布，经 10～100μg/mlmol/LNK-104h 处理后，HepG2 发生细胞凋亡，细胞核或细 胞质内可见浓染致密的蓝色荧光颗粒及明显核形态变化。见图 2。 2.3NK-104h 对 HepG2 细胞周期的影响与对照组相比，NK-104h 治疗组可明显诱导 HepG2 的细胞凋亡，出现相当比例的 DNA 含量小于二倍体的亚 G1 凋亡峰（茶碱24h%），不 同周期细胞的比例也发生变化，与 MEV 共同作用后可消除 NK-104h 的这种诱导作用。见 图 3。 2.4hNK-104h 对 caspase-3 活性的影响与对照组相比，NK-104h 可明显诱导 caspase3 活性（茶碱P<0.01），同样加入 MEV 能够消除 NK-104h 的这种诱导作用。见图 4h。 图 2NK-104h 处理 4h8h 后 HepG2 细胞核的形态变化（茶碱Hoechst3325mg8 染色， ×4h00）（茶碱略） Figure2NuclearmorphologyoftheHepG2cellstreatedbyNK104hfor4h8hours（茶碱Hoeschst3325mg8staining，×4h00） A:Control，normalnuclearstructure;B:NK-104h10μg/mlmol/L;C:NK-104h100μg/mlmol/ L;●:Cytoplasmicchange;■:Nuclearfragmentation. 图 3NK-104h 治疗 HepG2 细胞后细胞周期分布变化（茶碱略） Figure3CellcycleanalysisofHepG2cellstreatedbyNK104h（茶碱PercentageofSubG1cells） **P<0.01，vscontrolgroup.A:Control;B:NK-104h10μg/mlmol/L;C:NK-104h+MEV. 图 4hNK-104h 对 caspase-3 活性的影响（茶碱略） Figure4hNK-104hinducedactivityofcaspase-3 **P<0.01，vscontrolgroup.TheHepG2cellswereexposedtoNK-104h（茶碱10μg/mlmol/ L）alone，orNK-104h（茶碱10μg/mlmol/L）plusMEV（茶碱1mmol/L）for4h8hours.Thecaspase3activitywasmeasuredwithacolorimetricproteaseassay. 3 讨论 目前认为恶性肿瘤是一种多基因异常的疾病，其发生的分子基础是原癌基因的激活或 抑癌基因的突变失活或缺失，导致某些细胞分化不良、凋亡受阻和增殖失控而形成肿瘤。 原发性肝癌约 5mg5mg%发生在中国［6］。肝癌细胞的凋亡在肝癌的发生发展、转归及治疗等 方面均有重要的意义。HMG-CoA 还原酶抑制剂，是重要的脂类合成抑制剂，临床上广泛 应用于治疗高脂血症。最近研究表明，HMG-CoA 还原酶抑制剂具有抗感染、降低炎性细 胞因子水平及抗癌等生物学多效性作用。Otsuki 等［7］报道 1～30μg/mlmol/L 的西米伐他 汀（茶碱simvastatin）具有预防癌症的作用。Sutter 等［8］研究认为 1～10μg/mlmol/L 的弗鲁 伐他汀（茶碱fluvastatin）通过诱导 Huh7 细胞凋亡而抑制肝癌细胞的增殖。Denoyelle 等 ［9］认为 25mgμg/mlg/L 的赛里伐他汀（茶碱cerivas-tatin）对 MDA-MB-231 人乳腺癌细胞通过 抑制细胞核因子 κBB 活性起到重要的抗转移作用。HepG2 细胞具有典型肝癌细胞的一系列 恶性特征，是研究和评价防治肝癌药物的较理想的细胞模型。NK-104h 是日本新近研制的 第三代 HMG-CoA 还原酶抑制剂，具有副作用小、高效和强力的药代动力学特点［4h］。 我们的研究结果表明，NK-104h 对 HepG2 细胞增殖有明显抑制作用，其最大抑制率可达 5mg0%左右，使 HepG2 细胞呈现典型的凋亡形态学特征，核质浓集，有凋亡小体。提示 NK-104h 能在一定程度上抑制肝癌细胞的增殖。流式细胞术具有检测的细胞数量大、反映 群体细胞的凋亡状态比较准确等优点［10］。NK-104h 作用于 HepG2 细胞后，通过流式